麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠炎性损伤的影响

目的:探究麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性损伤的影响。方法:将大鼠分为对照组、模型组、麦冬皂苷D低剂量组、麦冬皂苷D高剂量组和麦冬皂苷D高剂量+H-89(cAMP抑制剂)组。检测大鼠质量和大鼠结肠长度;酶联免疫吸附法检测血清IL-17、IL-6、IL-10、TNF-α、cAMP水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例;HE染色检测结肠组织病理损伤;Western blot检测大鼠结肠组织中Bax、Bcl-2以及cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果:治疗结束后,与对照组相比,模型组大鼠结肠组织显著损伤,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著降低,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,麦冬皂苷D低、高剂量组大鼠结肠组织显著减轻,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著升高,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);H-89可部分逆转麦冬皂苷D对炎症性肠病大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论:麦冬皂苷D可降低IBD大鼠炎症反应和结肠组织损伤,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路实现的。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨固本止咳方治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期小鼠的作用机制

目的基于环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路探讨固本止咳方(GBZK)治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期小鼠的作用机制。方法60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、GBZK组、地塞米松组,除对照组外,其余组均使用烟草烟雾暴露联合脂多糖复制COPD稳定期小鼠模型。造模成功后,GBZK组予GBZK 0.2 mL/d灌胃,地塞米松组予1.0 mg/kg地塞米松注射液腹腔注射,2次/d,所有小鼠均给药28 d。观察各组小鼠一般情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肺组织匀浆cAMP水平,利用Western blot检测小鼠肺组织匀浆中cAMP、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达情况。结果与模型组比较,GBZK组小鼠的喘息气促有所改善,肺组织匀浆中cAMP含量及cAMP、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达均提高(P<0.05)。结论固本止咳方可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路,进而发挥对COPD稳定期小鼠的保护作用。

益气逐瘀解毒颗粒对肝纤维化模型大鼠GIV及下游信号通路PKA/CREB表达的影响

目的观察益气逐瘀解毒颗粒对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl 4)诱导的肝纤维化模型大鼠的抗纤维化作用及其对与Gα相互作用的囊泡相关蛋白(Gα-interacting vesicle-associated protein,GIV)、下游信号通路蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)表达水平的影响并探讨其作用机制。方法SD雄性大鼠予以CCl 4橄榄油混合物腹部皮下注射7周诱导肝纤维化模型,造模成功后随机分为益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组,扶正化瘀组及模型对照组,另设阴性对照组,共6组,每组大鼠8只。益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组分别予益气逐瘀解毒颗粒10.8 g/(kg·d)、5.4 g/(kg·d)、2.7 g/(kg·d)灌胃给药,扶正化瘀组予扶正化瘀胶囊0.405 g/(kg·d)灌胃给药,其余组等量蒸馏水灌胃,持续5周后处死大鼠收集标本。检测外周血丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);肝组织苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)、MASSON染色检测肝纤维化程度;免疫组化法检测肝组织α-平滑肌激动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)含量,并采用实时荧光定量PCR法(real time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原α1链(collagen type I alpha 1 chain,Col1A1)、Ⅰ型胶原α2链(collagen type I alpha 2 chain,Col1A2)、GIV、PKA、CREB mRNA和蛋白表达水平。结果益气逐瘀解毒颗粒可减少肝纤维化模型大鼠胶原纤维增生及肝细胞损伤,且与模型对照组相比,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组α-SMA含量显著下降(P<0.05),Col1A1、Col1A2、GIV表达显著下调(P<0.05),益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组PKA表达上调(P<0.05),中剂量组CREB表达显著上调(P<0.05);与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组α-SMA含量显著下降(P<0.05),高剂量组GIV表达下调(P<0.05),中剂量组PKA表达上调(P<0.05)。结论益气逐瘀解毒颗粒对CCl 4诱导的肝纤维化模型大鼠具有抗肝纤维化作用,可能与调节GIV表达及其下游信号通路PKA/CREB的表达有关。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元的影响

目的探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为假手术组,取50只SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、多奈哌齐组及醒脑益髓汤低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,多奈哌齐组给予0.45 mg/mL的多奈哌齐溶液灌胃,醒脑益髓汤低、中、高剂量组分别给予0.98 g/mL、1.96 g/mL、3.92 g/mL的醒脑益髓汤灌胃,均1次/d,连续30 d。定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cAMP及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,Western blot法检测海马组织中PKA和CREB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显减少(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显延长(P<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显缩短(P<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,多奈哌齐组及醒脑益髓汤各组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显增加(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显缩短(P均<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显延长(P均<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显减少,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);醒脑益髓汤中剂量组各指标改善更明显,与醒脑益髓汤高、低剂量组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减少神经元凋亡有关。

