柴胡皂苷A调节cAMP/PKA/CREB信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的基于cAMP/PKA/CREB通路探讨柴胡皂苷A对失眠大鼠的改善作用及机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A低剂量组(0.625 mg·kg^(-1))、柴胡皂苷A高剂量组(2.500 mg·kg^(-1))、艾司唑仑组(0.1 mg·kg^(-1)),每组15只。采用腹腔注射苯丙氨酸(PCPA,0.1 mg·kg^(-1))复制失眠大鼠模型。观察大鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相,记录慢波睡眠第1期(SWS1)、慢波睡眠第2期(SWS2)、快速眼球运动睡眠期(REMS)时长以及总睡眠时长(TST);qRT-PCR法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA及钟控基因Rev-erbα、RorαmRNA的表达水平;免疫荧光法测定海马组织NeuN表达水平;ELISA法测定脑组织中的cAMP水平;Western Blot法测定脑组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα及cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显缩短(P<0.05);神经元排列紊乱,NeuN阳性神经元IOD值明显降低(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显延长(P<0.05);神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN阳性神经元IOD值明显升高(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路改善失眠大鼠的昼夜节律。

和厚朴酚调节BDNF-TrkB-CREB信号通路对脑出血小鼠神经损伤和认知功能的影响

目的探讨和厚朴酚对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)小鼠神经损伤和认知功能的影响及其作用机制。方法将C57B L/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,和厚朴酚低、中、高剂量组,以及和厚朴酚+抑制剂组。除假手术组外,其余组小鼠均通过自体血注入右侧基底神经节构建ICH模型。于ICH前15 mi n和I CH后1 h,和厚朴酚低、中、高剂量组分别腹腔注射10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg和厚朴酚,和厚朴酚+抑制剂组腹腔注射40 mg/kg和厚朴酚与5μg/kg脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)-酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)信号通路抑制剂K252a,假手术组、模型组腹腔注射等量的二甲基亚砜和生理盐水。采用改良的神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNSS)评估小鼠神经功能;通过Morris水迷宫实验计算逃避潜伏期、跨越原平台次数、目标象限停留时间百分比3个指标用于评估小鼠空间学习和记忆能力;苏木精-伊红(hematoxyli n-eosin,HE)染色观察海马神经元病理学改变;原位末端转移酶标记(terminal-deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)染色检测海马神经元凋亡率;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清BDNF、TrkB水平;免疫印迹法检测海马组织BDNF、TrkB、CREB、磷酸化CREB(phosphorylated CREB,p-CREB)蛋白表达情况。结果与假手术组小鼠相比,模型组小鼠mNSS、海马神经元凋亡率升高,逃避潜伏期延长,跨越原平台次数减少,目标象限停留时间百分比降低,血清BDNF、Tr kB及海马组织BDNF、Tr kB、p-CREB/CREB水平降低(均P<0.001),海马神经元结构模糊、排列紊乱、数量减少、体积变小,且细胞核固缩;与模型组小鼠相比,和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠mNSS(均P<0.01)、海马神经元凋亡率(均P<0.001)依次降低,逃避潜伏期(均P<0.001)依次缩短,跨越原平台次数(P=0.007、P<0.001、P<0.001)依次增多,目标象限停留时间百分比(P=0.004、P<0.001、P<0.001)依次升高,血清BDNF(均P<0.001)、TrkB(P=0.001、P<0.001、P<0.001)及海马组织BDNF(P=0.008、P<0.001、P<0.001)、Tr kB(P=0.001、P<0.001、P<0.001)、p-CREB/CREB(均P<0.001)水平依次升高,海马神经元损伤有所改善;与和厚朴酚高剂量组小鼠相比,和厚朴酚+抑制剂组小鼠mNSS、海马神经元凋亡率升高,逃避潜伏期延长,跨越原平台次数减少,目标象限停留时间百分比降低,血清BDNF、Tr kB及海马组织BDNF、Tr kB、p-CREB/CREB水平降低(均P<0.001),海马神经元损伤加重。结论和厚朴酚可能通过激活BDNF-TrkB-CREB信号通路减轻ICH小鼠海马神经元凋亡和损伤,改善认知功能障碍。

麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠炎性损伤的影响

目的:探究麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性损伤的影响。方法:将大鼠分为对照组、模型组、麦冬皂苷D低剂量组、麦冬皂苷D高剂量组和麦冬皂苷D高剂量+H-89(cAMP抑制剂)组。检测大鼠质量和大鼠结肠长度;酶联免疫吸附法检测血清IL-17、IL-6、IL-10、TNF-α、cAMP水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例;HE染色检测结肠组织病理损伤;Western blot检测大鼠结肠组织中Bax、Bcl-2以及cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果:治疗结束后,与对照组相比,模型组大鼠结肠组织显著损伤,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著降低,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,麦冬皂苷D低、高剂量组大鼠结肠组织显著减轻,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著升高,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);H-89可部分逆转麦冬皂苷D对炎症性肠病大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论:麦冬皂苷D可降低IBD大鼠炎症反应和结肠组织损伤,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路实现的。

滋水清肝饮对慢性束缚应激抑郁小鼠海马ERK、GSK3β、CREB、BDNF蛋白表达的影响

目的基于ERK/GSK-3β/CREB/BDNF信号通路探究滋水清肝饮对慢性束缚应激(CRS)抑郁小鼠的作用。方法除空白组外,其余小鼠建立CRS抑郁模型,造模成功后分为模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)和滋水清肝饮低、中、高剂量组(8.835、17.670、35.340 g/kg),给予相应剂量药物干预,同时继续进行CRS处理。给药7、14 d进行糖水偏好实验及行为学实验。给药14 d后,HE染色观察小鼠海马组织形态学改变,采用试剂盒检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,ELISA法检测血清5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平,RT-qPCR法检测海马组织BDNF、TNF-α、IL-1βmRNA表达,Western blot法检测海马组织ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、CREB、BDNF蛋白表达。结果与模型组比较,给药14 d后,盐酸氟西汀组和滋水清肝饮中剂量组小鼠糖水偏好率升高(P<0.01),悬尾不动时间和强迫游泳不动时间缩短(P<0.01),海马组织神经细胞损伤有所改善,血清MDA、TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性和5-HT水平升高(P<0.05,P<0.01),海马组织TNF-α、IL-1βmRNA表达降低(P<0.01),BDNF mRNA和p-ERK1/2、p-GSK3β、CREB、BDNF蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论滋水清肝饮可改善慢性束缚应激小鼠抑郁样行为,其机制可能与调节小鼠海马ERK/GSK3β/CREB/BDNF信号通路有关。

基于TRPV4介导BDNF/TrkB/CREB信号通路探究畅舟通便方对功能性便秘合并抑郁样行为大鼠的干预机制

目的探究畅舟通便方对功能性便秘(functional constipation,FC)合并抑郁大鼠的干预机制。方法采用盐酸小檗碱法联合慢性不可预知温和刺激建立功能性便秘合并抑郁样行为大鼠模型,随机分为空白组、模型组、乳果糖组及畅舟通便方高、中、低剂量组,干预5周。分别于干预前、干预后计算粪便含水量;干预结束后计算小肠推进率;分别于干预前、干预后采用强迫游泳实验、糖水偏好实验评估大鼠的抑郁样行为水平;HE染色观察结肠黏膜形态;尼氏染色观察海马CA1、DG区锥体细胞形态和数量;Western Blot法检测各组大鼠结肠组织的TRP离子通道香草香素4型(TRPV4)及海马脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体(TrkB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)蛋白相对表达量。结果与空白组比较,模型组大鼠的粪便含水率明显减少(P<0.001),小肠推进率明显降低(P<0.01),糖水偏好指数明显下降(P<0.001),海马CA1区、DG区的锥体细胞数量明显减少(P<0.001),结肠TRPV4以及海马BDNF、TrkB、MAPK、CREB蛋白含量均明显下降(均P<0.001)。与模型组比较,畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组大鼠的粪便含水率均明显增高(P<0.001,P<0.01);畅舟通便方高、低剂量组及乳果糖组的小肠推进率明显增高(P<0.01,P<0.05);畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的糖水偏好指数明显升高(P<0.01,P<0.05);结肠病理无异常;畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的海马CA1、DG区锥体细胞数目明显增多(P<0.01,P<0.001);畅舟通便方高、中、低剂量组及乳果糖组的结肠TRPV4含量明显增加(P<0.001),海马BDNF、TrkB、MAPK、CREB蛋白含量均明显增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论畅舟通便方干预后可明显提高功能性便秘合并抑郁模型大鼠结肠的TRPV4含量,增加粪便含水量,促进肠蠕动,可改善便秘;同时TRPV4可激活BDNF/TrkB/MAPK通路,引发下游CREB的增高,从而改善神经可塑性,减轻部分抑郁样行为。

