PKG通路与高血压合并冠心病患者PCI治疗后血管内皮功能损伤及冠脉无复流的关系

目的:探讨PKG通路与高血压合并冠心病患者PCI治疗后血管内皮功能损伤及冠脉无复流的关系。方法:选取2019年1月—2020年12月在我院行PCI治疗的高血压合并冠心病患者120例,根据PCI术后冠脉造影结果,将PCI组分为无复流组(TIMI 0~1级,n=20)和有效灌注组(TIMI 2~3级,n=60),并将未行PCI的高血压合并冠心病患者作为对照组,即非PCI组(n=40)。比较三组患者的血管舒张功能(FMD)数值、血清中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、亚硝酸盐、蛋白激酶G(PKG)活性值及PKG通路水平。结果:与非PCI组相比,PCI组患者的FMD数值、eNOS、亚硝酸盐及PKG活性值均显著降低(P<0.05),PKG通路水平明显下调(P<0.05);与有效灌注组相比,无复流组患者的FMD数值、eNOS、亚硝酸盐及PKG活性值均进一步降低(P<0.05),PKG通路水平进一步下调(P<0.05);无复流组的冠脉无复流发生率、术后并发症发生率、住院时间、住院费用均高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高血压合并冠心病患者PCI治疗后,血管内皮功能受损,PKG通路受抑制,这可能与冠脉无复流的发生有关。保护和激活PKG通路可能有助于改善血管内皮功能,预防和减少冠脉无复流的发生。

蛇床子素对大鼠信号通路AKT/eNOS/sGC/PKG及成骨细胞成熟分化的影响

目的研究蛇床子素(osthol)是否通过激活丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)/可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,sGC)/蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)矿化成熟。方法检测蛇床子素处理ROBs后,成骨性转录因子RUNX2、OSX以及AKT/eNOS/sGC/PKG信号途径蛋白表达水平、免疫荧光法观察信号通路下游蛋白核易位;检测碱性磷酸酶(alkline phosphatase,ALP)活性;用AKT特异性抑制剂MK-2206阻断AKT功能后,检测MK-2206对AKT/eNOS/sGC/PKG信号途径活性及对ROBs矿化成熟的影响,进一步评估蛇床子素促进成骨细胞矿化成熟的潜在机制。结果蛇床子素处理ROBs后,成骨性转录因子RUNX2、OSX蛋白及AKT/eNOS/sGC/PKG信号通路蛋白表达量均增加,ALP活性上升;加入AKT抑制剂后,蛇床子素不再激活AKT/eNOS/sGC/PKG信号通路,阻断了蛇床子素促进ROBs的矿化成熟。结论蛇床子素可通过激活AKT/eNOS/sGC/PKG信号通路促进成骨细胞矿化成熟。

芪苓益肾通络方含药血清对肾小球系膜细胞cGMP/PKG信号通路的作用机制

目的研究芪苓益肾通络方含药血清对肾小球系膜细胞环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶(PK)G信号通路的作用机制。方法30只SD大鼠随机分为健康组(健康大鼠)、通络方组(芪苓益肾通络方干预)、西药组西药盐酸苯钠普利片(洛汀新)及格列喹酮比(糖适平干预):,每组10只,制备含药血清。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。将HMCs细胞分为空白组(5.6 mmol/L低糖+10%健康大鼠血清)、肾病组(30 mmol/L高糖+10%健康大鼠血清)、低剂量组(30 mmol/L高糖+5%通络方组大鼠血清+5%的健康大鼠血清)、高剂量组(30 mmol/L高糖+10%通络方组大鼠血清)及对照组(30 mmol/L高糖+10%西药组大鼠血清)。MTT检测HMCs细胞OD值;流式细胞仪检测HMCs细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HMCs细胞中核转录因子(NF)-κB、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1水平;黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA);Western印迹测HMCs细胞中cGMP、PKG蛋白表达。结果与空白组相比,肾病组细胞OD值升高,NF-κB、MCP-1、MDA增加,SOD、cGMP、PKG降低,差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率无明显差异(P>0.05);与肾病组相比,低剂量组细胞OD值及NF-κB、MCP-1、MDA水平降低,SOD、cGMP、PKG增加,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组与对照组细胞OD值及NF-κB、MCP-1、MDA水平降低、细胞凋亡率升高,SOD、cGMP、PKG水平增加,差异有统计学意义(P<0.05);与高剂量组相比,对照组细胞增殖、凋亡、NF-κB、MCP-1、MDA、SOD水平比较无明显差异(P>0.05),cGMP、PKG蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论芪苓益肾通络方通过刺激cGMP的表达,进而激活PKG,改善炎性及氧化应激水平,调控高糖诱导的肾小球系膜细胞的生物学行为,对肾功能起到保护作用。

