蛋白激酶C-α/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/核转录因子E2相关因子2/时核因子κB信号通路在慢性非细菌性前列腺炎小鼠中的表达及作用机制

目的:本研究旨在探讨蛋白激酶C-α(PKC-α)/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/时核因子κB(NF-κB)信号通路在小鼠慢性非细菌性前列腺炎中的表达及作用机制。方法:60只4~6周龄裸鼠,体重(180±20)g,随机分为空白对照组、模型组及慢性非细菌性前列腺炎组,每组20只。其中空白组正常饲养;模型组仅造模前禁食不禁水12 h,将小鼠麻醉(0.8%戊巴比妥0.5 ml/100 g)后,将腹部毛发剔除,常规消毒,将阴囊皮肤剪开后缝合。慢性非细菌性前列腺炎组持续将双侧睾丸取出将精索血管结扎,缝合伤口,连续3 d给予30000μm/kg庆大霉素防止感染。制备慢性非细菌性前列腺炎:术后次日0.25 mg/kg苯甲醛雌二醇经小鼠背部皮下注射,1次/d,连续1个月。比较各组小鼠前列腺指数,前列腺组织病理形态及前列腺病理改变评分,分析各组小鼠PKC-α/Keap1/Nrf2/p-NF-κB p65信号通路及血清前列腺素E2(PGE2)、环氧化酶-2(COX-2)表达变化情况。结果:慢性非细菌性前列腺炎组体重、前列腺质量、前列腺指数低于空白对照组、模型组(均P<0.05);空白对照组与模型组体重、前列腺质量、前列腺指数比较无统计学差异(均P>0.05)。空白对照组及模型组,前列腺组织腺腔有条理、结构清晰,间质内不存在炎性细胞浸润和扩张;慢性非细菌性前列腺炎组,不同形态的前列腺组织腺腔不存在腔内分泌物、缩小的胞腔,间质内被大量炎性细胞弥漫性浸润、呈疏松状,存在大量纤维组织增生。慢性非细菌性前列腺炎组前列腺病理改变评分高于空白对照组、模型组(均P<0.05);空白对照组与模型组前列腺病理改变评分比较差异有统计学意义(P>0.05)。慢性非细菌性前列腺炎组PKC-α、p-NF-κB p65高于空白对照组、模型组,Keap1、Nrf2低于空白对照组、模型组(均P<0.05);空白对照组与模型组PKC-α、Keap1、Nrf2、p-NF-κB p65比较无统计学差异(均P>0.05)。慢性非细菌性前列腺炎组PGE2、COX-2表达高于空白对照组、模型组(均P<0.05);空白对照组与模型组PGE2、COX-2表达比较无统计学差异(均P>0.05)。结论:PKC-α/Keap1/Nrf2/NF-κB信号通路在小鼠慢性非细菌性前列腺炎中呈异常表达,这可能是慢性非细菌性前列腺炎发生、发展的作用机制之一。

大鼠视神经切断后视网膜双极细胞PKC-α和recoverin的表达

为了探讨视神经切断后视网膜内部是否存在突触可塑性改变,本实验采用大鼠视神经切断模型,通过免疫组织化学方法检测视神经切断后视网膜双极细胞PKC-α和recoverin的表达变化。结果显示:正常视网膜中,PKC-α和recoverin阳性产物主要见于视网膜内核层、内网层及节细胞层,另外外核层也可见少量recoverin阳性细胞。视神经切断后3d,大鼠视网膜内网层高倍镜下可见PKC-α和recoverin免疫阳性终末的数量开始增加,14d时增至最高,21d、28d呈现逐渐减少的趋势。本研究结果提示视神经切断后视网膜双极细胞与节细胞之间的突触可能存在早期增生,后期溃变的可塑性变化。

