内皮素受体拮抗剂CPU0213拮抗的对NADPH氧化酶和PKCe介导的应激性肾损害(英文)

目的:应激所致的早期肾功能不全,可能与内皮素-1(ET-1)-蛋白激酶C(PKCε)通路的异常有关。探讨内皮素受体拮抗剂CPU0213抑制ET系统和PKCε,从而改善应激所致的肾功能损伤。方法:SD大鼠,(240±20)g,随机分成3组:正常对照组、异丙肾上腺素(ISO1mg/kg,s.c.,×10d)组、ISO+CPU0213(20mg/kg,s.c.,d6-10)治疗。检测血清肌酐、24h尿白蛋白、肾皮质GSH-Px、SOD和MDA,及ETAR、PKCε、NAPDH氧化酶-p67phox的mRNA和蛋白表达。结果:与正常组相比,血清肌酐和24h尿白蛋白浓度明显增高(P<0.01),肾皮质GSH-Px、SOD活力降低,MDA增加,ETAR、PKCε、NAPDH氧化酶-phox67的mR-NA和蛋白表达均上调(P<0.05)。经CPU0213干预后,上述指标均趋于正常。结论:应激所致早期肾脏损伤中,NADPH氧化酶表达增加和PKCε过磷酸化,由ETAR所介导。内皮素受体拮抗剂CPU0213抑制氧化应激,改善应激所致的早期肾损伤。

PKCε信号通路介导的葛根素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的探讨葛根素(puerarin,Pue)抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤保护作用与PKCε蛋白表达的关系。方法培养新生SD大鼠原代心肌细胞,分为正常对照(Con)组、A/R组、葛根素+A/R(Pue+A/R)组、葛根素+抑制剂+A/R(Pue+εV1-2+A/R)组、抑制剂+A/R(εV1-2+A/R)组。Western blot测定PKCε蛋白表达水平,MTT法检测细胞存活率,比色法测定培养液肌酸磷酸酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞内丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,流式细胞仪测定线粒体膜电位和细胞凋亡。结果葛根素预处理24h后,心肌细胞PKCε表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);培养液CPK、LDH活性降低,细胞内SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量减少,细胞存活率升高,细胞凋亡减少(P<0.01);PKCε抑制剂εV1-2则可明显消弱葛根素的上述心肌保护作用。结论葛根素的抗心肌缺血/再灌注损伤保护作用涉及PKCε信号通路,至少部分依赖于其对PKCε表达水平的上调。

抑制外周神经元PAR2-PKA/PKCε通路对痛转化模型大鼠痛阈的影响

目的探讨外周神经元蛋白酶激活受体2-蛋白激酶A/蛋白激酶Cε(PAR2-PKA/PKCε)通路在痛转化中的作用,寻找同时干预急性痛和慢性痛的可能方案。方法 SD大鼠随机分为空白组、假诱发组、诱发组、抑制剂1组和抑制剂2组。除空白组和假诱发组,所有大鼠均通过先后足部注射角叉菜胶和前列腺素E2(PGE2)建立痛觉敏化诱发模型。PGE2于角叉菜胶注射后7 d进行足部注射。抑制剂1组和抑制剂2组大鼠于PGE2注射前/后,分别给予PAR2抑制剂。观察角叉菜胶/生理盐水,注射前、注射后5 h、3 d、6 d、7 d 0.5 h、7 d 4 h和7 d 24 h大鼠机械痛阈(PWTs)的变化,检测角叉菜胶注射后7 d 24 h造模侧背根神经节(DRG)中PAR2、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶(PKCε)表达。结果痛觉敏化诱发模型建立成功。角叉菜胶注射后7 d给予PGE2,显著延长了PGE2诱发疼痛的存在时间,角叉菜胶注射后7 d 24 h假诱发组大鼠PWTs与同期空白组相比差异无显著性(P>0.05),而诱发组大鼠PWTs明显低于同期空白组和假诱发组大鼠(P<0.01)。诱发组大鼠造模侧DRG中PAR2和PKCε表达在角叉菜胶注射后7 d 24 h明显提升,高于同期假诱发组和空白组(P<0.05)。给予PAR2抑制,不论时间均能显著翻转角叉菜胶注射后7 d 24 h,诱发组大鼠由PGE2诱发的疼痛(P<0.05),并抑制DRG中PKCε表达。但,给予PAR2抑制剂不能影响PGE2诱发的急性疼痛和调制DRG中PKA含量。结论抑制PAR2表达能阻断急性痛向慢性痛转化,这可能与其抑制DRG中PAR2-PKCε通路激活有关。但抑制PAR2并不能干预急性痛,这可能是因为DRG中PAR2相关通路未参与急性痛的产生。

SiRNA干扰慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节MrgC表达及PKCε磷酸化的研究

目的观察鞘内注射小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)诱导的慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中Mrg C(Mas-related G protein-coupled receptor C,Mrg C)mRNA与蛋白表达的干扰作用,并观察该作用对大鼠患足痛阈及患侧DRG PKCε丝氨酸729点位磷酸化(phosphorylation of PKCεSer729,p-PKCεSer729)水平的影响。方法健康雄性SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠16只,随机分为对照siRNA组,Mrg C siRNA组,每组8只。大鼠脊髓鞘内插管成功后,两组大鼠给予相应药物鞘内注射4 d,1次/d,5μg/d/只。给药第4 d,大鼠右后足底注射CFA 0.1 m L建立慢性炎性痛模型,此后隔日注射药物,直至给药第11 d处死。分别于鞘内置管前、给药前、给药4 d(CFA造模0 h)、给药5 d(CFA造模24 h)、给药11 d(CFA造模7 d)5个时点检测大鼠患足机械缩腿阈(Paw withdrawal thresholds,PWTs)的变化。荧光定量PCR法检测患侧DRG Mrg C的mRNA的表达,免疫荧光法检测患侧DRG Mrg C表达量及p-PKCεSer729的含量。结果与给药4 d比较,给药5 d两组大鼠的PWTs均有显著的下降(P<0.01);给药前后各时点,两组大鼠之间PWTs没有明显差异。观察给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG Mrg C mRNA的表达,与对照siRNA组比较,Mrg C siRNA组各神经节Mrg C mRNA的表达均明显下降(P<0.01);观察大鼠给药11d时大鼠患侧L4-L6 DRG Mrg C与p-PKCεSer729的表达,与对照siRNA组比较,Mrg C siRNA组患侧DRG的Mrg C阳性细胞率明显减少(P<0.01),而p-PKCεSer729的阳性细胞率显著上升(P<0.05)。结论 Mrg C siRNA片段可有效干扰CFA慢性炎性痛大鼠患侧L4-L6 DRG Mrg C mRNA与Mrg C的表达,对Mrg C的干扰作用能显著上调PKCεSer729磷酸化的水平,但不影响大鼠患足机械缩腿阈。

浅谈预应力现浇箱梁施工工艺

以同江至三亚高速公路青岛段院上镇互通立交桥现浇箱梁工程为例,阐述了其具体的施工工艺,指出为能达到内实外美的效果,必须熟悉规范,营造一个良好的管理和质量环境。

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