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)分化的影响及作用机制。方法将MC3T3-E1细胞分为正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+特立帕肽组(5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+特立帕肽组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05);与NG组相比,HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比,HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05)。与HG+特立帕肽组相比,HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降(P<0.05),ALP活性减弱(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力减弱(P<0.05),细胞骨架清晰程度下降,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调(P<0.05)。结论特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

咪达唑仑调节cAMP/PKA/CREB通路对乳腺癌细胞的影响

目的 探讨咪达唑仑对乳腺癌MDA-MD-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其对环磷酸腺苷(cyclicadenosine monophosphate,c AMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)信号通路的调节作用。方法 体外培养MDA-MD-231细胞并分为对照组、咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组和咪达唑仑H+Sp-cAMPS组,咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L咪达唑仑处理细胞,咪达唑仑H+Sp-cAMPS组加入20μmol/L咪达唑仑+10μmol/L Sp-cAMPS处理细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测细胞的增殖能力;细胞划痕试验检测迁移能力;Transwell试验测定细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测c AMP的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)技术验证磷酸化(p-)PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达。结果 与对照组比较,咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组细胞呈现凋亡现象,凋亡率显著提高,细胞的增殖、迁移和侵袭能力及c AMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著下降(P<0.05);与咪达唑仑H组比较,咪达唑仑H+Sp-cAMPS组细胞生长状态良好,凋亡率显著降低,细胞的增殖、迁移和侵袭能力及cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制cAMP/PKA/CREB信号通路的激活抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨加味葛根芩连汤对糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响

目的观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响,基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨其治疗糖尿病胰腺损伤的作用机制。方法将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组10只。另取10只m/m小鼠作为空白组。加味葛根芩连汤高、中、低剂量组分别予加味葛根芩连汤31.9、19.1、6.4 g/kg灌胃,二甲双胍组予二甲双胍0.2 g/kg灌胃,空白组和模型组予蒸馏水灌胃,连续12周。给药结束后检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量,TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡情况,RT-qPCR检测胰腺组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达,免疫荧光染色检测胰腺组织TGR5/GLP-1、神经源性分化因子1(NeuroD1)/GLP-1共表达。结果与空白组比较,模型组小鼠FBG、HbA1c含量显著升高(P<0.01),口服葡萄糖耐量显著降低;胰腺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著降低(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠FBG、HbA1c含量显著降低(P<0.01,P<0.05),口服葡萄糖耐量升高(P<0.01);各给药组小鼠胰腺组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠胰腺组织TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著升高(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高剂量组胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论加味葛根芩连汤可能通过激活TGR5调节PKA/CREB/GLP-1信号通路,恢复db/db小鼠胰岛功能,改善胰腺损伤。

天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的:探索天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠80只,剔除后随机分为空白组、模型组、天心解郁组、西药组、疏肝组、温肾组和疏肝健脾组7组,每组10只。除空白组外,其余组别按照慢性利血平诱导抑郁模型的方法造模28 d,造模前30 min给药,分别灌胃给药饮用水、天心解郁水煎液、氟西汀溶液、路优泰溶液、巴戟天寡糖胶囊溶液、舒肝解郁胶囊溶液,给药28 d后对各组大鼠的体质量、行为学指标、血清学细胞因子、脑组织相关靶点进行检测。结果:造模28 d后,与模型组相比,天心解郁组旷场实验水平运动得分、垂直运动得分和总路程的增加(P<0.05),强迫游泳不动时间的缩短(P<0.001),且较温肾组、疏肝组、疏肝健脾组更明显。与模型组相比,天心解郁组和温肾组可以增加大鼠血清内的CAMP含量(P<0.001,P<0.01),其余组别则无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,天心解郁组可以增加皮层内的PKA表达,促进海马内CREB、BDNF、ADRB2蛋白表达。与模型组相比,温肾组可以增加皮层内的PKA水平,其余组别无明显影响。结论:天心解郁方可能通过影响大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,发挥抗抑郁作用,较单纯疏肝、温肾或疏肝健脾的方法,疗效更好,治疗靶点更多元化。