肺癌组织中PKC-α蛋白的表达与肺癌临床病理特征的关系

目的检测肺癌组织中PKC-α(protein kinase C-alpha)蛋白的表达,探讨PKC-α蛋白与肺癌的组织类型、分化程度肺癌临床病期和淋巴结转移的关系.方法应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)和荧光染色、激光扫描共聚焦技术,检测60例肺癌组织(肺癌组)、17例肺良性病变的正常肺组织(对照组)中PKC-α蛋白表达.结果肺癌组和对照组PKC-α蛋白表达的阳性率分别为76.7%(46/60)和17.6%(3/17),两组间差异具有高度显著性(P<0.01).PKC-α蛋白表达在肺癌不同病理类型即鳞癌和腺癌中,差异无显著性(P>0.05).在高分化、中分化和低分化肺癌之间比较,PKC-α蛋白表达阳性率差异亦无显著性(P>0.05).PKC-α蛋白在IA+IB、IIA+IIB和ⅢA+ⅢB期阳性率分别为50.0%、82.6%和90.5%,阳性率随TNM分期而上升,差异有显著性(P<0.05).PKC-α阳性率在N0和N1～3肺癌分别为42.1%、92.7%,两者差异有高度显著性(P<0.01).41例伴有淋巴结转移的病例中,PKC-α蛋白表达在肺原发灶和淋巴结转移灶之间比较,差异无显著性(P>0.05).结论肺癌组织中存在PKC-α蛋白的高表达;PKC-α蛋白的高表达与肺癌组织类型和分化程度无关,而与肺癌病期、淋巴结转移有密切关系.

P-gp、PKC-α和MRP在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨P-gp、PKC-α和MRP在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义。方法运用免疫组织化学技术(S-P法)检测P-gp、PKC-α和MRP在50例上皮性卵巢癌、20例卵巢良性肿瘤和10例正常卵巢组织中的表达。结果P-gp、PKC-α和MRP三个指标在上皮性卵巢癌组织中阳性率分别为48.0%、56.0%、60.0%,显著高于正常卵巢和良性肿瘤(P<0.05);P-gp和PKC-α表达存在密切的相关关系(P<0.01);卵巢癌P-gp、PKC-α和MRP表达阳性者的化疗反应率分别为25.0%、25.0%、33.3%,低于阴性表达组(P<0.05);复发患者P-gp和PKC-α阳性表达率明显高于未复发的患者(P<0.05),MRP表达与复发无关(P>0.05)。单因素分析表明,P-gp、PKC-α和MRP与卵巢癌患者的生存期和不良预后有关。多因素分析表明,P-gp及三个指标共同表达与患者的生存率有关。结论卵巢恶性肿瘤中P-gp、PKC-α和MRP阳性表达与临床化疗耐药有关,并影响患者的生存率。联合检测三个指标对临床化疗疗效判断和患者预后估计具有积极的指导作用。

PKC-α反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及c-myc和c-fos表达的影响

为探讨PKC α反义核酸对CNE 2Z细胞增殖及c myc、c fos表达的影响 ,采用脂质体 (LP)介导法 ,用 0 0 1～1 0 0 μmol/L各浓度PKC α反义核酸 (asODN)转染CNE 2Z ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测CNE 2Z生长指数(growthindex ,GI)及其体外增殖能力 ;免疫组化法检测PKC α、及c myc、c fos的表达。结果表明 :PKC αasODN 0 0 5～ 1 0 0 μmol/L各浓度组CNE 2ZGI显著降低 (P <0 0 5 ) ,且呈量效依耐关系 ;其中 1 0 0 μmol/L和 0 5 0 μmol/LPKC αasODN对CNE 2Z生长有非常显著抑制作用 (P <0 0 1) ;0 5 0 μmol/LPKC αasODN组CNE 2Z软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P <0 0 5 ) ,并可下调其PKC α、c Myc、c Fos的表达 (P <0 0 5 )。结果提示 :LP介导PKC αasODN转染CNE 2Z细胞 ,可有效阻断CNE 2ZPKC α的表达 ,抑制其体外增殖能力 ,下调c myc、c fos蛋白表达 ;PKC αasODN可能通过下调c myc、c

红景天苷抑制胃癌细胞SGC7901增殖及对PKC-α的影响

目的观测红景天苷对胃癌细胞SGC7901增殖和PKC-α表达的影响,为红景天苷治疗恶性肿瘤提供实验依据。方法采用细胞形态学方法及MTT法、流式细胞术检测分析不同浓度红景天苷对胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用;Western Blot法检测对照组、红景天苷10-40μmol/L各组PKC-α蛋白表达水平。并对上述结果做相关分析。结果红景天苷作用SGC7901细胞24 h后细胞变圆,贴壁生长状态变差,死亡细胞数增多。MTT示红景天苷浓度在10-100μmol/L时,细胞死亡率随药物浓度增加而增多,细胞生存率与红景天浓度呈负相关。流式细胞术结果显示,红景天干预后凋亡细胞随着药物浓度增加而增多（P〈0.05）。Western blot检测结果示PKC-α蛋白的表达随红景天苷浓度（10、20、40μmol/L）的增加逐渐降低（P〈0.05）。结论红景天苷对胃癌细胞SGC7901具有抑制增殖并诱导凋亡的作用。红景天苷对SGC7901细胞有抑制PKC-α蛋白表达的作用。红景天苷对恶性肿瘤具有相关治疗作用。