肌球蛋白磷酸化靶向亚基家族与心血管疾病

肌球蛋白磷酸化靶向亚基(MYPT)家族包含5个成员,MYPT可通过其自身磷酸化影响肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)活性与细胞功能,调控Rho/ROCK通路和NO/cGMP/PKG通路,从而在心血管疾病的发生发展中发挥重要作用。现就MYPT家族成员的结构、与细胞功能及信号通路的关系及其在心血管疾病中的作用机制进行综述,为心血管疾病的研究和治疗提供理论基础。

氯胺酮对哮喘大鼠离体气管平滑肌的舒张作用及机制探讨

目的观察氯胺酮舒张哮喘大鼠离体气管平滑肌的作用及其与大电导钙激活钾通道(BKca)及蛋白激酶G(PKG)信号传导系统的关系。方法将SD大鼠以卵蛋白(OVA)腹腔注射法及连续滴鼻法制备哮喘大鼠模型,每只大鼠制备2～3条离体气管条,观察以10-2、10-1、4×10-1、10×10-1mg/mL的氯胺酮对乙酰胆碱预收缩后的哮喘大鼠气管环张力的影响。然后用BKca特异性阻断剂IBTX(3×10-6M)或PKG抑制剂KT-5823(2×10-6M)孵育后,观察4×10-1mg/mL的氯胺酮对哮喘大鼠离体气管环肌张力的舒张作用。结果浓度分别为10-2、10-1、4×10-1及10×10-1mg/mL的Ket对哮喘大鼠气管环的舒张效应分别为4.61%±1.85%、14.02%±3.96%、70.10%±11.12%,100%,各浓度间舒张效应比较有统计学差异(P均<0.05)。用IBTX或KT-5823孵育后,4×10-1mg/mL的Ket使气管平滑肌的舒张作用分别为51.32%±8.27%、52.15%±7.94%,与无阻滞剂孵育组(70.10%±11.12%)比较有统计学差异(P<0.05)。结论氯胺酮对哮喘大鼠气管平滑肌有舒张作用并呈剂量依赖性,其作用机制可能与BKca和PKG信号传导系统有关。

电针对高血压前期Dahl盐敏感大鼠肾脏保护作用机制研究

目的:观察电针"曲池""足三里"穴对高血压前期Dahl盐敏感(DS)大鼠肾脏NO/c GMP/PKG信号通路的影响及组织形态的改变,探讨电针"曲池""足三里"对高血压前期肾脏损害保护作用机制。方法:盐抵抗大鼠(DR)10只作为正常组;DS大鼠30只,随机分为模型组、针刺组和非穴位组,每组10只。采用高盐饲料喂养的方法诱发高血压前期模型。电针组电针"曲池""足三里"穴,1次/d,6次/周,共5周。非穴位组取双侧髂嵴上10~15 mm、后正中线旁开20mm区段内一个固定对照点,治疗方法同电针组。测量大鼠治疗期间血压变化情况以及治疗后血清血清尿素氮(UREA)、血肌酐(CREA)、血尿酸(UA)含量;ELISA法检测NO含量;荧光定量PCR检测大鼠肾组织溶解型鸟苷酸环化酶(s GC)、蛋白激酶G(PKG)的mRNA表达;HE染色检测大鼠肾组织病理形态变化。结果:治疗期间,电针组大鼠血压逐步下降。与正常组相比,模型组血清UREA、CREA、UA含量显著升高(P<0.05),NO含量显著降低(P<0.05),s GC、PKG mRNA表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,电针组血清UREA、CREA、UA含量显著降低(P<0.05),NO含量显著升高(P<0.05),s GC、PKG mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:电针能有效降低高血压前期DS大鼠血压,提高NO含量、c GMP、PKG基因表达,改善组织小管扩张、间质炎症细胞浸润等,这可能是电针通过NO/c GMP/PKG信号通路发挥对高血压前期DS大鼠肾脏保护作用机制之一。