依达拉奉右莰醇对缺血性脑卒中大鼠神经功能及BDNF-AKT-CREB信号通路的影响

目的:探讨依达拉奉右莰醇(EDDE)对缺血性脑卒中(CIS)大鼠神经功能的影响,并基于脑源性神经营养因子(BDNF)-蛋白激酶B(AKT)-cAMP反应元素结合蛋白(CREB)信号通路初步探讨可能的作用机制。方法:将大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、CIS模型组(CIS组)、EDDE低剂量组(EDDE-L)、EDDE高剂量组(EDDE-H组)、尼莫地平组;采用mNSS评分法进行神经功能评估,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积,尼式染色观察大鼠脑组织病理损伤情况,同时检测脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量、BDNF mRNA、AKT mRNA、CREB mRNA以及BDNF、AKT、CREB蛋白表达情况。结果:与Sham组相比,CIS组大鼠神经功能评分、脑梗死面积、细胞凋亡率以及IL-1β、IL-6、MDA含量显著增加,而SOD含量、BDNF mRNA、AKT mRNA、CREB mRNA、BDNF蛋白、AKT蛋白、CREB蛋白表达均显著减少(P<0.05),与此同时大脑皮层细胞数量减少、空泡较多,细胞核出现固缩现象;与CIS组相比,EDDE-L组、EDDE-H组和尼莫地平组神经功能评分、脑梗死面积、细胞凋亡率以及IL-1β、IL-6、MDA含量显著减少,而SOD含量、BDNF mRNA、AKT mRNA、CREB mRNA、BDNF蛋白、AKT蛋白、CREB蛋白表达均显著增加(P<0.05),大脑皮层细胞结构也相对完整;其中EDDE-H组和尼莫地平组效果更明显(P<0.05)。结论:EDDE可能通过激活BDNF-AKT-CREB通路,抑制炎症因子表达,降低氧化应激水平,减少CIS大鼠脑梗死面积,改善其神经功能损伤。

基于BDNF/CREB信号通路探讨藏药十一味维命胶囊的抗抑郁作用机制

目的基于BDNF/CREB信号通路对藏药十一味维命胶囊对抑郁症小鼠的抗抑郁作用及机制进行研究。方法将48只小鼠随机分为正常组(n=12)、造模组(n=36),造模组采用CUMS结合CRS方法造模3周。成模后,将造模组小鼠随机分为模型组、十一味维命胶囊组(藏药组)、氟西汀组,各12只,干预4周。采用行为学实验对抑郁症小鼠模型进行评估。WB法检测小鼠海马BDNF、GDNF、NGF、p-CREB/CREB、PSD-95表达;IHC法检测小鼠海马BDNF、GDNF、p-CREB MOD值。结果造模3周后,造模组小鼠出现抑郁样行为,小鼠体质量、糖水偏好率均低于正常组(P<0.01);不动时间长于正常组(P<0.01);给药4周后,模型组小鼠体质量、糖水偏好率低于正常组(P<0.01);不动时间长于正常组(P<0.01);藏药组、氟西汀组小鼠体质量、糖水偏好率均高于模型组(P<0.05或P<0.01);不动时间均短于模型组(P<0.01)。模型组小鼠海马BDNF、GDNF、PSD-95蛋白表达及BDNF、GDNF、p-CREB MOD值均低于正常组(P<0.05或P<0.01)。藏药组、氟西汀组小鼠海马BDNF、GDNF、p-CREB/CREB、PSD-95蛋白表达均高于模型组(P<0.05或P<0.01)。藏药组小鼠BDNF、GDNF MOD值均高于模型组(P<0.05或P<0.01);氟西汀组小鼠海马BDNF、GDNF、p-CREB MOD值均高于模型组(P<0.01)。结论十一味维命胶囊可以改善抑郁症小鼠的抑郁行为,其作用机制可能与调控BDNF/CREB信号通路有关。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