大肠癌PKC-α、CyclinD1和Cdk4的表达与临床病理学特征的关系

目的:探讨大肠癌PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达与临床病理学特征的关系。方法:应用免疫组织化学SP法对PKC-α,CyclinD1和Cdk4的表达进行检测。结果:PKC-α在大肠癌组织中阳性表达率31/47(66.0%)与大肠正常组织3/15(20.0%)及腺瘤10/21(47.6%)对比有显著性差异(P<0.05),与大肠癌分化程度,Dukes分期,淋巴结转移及CEA水平明显相关(P<0.05)。CyclinD1和Cdk4在大肠癌中阳性表达率分别为26/47(55.5%),28/47(59.6%),与正常组织中表达2/15(13.3%),1/15(6.70%)及腺瘤组织中表达8/21(38.1%),9/21(42.9%)相比呈递增趋势(P<0.05)。大肠癌中CyclinD1阳性表达与肿瘤分化程度,Dukes分期,淋巴结转移呈正相关关系(P<0.05),而与CEA水平关系不大(P>0.05);Cdk4阳性表达则与分化程度,Dukes分期有关(P<0.05),与淋巴结转移及CEA水平关系不密切(P>0.05)。结论:PKC-α,Cy-clinD1和Cdk4的高表达与大肠癌分化程度,Dukes分期呈明显相关,对判断大肠肿瘤恶性程度具有一定的临床意义。

滨蒿内酯对大鼠哮喘模型气道平滑肌增殖及PKC-α蛋白表达的影响

目的观察滨蒿内酯对哮喘大鼠气道壁平滑肌增殖及PKC-α(protein kinase C-α,蛋白激酶C-α)表达的影响,探讨滨蒿内酯治疗哮喘的作用机制。方法40只雄性大鼠随机分成4组:正常对照组(N组)、哮喘组(A组)、地塞米松治疗组(D组)及滨蒿内酯治疗组(S组),以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘大鼠动物模型并给予相应治疗。测定各组肺功能,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)计数;用免疫组化法检测PKC-α蛋白表达水平、光镜下测定平滑肌层厚度及内外径。结果大鼠致敏2周及诱发哮喘4周后,肺功能测定表现为呼气时间延长,呼气峰压明显增大;A组BALF中的白细胞总数及Eos计数均较N组明显升高。哮喘模型组气道壁PKC-α蛋白含量和平滑肌层厚度较正常组均显著增加(均为P<0.001),气道内外径比值较正常组减小(P<0.001)。气道壁平滑肌层厚度与PKC-α蛋白表达呈正相关(rs=0.771,P<0.01)。结论滨蒿内酯能减轻哮喘大鼠气道壁平滑肌层的增厚并抑制PKC-α的表达。

益气活络法对糖尿病肾病大鼠肾脏组织中TNF-α、p-PKC表达影响的实验研究

目的:观察芪明颗粒对糖尿病肾病大鼠p-PKC、TNF-α表达的影响,以揭示芪明颗粒治疗糖尿病肾病的部分作用机理。方法:SD大鼠随机分为空白对照组(A组),模型对照组(B组),贝那普利西药对照组(C1组),黄葵中药对照组(C2组),芪明颗粒治疗组(D组),每组10只。于实验第8周末检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),24 h尿微量白蛋白;采用光镜观察肾皮质形态学改变;采用ELISA法检测肾组织中TNF-α、p-PKC的水平。结果:(1)C1、C2、D组FBG、Scr、BUN、UAER均高于A组(P<0.01),但明显低于B组(P<0.01或P<0.05)。(2)C1、C2、D组TNF-α、p-PKC水平较B组明显改善(P<0.01)。(3)光镜下,C1、C2、D组肾脏病理改变较B组明显改善。结论:芪明颗粒能通过减少糖尿病肾病大鼠TNF-α、p-PKC水平减少尿白蛋白,改善肾功能和肾组织结构,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用。