补骨脂甲素介导cAMP/PKA/CREB信号通路调控促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂甲素不同剂量单体对大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:以成骨转化诱导液组作为阳性对照组,小牛血清组为空白对照组,用高、中、低3种剂量补骨脂甲素对大鼠骨髓间充质干细胞分别干预6、9、12 d。ELISA法检测第6、9、12天,大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量;ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂甲素能够上调PKA、CREB mRNA及蛋白表达,补骨脂甲素高剂量组效果最显著。结论:补骨脂甲素能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与cAMP/PKA/CREB信号通路的活化有关。

蒙医不同针刺法对抑郁大鼠前额叶单胺类神经递质及PKA/CREB/BDNF通路的影响

目的观察蒙医不同针刺法对抑郁大鼠前额叶神经递质及蛋白激酶(PKA)活性、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)磷酸化和脑源性神经营养因子(BDNF)表达,探究蒙医不同针法的抗抑郁作用机制。方法将40只雄性Sprague-Dawley大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、蒙医银针组、蒙医三根平衡针组和药物组,每组8只。除空白组外其他组大鼠孤养并给予不可预知的7种不同的应激刺激28 d。其中空白组每笼饲养4只,正常饮水摄食,不给任何刺激;模型组不给予任何治疗;蒙医银针组于每日接受应激刺激前1 h,进行蒙医银针刺激巴达干穴、心穴和黑白际穴;蒙医三根平衡针组的针刺和选穴同蒙医银针组,但每日选取1个穴位给予温针刺激;药物组于每日进行应激刺激前1 h,将盐酸氟西汀以0.9%氯化钠溶液配制成1 mg/mL,按照2 mg/kg体重,灌胃给药。28 d后断头,取大鼠前额叶,采用酶联免疫吸附法和Western blot法检测5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量,PKA活性,CREB磷酸化和BDNF表达水平。结果与空白组比较,造模28 d后模型组大鼠前额叶5-HT、NE、DA含量显著降低(P <0.01),PKA活性、CREB和BDNF表达水平也明显下降(P <0.05)。与模型组比较,蒙医三根平衡针组、药物组大鼠前额叶NE、DA和5-HT的含量明显升高,差异有统计学意义(P <0.05),蒙医银针组大鼠前额叶DA和5-HT的含量明显升高,差异有统计学意义(P <0.05)。与模型组比较,蒙医银针组、蒙医三根平衡针组和药物组大鼠前额PKA活性、CREB和BDNF表达水平显著升高,差异有统计学意义(P <0.05)。结论蒙医不同针法能有效提高5-HT、NE、DA含量、PKA活性及CREB-BDNF的表达,提示蒙医不同针法均有抗抑郁作用。

柴芍安神解郁颗粒对脑卒中后抑郁症大鼠JAK1/STATA3和cAMP/PKA/CREB信号通路调控机制研究

目的:通过复制脑卒中后抑郁症(PSD)大鼠模型,探讨柴芍安神解郁颗粒(CSG)通过调控JAK1/STATA3和cAMP/PKA/CREB信号通路抗PSD的分子机制。方法:取60只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀胶囊组(1.8 mg·kg^-1)、解郁安神颗粒组(0.90生药g·kg^-1)、CSG高剂量组(CSG-H,11.52 g生药·kg^-1)和CSG低剂量组(CSG-L,5.76 g生药·kg^-1),每组10只,采用大脑中动脉线栓栓塞法+慢性不可预知温和应激法(CUMS)复制PSD大鼠模型,各给药组于CUMS干预第1天等容量灌胃给药,连续8周,行大鼠糖水试验后,取血清和海马,测血清炎性因子(IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α)及海马JAK1、STAT3、cAMP效应元件结合蛋白1(CREB1)和蛋白激酶A/B(PRKACA/B)蛋白的表达(WB法)。结果:与空白组比较,模型组的大鼠蔗糖水消耗量和蔗糖水偏好比、脑重量均有显著性减少(P<0.01),大脑指数、海马指数、海马JAK1、CREB1蛋白表达具有显著性减少(P<0.05);血清炎性因子(IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α)均有显著性增加(P<0.01);海马PRKACA/B蛋白有显著性增加(P<0.05);与模型组比较,CSG-L组和CSG-H组大鼠治疗后蔗糖水消耗量、蔗糖水偏好比及海马PRKACA/B、CREB1蛋白均有显著性增加(P<0.01),CSG-L组和CSG-H组大鼠海马JAK1、STAT3蛋白表达均有显著性增加(P<0.01);CSG-H组血清炎性因子均有显著性减少(P<0.05),CSG-L组血清炎性因子(IL-1β、IL-2、IL-6)均有显著性减少(P<0.05)。结论:CSG可能通过下调JAK1/STAT3通路,并上调cAMP/PKA/CREB通路,从而抑制由炎症继发海马神经细胞损伤,促栓塞后大鼠海马神经细胞的存活、再生和损伤后修复,从而改善PSD大鼠抑郁。