基于cAMP-PKA-CREB信号通路中药防治血管性痴呆的研究进展

环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)-cAMP响应性元件结合蛋白(CREB)是神经系统一条重要的信号途径,在血管性痴呆(Va D)的防治方面发挥重要作用。中医药是我国治疗Va D的重要手段,其主要优势在于保护脑血管、改善学习记忆与认知功能的效果显著且无明显不良反应。本文基于cAMP-PKA-CREB信号通路在脑血管病变和记忆认知功能方面的调节机制,从单味中药及中药复方的角度综述了中药防治Va D的作用机制,为今后Va D相关基础及临床研究提供理论依据。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨柴胡皂苷对多发性抽动症小鼠的治疗作用

目的基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路探讨柴胡皂苷(SS)对多发性抽动症(TS)模型小鼠的治疗作用。方法将小鼠随机分为对照组、TS组、SS低剂量(SS-L)组、SS高剂量(SS-H)组、阳性药物组、SS-H+PKA抑制剂(H-89)组,每组10只。除对照组外,其他各组经腹腔注射亚氨基二丙腈溶液建立TS小鼠模型。造模后,SS-L组、SS-H组分别给予25、100 mg/kg SS腹腔注射,并以生理盐水灌胃;阳性药物组以0.5 mg/kg氟哌啶醇灌胃,并以生理盐水腹腔注射;SS-H+H-89组以100 mg/kg SS、5 mg/kg H-89腹腔注射,并以生理盐水灌胃;TS组及对照组分别以等体积的生理盐水腹腔注射、灌胃。每天1次,连续干预3周。对小鼠运动行为、刻板行为进行评分,用ELISA法检测纹状体组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)以及多巴胺(DA),用苏木精-伊红法观察脑组织形态学变化,用免疫组化法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,用Western blotting法检测cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TS组脑细胞形态被破坏,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量高(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达低(P均<0.05);与TS组比较,SS-L组、SS-H组、阳性对照组脑细胞形态得到改善,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量低(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达高(P均<0.05);S-H+H-89组逆转SS-H组各指标的变化(P均<0.05)。结论SS可能通过调节cAMP/PKA/CREB信号通路对TS小鼠发挥治疗作用。

天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的:探索天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠80只,剔除后随机分为空白组、模型组、天心解郁组、西药组、疏肝组、温肾组和疏肝健脾组7组,每组10只。除空白组外,其余组别按照慢性利血平诱导抑郁模型的方法造模28 d,造模前30 min给药,分别灌胃给药饮用水、天心解郁水煎液、氟西汀溶液、路优泰溶液、巴戟天寡糖胶囊溶液、舒肝解郁胶囊溶液,给药28 d后对各组大鼠的体质量、行为学指标、血清学细胞因子、脑组织相关靶点进行检测。结果:造模28 d后,与模型组相比,天心解郁组旷场实验水平运动得分、垂直运动得分和总路程的增加(P<0.05),强迫游泳不动时间的缩短(P<0.001),且较温肾组、疏肝组、疏肝健脾组更明显。与模型组相比,天心解郁组和温肾组可以增加大鼠血清内的CAMP含量(P<0.001,P<0.01),其余组别则无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,天心解郁组可以增加皮层内的PKA表达,促进海马内CREB、BDNF、ADRB2蛋白表达。与模型组相比,温肾组可以增加皮层内的PKA水平,其余组别无明显影响。结论:天心解郁方可能通过影响大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,发挥抗抑郁作用,较单纯疏肝、温肾或疏肝健脾的方法,疗效更好,治疗靶点更多元化。