pkc-α、caspase-3在大肠癌中的表达及意义

目的:研究pkc-α和caspase-3在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系。方法:利用S-P法检测48例大肠癌和10例大肠腺瘤以及15正常大肠黏膜组织中pkc-α和caspase-3基因的蛋白表达。结果:①在大肠腺癌、腺瘤和正常大肠黏膜中pkc-α和caspase-3的阳性表达率分别为58.3%(28/48),66.7%(32/48);90%(9/10),100%(10/10);86.7%(13/15),93.3%(14/15),pkc-α和caspase-3在大肠癌中阳性表达率显著低于正常黏膜和良性腺瘤(P<0.05)。②pkc-α和caspase-3的表达与大肠癌的临床病理分级有关,随着病理分级的增加,其表达率逐渐降低;与性别、年龄、淋巴结转移及D ukes分期均无关(P>0.05)。③大肠癌组织中pkc-α和caspase-3蛋白的表达无明显相关性(P>0.05)。结论:pkc-α和caspase-3蛋白的低表达在大肠癌的发生发展中起着重要的作用,可作为大肠癌临床评价肿瘤生物学行为及病理诊断的有用指标。

结肠癌组织中P16、CyclinD1和PKC-α的表达及意义

目的:研究P16、CyclinD1和PKC-α在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床指标的关系。方法:采用免疫组织化学S-P染色方法检测P16、CyclinD1和PKC-α在70例结肠癌组织及癌旁组织中的表达。结果:结肠癌组织中P16蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,CyclinD1和PKC-α阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义。结论:结肠癌的发生与CyclinD1、PKC-α高表达和P16低表达均有关,P16蛋白可作为结肠癌早期诊断、临床生物学行为和预后评估的重要指标。

PKC-α反义核酸对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞周期的影响

目的 :探讨 PKC-α反义核酸对 He L a细胞增殖及细胞周期的影响。方法 :采用脂质体 (L P)介导法 ,用 0 .0 1～1.0 0μmol/L各浓度 PKC-α反义核酸 (as ODN)转染 He L a细胞 ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测 He L a细胞生长指数 (growth index,GI)及其体外增殖能力 ;流式细胞术分析细胞周期。结果 :PKC- α as ODN0 .0 5～ 1.0 0 μmol/L 各浓度组 He L a细胞 GI显著降低 (P<0 .0 5 ) ,且呈量效依赖关系 ;其中 1.0 0μmol/L和 0 .5 0μm ol/L PKC-α as ODN对He L a细胞生长有非常显著抑制作用 (P<0 .0 1) ;0 .5 0 μmol/L PKC- α as ODN组 He L a细胞软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;反义 PKC- α使细胞 G2 期百分比增高 (P<0 .0 1)。结论 :反义 PKC- α可通过阻滞细胞于 G2 期从而抑制 He L a细胞的生长。

PEI介导PKC-α反义核酸对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用

目的:研究聚乙烯亚胺(PEI)-PKC-α反义脱氧核寡酸(ASODN)对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。方法:RT-PCR检测肝癌SMMC-7721细胞、HepG2细胞PKC-α mRNA表达的差异,细胞增殖抑制实验检测PEI和ASODN混合的最佳质量比,WST法和克隆形成抑制实验检测细胞增殖抑制作用,免疫荧光检测PKC-α的表达水平。结果:SSMC-7721细胞PKC-α mRNA表达相对较高,PEI和ASODN的质量比为0.75/1时是PEI转染反义核酸的合适比例,对SMMC-7721细胞具有明显的增殖克隆抑制作用,且呈剂量-效应关系;ASODN和PEI-ASODN对SMMC-7721的IC50分别为16.6μmol/L和0.58μmol/L;PEI-ASODN能够有效抑制PKC-α蛋白的生物合成。结论:PEI-ASODN能显著抑制SMMC-7721细胞增殖和克隆形成,下调PKC-α蛋白的表达。

子痫前期血清通过PLCγ1促进脐血管平滑肌细胞PKC-α活性及胶原的表达

目的:探讨子痫前期(PE)血清激活血管平滑肌细胞蛋白激酶C-α(PKC-α)及前胶原Ⅰ表达是否由磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信息分子介导。方法:原代培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)与脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),体外建立HUVEC与HUASMC共培养体系,用PE血清处理共培养HUASMC细胞。MTT法检测HUASMC细胞活力;Annexin VFITC-流式细胞仪检测HUASMC凋亡;Western blot法检测PLC-γ1(磷酸化)、PKC-α(包膜/胞浆比值)活性以及前胶原Ⅰ表达。siRNA沉默PLC-γ1表达后,观察PE血清对共培养HUVEC细胞PKC-α活性及前胶原Ⅰ表达的影响。结果:PE血清可促进共培养HUASMC细胞PLC-γ1磷酸化、PKC-α膜转位及前胶原Ⅰ的表达(P<0.05);siRNA沉默HUASMC细胞PLC-γ1蛋白表达可逆转PE血清引起的PKC-α膜转位及前胶原Ⅰ的表达(P<0.05)。结论:PE血清通过PLC-γ1-PKC-α信息途径促进HUASMC前胶原Ⅰ的表达,可能在胎盘血管病理过程中起着重要的作用。