5-羟色胺转运体敲除小鼠行为学与其海马PKA/CREB/BDNF信号通路水平变化的研究

目的:研究5-羟色胺转运体(5-HTT)敲除小鼠行为学及其海马蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子(PKA/CREB/BDNF)信号转导通路蛋白表达水平的变化。方法:实验动物分为5-HTT表达消失(5-HTT-/-)、5-HTT表达降低(5-HTT+/-)及野生型(5-HTT+/+)3组,每组10只,通过旷场实验和强迫游泳对3组小鼠探究活动能力以及焦虑、紧张、抑郁等心理行为进行比较评估,Western blotting检测其海马PKA/CREB/BDNF通路蛋白表达水平。结果:旷场实验中5-HTT-/-组的站立次数、水平移动格数、中央区移动格数、中央区进入次数均少于5-HTT+/+组及中央区活动时间短于5-HTT+/+组(均P<0.05),5-HTT+/-组的水平移动格数、中央区移动格数均少于5-HTT+/+组(P<0.05);强迫游泳中5-HTT-/-组小鼠的不动时间长于5-HTT+/-组和5-HTT+/+组,5-HTT+/-组的不动时间长于5-HTT+/+组(P<0.05)。与5-HTT+/+组相比,5-HTT-/-组小鼠海马中蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达均减少(P<0.05),5-HTT+/-组PKA表达减少(P<0.05);与5-HTT+/-组相比,5-HTT-/-组小鼠海马中BDNF表达减少(P<0.05)。结论:5-HTT基因敲除可能导致小鼠海马区PKA/CREB/BDNF信号通路表达水平下调,从而使机体产生焦虑、抑郁、紧张等心理行为问题。

利拉鲁肽通过cAMP/PKA/CREB通路干预2型糖尿病大鼠骨质疏松的机制研究

目的:探讨利拉鲁肽通过环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)通路干预2型糖尿病大鼠骨质疏松的机制。方法:建立2型糖尿病骨质疏松大鼠模型,随机分为模型组、利拉鲁肽组、N-[2-(对溴甲酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺·2HCl水合物(H-89,PKA抑制剂)组和利拉鲁肽+H-89组,每组12只;另取12只SD大鼠设为假手术组。分组处理后,通过微计算机断层扫描术(micro-CT)检测大鼠股骨干骺端显微结构,比较骨矿物质密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积分数(BV/TV)和骨小梁数量(Tb.N);通过骨科生物力学测试评估大鼠股骨生物力学状况,比较最大载荷、屈服载荷和弹性模量;检测大鼠股骨矿盐含量;通过试剂盒检测大鼠血清活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和cAMP水平;通过Western blot法检测大鼠骨组织cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白(p-PKA/PKA和p-CREB/CREB)水平。体外培养大鼠股骨成骨细胞,随机分为对照组、模型组、利拉鲁肽组、H-89组和利拉鲁肽+H-89组,后3组以16.5 mmol/L葡萄糖处理以构建细胞模型。分组处理后,通过CCK-8实验检测细胞活力;通过试剂盒检测细胞cAMP水平;通过Western blot法检测细胞cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白(p-PKA/PKA和p-CREB/CREB)水平。结果:与假手术组(对照组)相比,模型组大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、最大载荷、屈服载荷、弹性模量、骨矿盐含量,血清CAT、GSH-Px及cAMP水平,细胞活力、细胞cAMP水平、骨组织及细胞p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低(P<0.05),ROS和MDA水平显著升高(P<0.05)。与模型组及利拉鲁肽+H-89组分别相比,利拉鲁肽组大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、最大载荷、屈服载荷、弹性模量、骨矿盐含量,血清CAT、GSH-Px及cAMP水平,细胞活力、细胞cAMP水平、骨组织及细胞p-PKA/PKA和p-CREB/CREB均显著升高(P<0.05),ROS和MDA水平均显著降低(P<0.05);H-89组上述指标均呈相反改变(P<0.05)。结论:利拉鲁肽可激活cAMP/PKA/CREB信号通路,进而清除高糖诱导的ROS,降低2型糖尿病大鼠氧化应激水平,提高其骨生物力学性能及骨矿化,缓解骨流失,减轻大鼠骨质疏松症状。