七氟醚对小鼠海马区BDNF-TrkB-CREB 信号通路表达影响及其氧化应激机制研究

目的从动物实验角度分析七氟醚对小鼠海马区BDNF-TrkB-CREB信号通路表达影响,并探讨其氧化应激机制。方法以32只6~7周龄SPF级健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象,遵循随机化原则及等额原则分为对照组/实验组,每组16只。对照组予生理盐水,腹腔注射,连续注射5 d;采用颈椎脱臼法将小鼠处死。实验组行七氟醚吸入诱导,七氟醚挥发罐开至8%,氧流量6 L/min,监测七氟醚的呼出浓度;待小鼠麻醉成功后采用颈椎脱臼法将小鼠处死。取固定后的小鼠海马组织,依次放入梯度酒精溶液逐步脱去组织水分,再使用二甲苯处理至组织透明。采用ELISA法测定小鼠海马组织氧化应激指标(MDA/GSH-Px/SOD)水平;采用RT-PCR检测BDNF/TrKb/CREB mRNA表达水平;采用Western Blot检测BDNF/TrKb/CREB蛋白表达水平。结果与对照组相比,实验组小鼠海马组织中BDNF mRNA、Trkb mRNA、CREB mRNA基因表达量显著升高(P<0.05)。实验组BDNF、Trkb、CREB蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。与对照组比,实验组小鼠海马组织中MDA水平降低,GSH-Px和SOD水平升高(P<0.05)。对照组小鼠海马组织结构破坏严重,可见大量变性和坏死的神经细胞,且有大量炎性细胞浸润;实验组小鼠海马组织结构完整,神经细胞排列整齐有序,血管丰富,未见炎性细胞浸润、水肿等现象。结论七氟醚能够上调小鼠海马组织中BDNF mRNA、Trkb mRNA、CREB mRNA水平,而该机制可能与小鼠海马组织抗氧化能力的提升以及保护小鼠海马组织结构不受损伤有关。

丙泊酚调控cAMP/PKA-CREB-BDNF通路对大鼠神经元凋亡、坐骨神经阻滞效果的影响

目的分析丙泊酚调控脊髓环磷酸腺苷/蛋白激酶A-磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-脑源性神经营养因子(cAMP/PKA-CREB-BDNF)通路对大鼠神经元凋亡、坐骨神经阻滞效果的影响。方法选取40只SPF级Wistar雄性大鼠,其中对照组、假手术组、低剂量组、高剂量组各10只,空白组不做任何处理,假手术组进行手术处理和0.9%氯化钠溶液注射,低剂量组在假手术的基础上注射丙泊酚10 mg/kg;高剂量组注射丙泊酚30 mg/kg。结果与空白组相比,假手术组、低剂量组、高剂量组SOD活性降低(P<0.05);MDA含量、海马神经元凋亡率、各时间点MPE、MPE均升高以及cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。与假手术组相比,低剂量组、高剂量组MDA含量降低(P<0.05);SOD活性、海马神经元凋亡率、各时间点MPE以及10、20、30、60、90、120 min时间点MPE均升高、150、180 min时间点MPE均降低(P<0.05);cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。与低剂量组相比,高剂量组MDA含量降低(P<0.05);SOD活性、海马神经元凋亡率、各时间点MPE以及150、180min时间点EPT均升高;10、20、30、60、90、120 min时间点EPT均降低,(P<0.05);cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。结论丙泊酚能够增强坐骨神经阻滞效果,降低神经元凋亡率,起保护作用可能与丙泊酚调控cAMP/PKA-CREB-BDNF通路有关。

电针对甲基苯丙胺戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的观察电针对甲基苯丙胺(MTHE)戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4(AQP4)及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨电针改善MTHE戒断后抑郁潜在的作用机制。方法健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组10只。模型组、电针组采用条件性位置偏爱实验(CPP)复制小鼠MTHE成瘾模式,自然戒断后制备戒断后小鼠抑郁模型。空白组、模型组、电针组不给予任何干预,电针组取“百会”、“大椎”穴给予电针干预,选用连续波,频率2 Hz,1次/d,15 min/次,连续治疗28 d。分别于戒断后和干预后对各组小鼠进行强迫游泳试验和开放旷场试验,Western blot法检测小鼠海马AQP4、BDNF、TrkB、CREB和p-CREB等蛋白表达情况,免疫荧光染色法检测小鼠海马AQP4表达情况,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马AQP4 mRNA表达。结果造模后,与空白组比较,模型组、电针组CPP值均升高(均P<0.01),模型组、电针组CPP值差异无统计学意义(P>0.05)。戒断后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间均增加(均P<0.01)、中央区活动持续时间均减少(均P<0.01),模型组与电针组差异无统计学意义(P>0.05);干预后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间增加(P<0.01)、中央区活动持续时间减少(P<0.01),与模型组比较,电针组水中自主不动状态持续时间减少(P<0.01),中央区活动持续时间增加(P<0.01);干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均减少(均P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均增加(均P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4阳性减少(P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4阳性表达增加(P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4 mRNA表达减少(P<0.01)。干预后,与模型组比较,电针组AQP4 mRNA表达增加(P<0.01)。结论电针可改善METH戒断后小鼠抑郁样行为,其作用机制可能与调控AQP4表达,以及BDNF/TrkB/CREB信号通路活性相关。