PKC-α mRNA在兔自体静脉移植中的表达

目的观察蛋白激酶C-α(PKC-α)mRNA在兔自体静脉移植中的表达的动态变化,探讨其与移植血管内膜增生的关系。方法采用兔自体颈静脉移植模型(右颈静脉移植至对侧颈动脉),25只新西兰大白兔随机分为5组(n=5),为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、SO组。Ⅰ-Ⅳ组的取材时间分别为移植术后的第3,7,14,28天。SO组只行颈部切开与再缝合,未行血管移植,术后直接取材。应用real-time PCR法检测各组中PKC-α mRNA的表达变化。结果与SO组相比,PKC-α mRNA在静脉移植术后第3天时,表达升高至2.335±0.059倍(P<0.01),而后在术后7,14,28d表达渐降至正常。结论PKC-α可能与自体静脉移植后的血管内膜增生过程中的信号传导有关。

PKC-α在肾癌及其周围正常组织中的表达及意义

目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)-α在肾癌及其周围正常组织胞质和胞膜中的表达和意义以及与肾癌分期、分级的关系。方法采用Western blotting技术检测30例肾癌组织及其周围正常组织胞质、胞膜中PKC-α的表达。结果在肾癌组织或邻近正常组织的胞质和胞膜中PKC-α都有一定量的表达。与邻近正常组织相比,肾癌组织胞质中PKC-α表达降低,胞膜中PKC-α表达增高,膜/质比上升,差异均有统计学意义(P<0.01)。随着肾癌病理分期和组织学分级的提高,PKC-α在肿瘤组织胞膜的表达也相应增高,在肿瘤组织胞质的表达则相应降低,膜/质比增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论PKC-α在肾癌发生、发展过程中可能起了重要的调控作用;PKC-α在肾癌组织中存在膜转位;PKC-α在肾癌组织胞膜中高表达,在肾癌组织胞质中低表达,并且与肾癌的病理分期和组织学分级密切相关;PKC-α是判断肾癌分化、预后的一种理想指标。

冠心通络方对球囊损伤AS兔主动脉PKC-α、MCP-1表达的影响

目的:观察冠心通络方对球囊损伤后AS兔主动脉PKC-α、MCP-1表达的影响。方法:新西兰雄性大白兔60只随机分成治疗组(以下称SGDW)、对照组、假手术组,正常饮食雄性大白兔15只为阴性对照组。除阴性对照组外所有动物高脂饲料喂养4个月。4个月后冠心通络方组、模型组均采用球囊拉伤,假手术组仅予静脉切开但不行球囊拉伤术。冠心通络方组在高脂饮食喂养同时给予冠心通络方喂食,模型组及假手术组予高脂饮食。冠心通络方组行球囊损伤术后继续给药3天。给药完毕后处死动物,取胸主动脉组织固定后以备实验,采用免疫组织化学法检测MCP-1、PKC-α表达,按阳性细胞率作计量资料进行统计分析。结果:冠心通络方能明显降低球囊损伤AS兔血管组织MCP-1、PKC-α表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:冠心通络方能明显降低球囊损伤AS兔腹主动脉组织MCP-1、PKC-α表达,通过抑制炎症增殖而减少血管再生组织,减轻血管内膜增生和血管平滑肌增殖,从而防止血管再狭窄。

nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖及PKC-α表达的影响

目的探讨nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖的影响及可能机制。方法检测6个口腔鳞癌细胞系中nm23-h1的表达水平;挑选nm23-h1表达量最少、绿色荧光报告基因质粒转染效率最高的细胞系,瞬时转染pCMV-nm23-h1质粒,MTT法检测转染的细胞增殖活性;应用实时定量PCR检测nm23-h1功能相关基因PKC-α的表达。结果在Tca8113、Tb、Tca8113M、TSCC、OSC-4、Tca8113/CDDP6个口腔鳞癌细胞系中,高转移细胞系Tb、Tca8113M的nm23-h1表达量最低。Tb细胞转染pCMV-nm23-h1后,细胞增殖速度减慢,为对照组的79.69%(P<0.01);过表达nm23-h1的Tb细胞PKC-α的mRNA表达量增加,为对照组的1.52倍(P<0.01)。结论nm23-h1基因过表达能抑制口腔鳞癌细胞的增殖,该作用可能与PKC-α相关的信号通路有关。

