格列齐特联用羟苯磺酸钙对糖尿病视网膜病变大鼠PKC、VEGF、HIF-1α表达的影响

目的 观察格列齐特联用羟苯磺酸钙对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠蛋白激酶C(PKC)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 雄性SD大鼠55只,随机抽取9只作为正常对照组,其余给予高糖高脂饮食+腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。将造模成功的大鼠随机分为糖尿病模型组、格列齐特组、羟苯磺酸钙组和格列齐特联合羟苯磺酸钙组。每两周测得各组大鼠的体重,各组按设计剂量灌胃给药,给药前和给药后测大鼠的空腹血糖,WesternBlot法检测视网膜组织中PKC、HIF-1α、VEGF相关蛋白表达。结果 经8周灌胃给药后的各项检测指标结果显示:与正常组相比,糖尿病模型组大鼠体重出现明显下降(P<0.01),羟苯磺酸钙给药组大鼠体重也表现出明显降低(P<0.01);与模型组相比,格列齐特给药组大鼠体重下降减弱(P<0.01),且格列齐特给药组大鼠空腹血糖显著降低(P<0.01);与模型组相比,格列齐特给药组大鼠视网膜病理性损伤得到明显改善,且格列齐特羟苯磺酸钙联合用药组改善作用更为明显;与模型组相比,格列齐特给药组中PKC(P<0.05)、HIF-1α(P<0.01)和VEGF(P<0.05)蛋白表达明显下调,联合用药组的VEGF蛋白表达下调较单个给药组更为明显。结论 格列齐特联用羟苯磺酸钙对糖尿病模型大鼠视网膜病变有明显改善作用,其机制可能与降低视网膜中VEGF的蛋白表达有关。

低氧大鼠肺动脉内皮细胞VEGF变化与PKC活性关系的探讨

目的 :探讨低氧培养大鼠肺动脉血管内皮细胞VEGF的表达变化与PKC活性的关系。方法 :培养大鼠肺动脉血管内皮细胞 ,观察低氧 (1%O2 )培养不同时间大鼠肺动脉血管内皮细胞浆、膜PKC活性和培养液中VEGF水平变化 ;加入PKC抑制剂 (staurosporine)后 ,测定低氧、常氧培养不同时间二者的变化。结果 :低氧时膜PKC活性和培养液中VEGF水平明显升高 (P <0 .0 1)。而加入PKC抑制剂后 ,常氧和低氧培养的内皮细胞浆、膜PKC活性都明显下降 (P <0 .0 1) ,相应的培养液中VEGF水平与常氧对照组比较无明显变化 (P >0 .0 5 )。结论 :低氧时PKC活性升高与VEGF表达升高有密切关系 ,PKC对低氧时VEGF的表达起正调控作用。

脑胶质瘤P53、PKC、VEGF的表达及与预后关系

目的 了解脑胶质瘤中P53、PKC、VEGF阳性表达与脑胶质瘤分级和预后的关系。方法 采用兔疫组化SABC法观察P53、PKC、VEGF在脑胶质瘤中的表达;同时,随访了解患者生存情况。结果 P53、PKC、VEGF在BG、MG、HMC三组中都有不同程度的表达,而且,随着病理分级的增加,其表达率也逐渐增加,但各组间缺乏统计学差异,三者表达在脑胶质瘤中的意义有待进一步大宗病例的分析。P53、PKC、VEGF阴性表达与阳性表达在生存期上存在显著性差异(P<0.05),即表达阴性比表达阳性者预后好。结论 P53、PKC、VEGF的阳性表达与脑胶质瘤预后有着密切关系,此结果对于指导临床治疗有一定的价值。

灯盏花素对高糖联合低氧诱导人视网膜色素上皮细胞分泌VEGF的影响及其机制

目的通过观察1μmol/L灯盏花素对高糖、低氧,及高糖联合低氧环境下人视网膜色素上皮(RPE)细胞株D407细胞分泌VEGF的影响,PKCδ的转位激活变化,以及构建PKCδ的小分子干扰载体,探讨灯盏花素对RPE细胞在糖尿病环境下分泌VEGF的调节作用及机制。方法常规培养D407细胞,分为对照组(5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25.0mmol/L葡萄糖),低氧组(200.0μmol/L CoCl2),联合组(25.0 mmol/L葡萄糖+200μmol/L CoCl2),灯盏花素干预联合组(25.0 mmol/L葡萄糖加200μmol/L CoCl2加灯盏花素1.0μmol/L),ELISA检测VEGF浓度,Western blot检测PKCδ的转位激活水平;构建PKCδ小分子干扰载体转染D407细胞后,Western blot检测PKCδ表达水平,ELISA检测VEGF分泌水平。结果高糖组、低氧组、联合组分别与对照组比较,细胞分泌VEGF与PKCδ转位激活均增加(均P<0.05),联合组增加最明显(P<0.01);灯盏花素在1μmol/L的浓度下可以显著降低高糖联合低氧诱导的VEGF分泌;灯盏花素可以抑制高糖联合低氧引起的PKCδ转位激活;所构建的sh3-PKCδ干扰载体可以降低PKCδ表达水平,干扰PKCδ后联合组的VEGF分泌水平降低(P<0.05)。结论灯盏花素可以抑制高糖联合低氧诱导RPE细胞分泌VEGF,这可能与灯盏花素抑制了PKCδ转位激活有关,提示PKCδ可能是DR的一个药物靶点,灯盏花素具有作为DR治疗药物的前景。

滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠心肌微血管损伤的影响

目的:探讨滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠心肌微血管损伤的影响及其作用机制。方法:将51只SD雄性大鼠随机分为空白对照组(9只)和造模组(42只)。造模组大鼠采用长期高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)方法建立糖尿病心肌病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组、特异性βⅡ-蛋白激酶C(PKC-βⅡ)抑制剂[Ruboxistaurin(LY333531)HCl,Rx抑制剂]组,每组9只。滋膵通脉饮高、低剂量组大鼠分别予相应剂量[60.84、15.21 g/(kg·d)]滋膵通脉饮灌胃,Rx抑制剂组大鼠予PKC-βⅡ抑制剂混悬液灌胃[1.00 mg/(kg·d)]。空白对照组和模型组大鼠均予蒸馏水灌胃[10 mL/(kg·d)]。2次/d,连续给药4周。给药结束后测量体质量、空腹血糖及糖化血清蛋白;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测心肌组织PKC-βⅡ、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及血管内皮细胞钙粘连蛋白(VE-cadherin)表达;定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测心肌组织PKC-βⅡmRNA、VE-cadherin m RNA、VEGF mRNA、VEGFR2 mRNA表达;透射电镜观察心肌微血管的超微结构。结果:模型组大鼠空腹血糖、糖化血清蛋白、心肌组织PKC-βⅡ、VEGF蛋白相对表达量及心肌组织PKC-βⅡmRNA、VEGF mRNA相对表达量均高于空白对照组(P<0.01),体质量、心肌组织VE-cadherin、VEGFR2蛋白相对表达量及心肌组织VE-cadherin mRNA、VEGFR2mRNA相对表达量均低于空白对照组(P<0.01)。滋膵通脉饮高、低剂量组大鼠空腹血糖、糖化血清蛋白均低于模型组(P<0.05或P<0.01),体质量均高于模型组(P<0.01);Rx抑制剂组大鼠空腹血糖、糖化血清蛋白、体质量与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);滋膵通脉饮低剂量组、Rx抑制剂组大鼠心肌组织PKC-βⅡ、VEGF蛋白相对表达量及心肌组织PKC-βⅡmRNA、VEGF mRNA相对表达量均低于模型组(P<0.01),VE-cadherin、VEGFR2蛋白相对表达量及VE-cadherin mRNA、VEGFR2 mRNA相对表达量均高于模型组(P<0.01);滋膵通脉饮高剂量组大鼠心肌组织VE-cadherin、VEGFR2蛋白相对表达量及VE-cadherin mRNA、VEGFR2 m RNA相对表达量高于模型组(P<0.05或P<0.01),心肌组织PKC-βⅡmRNA、VEGF mRNA相对表达量低于模型组(P<0.01)。透射电镜显示空白对照组大鼠微血管管腔圆滑规整,内皮细胞附着在基底膜内,基底膜均匀连续,胞间紧密连接完整;模型组大鼠心肌微血管损伤明显,基底膜及胞间连接断裂,细胞间隙增宽,管腔通透性增加;Rx抑制剂组、滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组大鼠微血管损伤均有不同程度改善,基底膜及胞间连接断裂改善或消失,细胞间隙轻微增宽或不明显。结论:滋膵通脉饮可抑制糖尿病心肌病大鼠PKC-βⅡ激活,影响VEGF的表达,从而调节心肌微血管细胞间正常连接,改善心肌微血管损伤。这可能是其治疗糖尿病心肌病的机制之一。

益气健脾抗癌法对肠癌脾虚本质的影响及抗肿瘤作用实验研究

目的:观察益气健脾抗癌中药对脾虚肠癌蛋白激酶C(PKC)及瘤体表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:使用随机平行对照方法,将40只SD小鼠编号按随机数字表法分为正常组、模型组、益气健脾组、益气健脾抗癌4组。每组10只。灌胃干预:正常组、模型组生理盐水,益气健脾组益气健脾中药,益气健脾抗癌组益气健脾抗癌中药合用。连续灌胃14 d。观察脾脏蛋白激酶C(PKC)、瘤体表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果:脾脏PKC表达正常组高于益气健脾抗癌组、益气健脾组和模型组(P<0.01),正常组、益气健脾抗癌组均高于模型组(P<0.01),益气健脾抗癌组高于益气健脾组(P<0.05),益气健脾组高于模型组(P<0.05)。细胞凋亡益气健脾组、益气健脾抗癌组、模型组均高于模型组(P<0.01),益气健脾抗癌组高于益气健脾组(P<0.01)。结论:益气健脾中药可改善脾功能,缓解肿瘤对脾脏PKC表达抑制作用,益气健脾中药联合抗癌中药作用更加明显,有效促进肿瘤细胞凋亡,对EGF、VEGF表达具有明显抑制作用。

糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性和血管内皮细胞生长因子的关系

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C(PKC)活性变化和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的动态变化,探讨两者之间相互关系以及它们与糖尿病肾病(DN)发生发展之间的关系。方法用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠实验模型,将大鼠随机分为正常对照组(N)、糖尿病2周组(DM2)和糖尿病4周组(DM4)。断头处死,分离肾小球,提取纯化胞浆及胞膜蛋白,利用(γ-32P)ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性。用免疫组化和400倍光镜检测VEGF在各组大鼠肾脏的表达。结果糖尿病大鼠肾小球细胞内总的PKC活性与对照组差异无显著性,胞浆PKC活性略有下降,相差不显著;肾小球细胞膜PKC活性明显高于正常对照组,膜结合PKC百分比显著增加,且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数及Ccr呈正相关。糖尿病组VEGF的表达多于正常对照组。肾小球细胞膜PKC活性与肾组织VEGF的表达正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高,并诱导VEGF的高表达。PKC的激活在DN的发生发展中发挥着重要的调控作用。

中药单体葛根素对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子、蛋白激酶的影响

目的通过观察糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)、蛋白激酶(PKC)的表达,探讨中药单体葛根素对于抑制糖尿病大鼠视网膜病变的作用机制。方法建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常组(正常SD大鼠)、模型组、葛根素组、血塞通组。正常组给予正常饲养20 d;模型组给予注射等量生理盐水,10mg/kg,1次/d;葛根素组给予腹腔内注射葛根素10 mg/kg,1次/d;血塞通组给予腹腔内注射血塞通10 mg/kg,1次/d,后3组每组连续注射20 d。在第20 d过量麻醉后处死上述大鼠,轻摘眼球,进行免疫组织化学染色,检测视网膜组织中VEGF、PKC的表达,并对其进行观察比较。结果模型组PKC蛋白表达及VEGF表达均增加,葛根素组、血塞通组大鼠视网膜组织中PKC蛋白表达及VEGF表达均降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),葛根素、血塞通两组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药单体对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)、蛋白激酶(PKC)有明显的抑制作用。

复肾降纤宁对糖尿病肾病大鼠的影响及机制研究

目的观察复肾降纤宁对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)、血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子-β(PDGF-β)的影响及对肾脏的保护作用。方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)大鼠模型,将成模糖尿病大鼠随机分成4组:模型组、复肾降纤宁组、厄贝沙坦组、厄贝沙坦+复肾降纤宁组,同时取正常大鼠设对照组。各组大鼠采用相应的干预措施处理12周。常规方法检测各组大鼠肾脏指数、血糖、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER),免疫组化法检测肾PKC和VEGF表达,Western blotting检测肾组织PDGF-β的表达,透射电镜观察肾脏超微结构。结果模型组大鼠肾皮质PKC、VEGF和PDGF-β表达显著升高,肾脏超微结构改变明显,血糖、UAER、BUN、Scr、肾脏指数显著增高;复肾降纤宁组、厄贝沙坦组和厄贝沙坦+复肾降纤宁组上述指标显著低于模型组(P<0.05),肾脏超微结构改变明显改善;厄贝沙坦+复肾降纤宁组各项指标改善明显优于模型组、复肾降纤宁组和厄贝沙坦组(P<0.05),但未达到对照组水平。结论复肾降纤宁对DN大鼠肾脏形态和功能有明显保护作用,其机制可能与减少肾组织中PKC、VEGF和PDGF-β的表达,减轻肾组织纤维化有关。

二酯酰甘油-蛋白激酶C信号传导系统和细胞因子与糖尿病肾病的关系

目的研究糖尿病大鼠肾小球中蛋白激酶C(PKC)的活性变化及转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况,探讨3者之间的相互关系及其与糖尿病肾病(DN)发生、发展的相关性。方法选用雄性SD大鼠,用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病实验模型,随机分为正常对照组、糖尿病2周(DM2)组和糖尿病4周(DM4)组。大鼠断头处死,分离肾小球,提取纯化胞浆及胞膜蛋白。利用[r-32P]-ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性;用免疫组织化学法检测VEGF和TGF-β1在各组大鼠肾小球及肾小管中的表达。结果①DM2、DM4组肾小球细胞内总的PKC活性与对照组无显著性差异,胞浆PKC活性略有下降,但相差不显著(P>0.05);DM2、DM4组肾小球细胞膜PKC活性均明显高于正常对照组(P<0.05),且细胞膜PKC活性与肾脏肥大指数(肾重/体质量)和内生肌酐清除率(Ccr)呈正相关。②DM2、DM4组VEGF和TGF-β1的表达均高于正常对照组(P<0.01)。③肾小球细胞膜PKC活性与VEGF和TGF-β1的表达呈正相关。结论高血糖慢性刺激可引起肾小球PKC活性增高,并上调TGF-β1和VEGF的表达,进一步导致肾小球滤过膜通透性和滤过率增加,这在糖尿病早期肾内血流动力学改变中发挥着重要的调控作用。