低氧预处理通过调控PKA/CREB及JAK1/STATA3信号通路减轻低氧暴露力竭运动小鼠心肌损伤

目的建立低氧暴露力竭运动小鼠模型,探究低氧预处理(HPC)减轻低氧暴露力竭运动小鼠心肌损伤的分子学机制。方法40只小鼠随机分为对照组(Con组)、模型组(MG组)、低氧预适应1组(HP1组)及低氧预适应2组(HP2组),采用低氧干预+力竭游泳实验建立低氧暴露运动模型。MG组小鼠进行低氧条件下力竭游泳实验建模,HP1组低氧力竭游泳造模前给予低氧预适应刺激,HP2组造模同时给予重复低氧预适应刺激,连续8周。末次实验后小鼠取血及心肌组织,ELISA法检测血清谷丙转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,实时定量PCR和Western Blot技术检测心肌组织HIF-1αmRNA表达及PRKACA/B、CREB1、JAK1、STATA3蛋白表达。结果与Con组比较,MG组小鼠生长速率及力竭游泳时间显著降低(P<0.05),血清AST、LDH、CK水平显著上升(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05),SOD含量上升(P<0.05),心肌HIF-1αmRNA表达升高(P<0.05),JAK1、STAT3、PRKACA/B及CREB1蛋白表达均显著下降(P<0.05)。与MG组比较,HP1组及HP2组小鼠生长速率及力竭游泳时间显著升高(P<0.05),血清AST、LDH、CK水平下降(P<0.05)。HP1、HP2组心肌组织PRKACA/B、CREB1、JAK1、STATA3蛋白表达水平显著高于MG组(P<0.05),HIF-1αmRNA表达显著低于MG组(P<0.05)。结论低氧预处理可能通过上调PKA/CREB及JAK1/STATA3信号通路相关组分蛋白,并下调心肌组织HIF-1αmRNA表达水平,以促进低氧暴露力竭运动小鼠心肌损伤的恢复进程。

低频脉冲电磁场通过PC2/sAC/PKA/CREB信号途径促进大鼠颅骨成骨细胞的矿化和成熟

目的研究低频脉冲电磁场(PEMFs)促进成骨细胞矿化成熟作用是否与初级纤毛及定位于初级纤毛的多囊蛋白2(PC2)和sAC/PKA/CREB信号通路有关。方法检测新生大鼠颅骨成骨细胞(ROBs)经50 Hz 0.6 mT PEMFs分别处理0、5、15、30、60、90、120 min后PC2、sAC、PKA、CREB及其磷酸化蛋白的表达水平;用盐酸阿米洛利阻断PC2功能,检测sAC/PKA/CREB信号通路活性变化及ROBs矿化成熟是否受到影响;用RNA干扰法敲低PC2表达水平后做同上检查;用免疫荧光染色法观察PC2、sAC、PKA、CREB及其磷酸化蛋白与初级纤毛的共定位情况;用RNA干扰法抑制初级纤毛发生后检测PC2和sAC/PKA/CREB信号途径相关蛋白的表达情况。结果ROBs经PEMFs处理0、5、15、30、60、90、120 min后,PC2、sAC、p-PKA和p-CREB表达水平均增加(P<0.01)。阻断PC2功能或敲低PC2表达水平后,sAC/PKA/CREB信号通路未被激活,成骨细胞的矿化成熟受阻(P<0.01)。PC2、sAC、p-PKA和p-CREB可被定位于整根初级纤毛或其根部,但PKA和CREB在初级纤毛内没有分布。干扰初级纤毛后,PEMFs处理未提高PC2表达量(P<0.01),未激活sAC/PKA/CREB信号通路,也不再能促进成骨细胞矿化成熟。结论存在于ROBs初级纤毛表面的PC2可感知并传递PEMFs发出的物理信号,通过激活PC2/sAC/PKA/CREB信号途径促进成骨细胞的矿化成熟。