缺锌对大鼠海马和皮层cAMP/PKA-CREB-BDNF信号转导通路的影响

目的观察缺锌对生长期大鼠海马和皮层cAMP/PKA-CREB-BDNF信号转导通路的影响。方法将Wistar大鼠随机分为足锌组(ZA)、对喂组(PF)和缺锌组(ZD),ZA组和PF组喂饲足锌饲料(30mg/kg),ZD组喂饲缺锌饲料(1.5mg/kg)。饲养一个月后处死动物,取海马和皮层,放免法测定cAMP含量;应用PepTag检测系统测定PKA活性;RT-PCR法检测CREB、BDNFmRNA的表达水平。结果ZD组大鼠海马和皮层中cAMP含量明显高于ZA组,同时皮层cAMP含量还显著高于PF组;与ZA组、PF组比较,ZD组大鼠海马和皮层PKA活性均明显降低,同时CREB、BDNFmRNA表达水平下调。结论大鼠海马和皮层cAMP/PKA-CREB-BDNF通路中多种信号分子的表达异常,可能是缺锌导致认知损伤的重要机制之一。

越鞠甘麦大枣汤调节小鼠海马PKA-CREB-BDNF信号通路的抗抑郁作用（英文）

目的探讨越鞠甘麦大枣汤(YG)的抗抑郁功效及其与PKA-CREB-BDNF信号通路的关联。方法强迫游泳(FST)检测越鞠甘麦大枣汤单次给药后抗抑郁的时效性。慢性不可预测模型(CMS)进一步检测越鞠甘麦大枣汤在抑郁模型上的抗抑郁作用。蛋白印迹表达法检测越鞠甘麦大枣汤单次给药30min和24h后海马中PKA、CREB、BDNF的蛋白表达。结果YG在FST中显示出持久的抗抑郁潜力,并且快速逆转了慢性应激小鼠的抑郁样行为。在慢性小鼠模型中,海马中PKA,CREB和BDNF的表达显著上调。结论越鞠甘麦大枣汤(YG)显示出快速和持久的抗抑郁样作用,其抗抑郁功能与PKACREB-BNDF通路有关。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元的影响

目的探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为假手术组,取50只SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、多奈哌齐组及醒脑益髓汤低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,多奈哌齐组给予0.45 mg/mL的多奈哌齐溶液灌胃,醒脑益髓汤低、中、高剂量组分别给予0.98 g/mL、1.96 g/mL、3.92 g/mL的醒脑益髓汤灌胃,均1次/d,连续30 d。定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cAMP及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,Western blot法检测海马组织中PKA和CREB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显减少(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显延长(P<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显缩短(P<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,多奈哌齐组及醒脑益髓汤各组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显增加(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显缩短(P均<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显延长(P均<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显减少,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);醒脑益髓汤中剂量组各指标改善更明显,与醒脑益髓汤高、低剂量组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减少神经元凋亡有关。

淫羊藿激活CREB/BDNF信号通路改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能

目的研究淫羊藿能否通过调节环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)/脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)信号通路改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能。方法取7月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠30只,按体重随机分为模型对照组和淫羊藿组,每组15只;另取15只同龄的雄性C57BL/6小鼠作为空白对照组。淫羊藿组灌胃给予3 g·kg^(-1)的药物溶液,空白组和模型组给予等体积0.3%CMC-Na,连续灌胃给药28 d,每天1次。筑巢试验检测小鼠日常生活能力;Morris水迷宫试验检测小鼠的学习和记忆能力;苏木素-伊红(H&E)和尼氏(Nissl)染色法观察小鼠脑组织病理学变化;采用TBA法、羟胺法检测小鼠脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的水平;免疫荧光化学法检测小鼠脑内β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)的表达情况;Western blot法检测环磷酸腺苷效应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与空白组比较,APP/PS1双转基因小鼠的筑巢得分明显降低,逃避潜伏期和游泳距离明显增加(P<0.01),目标象限停留时间和穿越平台次数显著减少;皮层和海马存在明显的神经病理损伤。此外,APP/PS1双转基因小鼠的皮层和海马区域可观察到大量Aβ沉积,并且脑组织中超氧化物歧化酶活性降低,丙二醛水平升高。Western blot结果显示,模型组小鼠脑内环磷酸腺苷效应元件结合蛋白蛋白磷酸化受到抑制,伴随着脑源性神经营养因子蛋白表达明显降低。淫羊藿(3 g·kg^(-1))连续灌胃4周,可明显改善模型小鼠的筑巢能力和认知功能,减轻神经病理损伤,抑制Aβ沉积,减轻氧化应激,促进环磷酸腺苷效应元件结合蛋白环磷酸腺苷效应元件结合蛋白磷酸化,增加脑源性神经营养因子蛋白表达。结论淫羊藿可明显改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能和神经病理损伤,其作用机制可能与激活环磷酸腺苷效应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子信号通路有关。