犀角地黄汤合银翘散通过PKC-SSeCKS通路抑制TNF-α诱导的肺微血管内皮细胞通透性增加

目的:观察犀角地黄汤合银翘散(XDY)对TNF-α诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)通透性的影响及其与PKC-SSeCKS信号通路的关系,以探究该方治疗病毒性肺炎的作用环节和分子机制。方法:原代培养大鼠PMVEC,在Transwell小室上用电导法于不同时点监测TNF-α诱导的PMVEC跨内皮细胞单层电阻(TER)测定其通透性。不同的干预因素作用24 h后,检测PMVEC的TER、PKC活性、SSeCKS mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平,激光共聚焦显微镜观察PMVEC中SSeCKS的定位和F-actin的结构变化。结果:TNF-α作用24 h后PMVEC通透性达高峰;与对照组比较,TNF-α组TER降低,PKC活性增强;与TNF-α组比较,TNF-α加PKC抑制剂组和TNF-α加XDY含药血清组PKC活性降低,而TER升高且与对照组无差别。与对照组比较,TNF-α组SSeCKS的mRNA和蛋白表达升高;与TNF-α组比较,TNF-α加XDY含药血清组SSeCKS的mRNA水平和磷酸化SSeCKS蛋白水平降低。对照组PMVEC中F-actin主要分布在细胞周边和核周,形成致密周围束,SSeCKS均匀散在分布于细胞中;TNF-α组细胞周边的F-actin致密束基本消失,SSeCKS集中分布于核周;TNF-α加含XDY含药血清组F-actin结构及SSeCKS的分布趋于正常。结论:犀角地黄汤合银翘散可以抑制TNF-α诱导的PMVEC PKC信号通路的激活,降低PKC结合底物SSeCKS的表达,最终影响肌动蛋白的变构、阻止内皮细胞变形而降低PMVEC的通透性。

PD-L1通过调控PKC-α-NF-κB信号通路延迟脓毒血症中性粒细胞凋亡

目的:探讨PD-L1对脓毒血症外周血多形核中性粒细胞(PMN)延迟凋亡的调控作用及可能机制。方法:收集12例脓毒血症患者外周血PMN,同时采集15例健康体检者PMN,流式细胞术测定PMN凋亡;Western blot检测PMN中PD-L1表达;另以SPF级成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脓毒血症组、实验组(PD-L1 siRNA),盲肠结扎穿孔法造模,测定PMN凋亡情况,Western blot检测PMN中Cleaved caspase-3、PKC-α及NF-κB水平。结果:与健康体检者相比,脓毒血症患者在6、12 h时PMN凋亡水平显著降低(P<0.05);脓毒血症患者PD-L1水平显著高于健康对照组(P<0.05),且与6、12 h PMN凋亡水平呈显著负相关(r=-0.693,P=0.012;r=-0.685,P=0.014);脓毒血症组、实验组PMN凋亡水平在6、12 h均低于假手术组,与脓毒血症大鼠相比,转染PD-L1 siRNA后大鼠在6、12 h PMN凋亡水平显著增加(P<0.05);与假手术组相比,模型组大鼠PMN内Cleaved caspase-3水平在6、12 h显著下降(P<0.05),转染PD-L1 siRNA后大鼠PMN内Cleaved caspase-3水平在6、12 h显著上升(P<0.05);与假手术组相比,模型组、实验组PMN内PKC-α、磷酸化NF-κB水平增加,转染PD-L1 siRNA后大鼠PMN内PKC-α、磷酸化NF-κB水显著下降(P<0.05)。结论:脓毒血症患者体内PMN凋亡延迟,与PD-L1表达呈显著负相关,提示PD-L1可能是调控脓毒血症PMN延迟凋亡的重要分子。在脓毒血症大鼠模型中,沉默PD-L1基因能够改善脓毒血症大鼠PMN的凋亡延迟,其机制可能与抑制脓毒血症大鼠PMN中的PKC-α-NF-κB信号通路激活有关。