C3G通过PKA/CREB信号通路减轻成年小鼠SAH后早期脑损伤

目的探讨矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对小鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)的影响及作用机制。方法取72只雄性C57小鼠随机分成6组:假手术组、SAH组、溶剂组、低剂量C3G组(10 mg/kg)、中剂量C3G组(20 mg/kg)、高剂量C3G组(30 mg/kg);每组12只。应用颈动脉穿刺法制作小鼠SAH模型,术后24 h进行Garcia评分和平衡木评分评估神经功能;每组小鼠随机取6只取外周血检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,然后取出完整脑组织进行SAH出血评分、脑水含量检测;每组剩余6只小鼠取外周血检测GSH/GSSG水平,然后取脑组织应用免疫印迹法检测PKA、p-PKA、CREB、p-CREB和GCLC表达水平。结果与假手术组相比,SAH组小鼠神经功能评分明显下降(P<0.05),脑水含量、SAH出血评分、外周血ROS和MDA含量均显著增加(P<0.05),外周血GSH/GSSG比值明显下降(P<0.05),脑组织p-PKA、p-CREB和GCLC表达明显上调(P<0.05)。C3G明显增加小鼠神经功评分(P<0.05),明显降低SAH评分降低、脑含水量(P<0.05),明显降低外周血ROS、MDA含量(P<0.05),明显增加外周血GSH/GSSG比值(P<0.05),明显下调脑组织p-PKA、p-CREB和GCLC表达(P<0.05)。结论C3G明显改善小鼠SAH后EBI,其机制可能是抑制PKA/CREB信号通路,下调GCLC表达,进而抑制氧化应激损伤。

涤痰汤通过PKA/CREB通路对阿尔茨海默病模型大鼠脑内tau蛋白磷酸化及行为学的影响研究

目的探讨涤痰汤对阿尔茨海默病模型大鼠脑内tau蛋白磷酸化水平及学习记忆能力的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、涤痰汤组和西药组。采用显微注射Aβ1-40制备阿尔茨海默病模型。造模完成后采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆水平;采用免疫荧光和Western blotting检测大鼠海马磷酸化tau蛋白表达;采用Western blotting检测各组大鼠脑内蛋白激酶A(PKA)/环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)信号通路中相关通路蛋白的表达水平。结果与模型组比较,涤痰汤组大鼠平台潜伏期及游泳总路程下降,跨越平台次数增加。免疫荧光和Western blotting结果显示,涤痰汤组大鼠脑内磷酸化tau蛋白表达水平较模型组降低;通路相关蛋白PKA、CREB磷酸化水平较模型组大鼠均有不同程度的上调。结论涤痰汤能够通过PKA-CREB通路改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,并降低模型大鼠脑内tau蛋白磷酸化水平。

人参多糖通过cAMP/PKA/CREB信号通路抗糖尿病肾病肾纤维化作用机制研究

目的探讨人参多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾纤维化的治疗作用,并揭示其可能的作用机制。方法 STZ(120 mg·kg^(-1))尾静脉注射构建糖尿病小鼠模型,并随机分为模型组、人参多糖(25、50、100 mg·kg^(-1))组、空白组,连续灌胃给药12周。12周末,比较各组小鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿微量白蛋白(mAlb)、血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量变化;肾脏Masson染色观察肾脏病理学变化;免疫组织化学法检测肾皮质中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;放射免疫分析法检测肾皮质中环磷酸腺苷(c AMP)含量;Western blot检测肾皮质中细胞外基质及信号通路PKA/CREB相关蛋白的表达。结果人参多糖能够明显降低DN小鼠FBG、mAlb、Scr、BUN含量,并通过抑制cAMP/PKA/CREB信号通路的激活,降低肾小管上皮细胞表型转化蛋白α-SMA及细胞外基质相关蛋白LN、FN的表达,延缓肾纤维化的进程。结论人参多糖对DN小鼠肾纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能与其抑制c AMP/PKA/CREB信号通路的激活有关。

依托咪酯调节cAMP/PKA/CREB信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的探究依托咪酯(Eto)调节环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元损伤的影响。方法将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Eto最佳干预浓度;EdU、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;ELISA法检测细胞中cAMP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;全自动生化分析仪检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;Western blot方法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著降低,凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,Eto低、中、高剂量HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著升高,凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著降低(P<0.05);cAMP/PKA/CREB信号通路抑制剂H-89可减弱Eto对神经细胞的保护作用(P<0.05)。结论Eto可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路,抑制氧化应激和炎症反应,促进细胞增殖,降低细胞凋亡,减弱OGD/R诱导的HT22细胞损伤。