蒙医不同针刺法对抑郁大鼠前额叶单胺类神经递质及PKA/CREB/BDNF通路的影响

目的观察蒙医不同针刺法对抑郁大鼠前额叶神经递质及蛋白激酶(PKA)活性、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)磷酸化和脑源性神经营养因子(BDNF)表达,探究蒙医不同针法的抗抑郁作用机制。方法将40只雄性Sprague-Dawley大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、蒙医银针组、蒙医三根平衡针组和药物组,每组8只。除空白组外其他组大鼠孤养并给予不可预知的7种不同的应激刺激28 d。其中空白组每笼饲养4只,正常饮水摄食,不给任何刺激;模型组不给予任何治疗;蒙医银针组于每日接受应激刺激前1 h,进行蒙医银针刺激巴达干穴、心穴和黑白际穴;蒙医三根平衡针组的针刺和选穴同蒙医银针组,但每日选取1个穴位给予温针刺激;药物组于每日进行应激刺激前1 h,将盐酸氟西汀以0.9%氯化钠溶液配制成1 mg/mL,按照2 mg/kg体重,灌胃给药。28 d后断头,取大鼠前额叶,采用酶联免疫吸附法和Western blot法检测5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量,PKA活性,CREB磷酸化和BDNF表达水平。结果与空白组比较,造模28 d后模型组大鼠前额叶5-HT、NE、DA含量显著降低(P <0.01),PKA活性、CREB和BDNF表达水平也明显下降(P <0.05)。与模型组比较,蒙医三根平衡针组、药物组大鼠前额叶NE、DA和5-HT的含量明显升高,差异有统计学意义(P <0.05),蒙医银针组大鼠前额叶DA和5-HT的含量明显升高,差异有统计学意义(P <0.05)。与模型组比较,蒙医银针组、蒙医三根平衡针组和药物组大鼠前额PKA活性、CREB和BDNF表达水平显著升高,差异有统计学意义(P <0.05)。结论蒙医不同针法能有效提高5-HT、NE、DA含量、PKA活性及CREB-BDNF的表达,提示蒙医不同针法均有抗抑郁作用。

广叶绣球菌多糖对免疫低下小鼠海马组织cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路的影响

分别灌胃环磷酰胺所致免疫低下小鼠广叶绣球菌(Sparassis latifolia)多糖(SCPs,低、中、高剂量分别为100、200、400 mg·kg;),观察小鼠海马组织形态变化,检测5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase 2,TPH2)和环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)含量,测定细胞因子和cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路基因mRNA表达量、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)和磷酸化CREB(phosphorylated CREB, p-CREB)蛋白表达量,探讨SCPs对海马组织损伤的干预作用。结果表明:SCPs使免疫低下小鼠海马组织神经细胞数量增多,细胞间隙缩小,结构更为完整。与模型组相比,SCPs各剂量组5-HT和TPH2含量、中和高剂量组cAMP含量极显著增加;SCPs各剂量组TNF-α、中和高剂量组IL-1β mRNA表达量显著降低,SCPs中和高剂量组5-HT;受体、高剂量组蛋白激酶A和脑源性神经营养因子基因mRNA表达量显著增加;SCPs高剂量组CREB蛋白、各剂量组p-CREB蛋白表达量显著提高。研究结果为揭示广叶绣球菌多糖对海马组织保护作用的机制提供参考。