IBTX及KT-5823在氯胺酮舒张大鼠离体气管平滑肌中的作用

目的：观察氯胺酮舒张大鼠离体气管平滑肌的作用与大电导钙激活钾通道（BKCa）及蛋白激酶G（PKG）信号传导系统的关系。方法：大鼠处死后,取主气管中段,分离气管周围的脂肪及疏松结缔组织,再剪成3~5mm的气管条,观察10-2mg/ml,10-1mg/ml,4×10-1mg/ml及10×10-1mg/ml的氯胺酮对乙酰胆碱预收缩后气管条张力的作用。然后用BKCa特异性阻断剂IBTX（3×10-6M）或PKG抑制剂KT-5823（2×10-6M）孵育气管条后,观察4×10-1mg/ml的氯胺酮对离体大鼠气管条的影响。结果：氯胺酮可以剂量依赖性舒张大鼠离体气管平滑肌;用IBTX或KT-5823孵育后,4×10-1mg/ml的氯胺酮引起的气管舒张作用减弱（P〈0.05）。结论：氯胺酮对大鼠气管平滑肌呈剂量依赖性舒张作用;其舒张作用与氯胺酮激活PKG信号传导系统和BKCa有关。

基于网络药理学分析复方利血平氨苯蝶啶片降压作用机制与验证研究

复方利血平氨苯蝶啶片是由我国学者研发的复方降压药,至今仍在临床广泛使用,但其降压作用机制仍有待阐释。本文拟基于网络药理学分析其降压作用机制并在细胞水平进行初步研究验证。本文通过Swiss Target Prediction数据库收集复方利血平氨苯蝶啶片中4种化学成分的作用靶点;通过TTD、OMIM数据库选取高血压病的相关蛋白靶标;利用STRING数据库构建复方利血平氨苯蝶啶片-高血压病网络模型;通过Metascape数据库对交集靶点进行GO富集分析和通路富集分析;采用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)分别经1μmol·L^(-1)血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导处理,低中高浓度复方利血平氨苯蝶啶片原料(0.01、0.1和1μmol·L^(-1))进行干预,Western blot法检测HUVEC中磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(phosphatidylinositol-3-kinase/protein serine threonine kinase/endothelial nitric oxide synthase,PI3K/Akt/eNOS)通路和VSMC中环磷酸鸟苷酸/环磷酸鸟苷酸依赖的蛋白激酶G(cyclic guanosinc monophosphate/cGMP-dependent protein kinase,cGMP/PKG)通路的变化。网络药理学分析揭示,复方利血平氨苯蝶啶片降压作用与血管张力调节、肾上腺素受体激活、蛋白激酶活性等密切相关,其中涉及cGMP/PKG信号通路、血管平滑肌收缩、调控神经活动的配体-受体相互作用、心肌细胞肾上腺素信号传导、钙信号通路等信号通路。细胞水平研究证实,复方利血平氨苯蝶啶片处理升高HUVEC中磷酸化磷酯酰肌醇-3激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein serine threonine kinase,p-Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(phosphorylated endothelial nitric oxide synthase,p-eNOS)以及VSMC中eNOS、磷酸化血管舒张剂刺激磷蛋白(phosphorylated vasodilator-stimulated phosphoprotein,p-VASP)、PKG蛋白水平。复方利血平氨苯蝶啶片通过多靶点、多通路发挥降压作用,进一步研究证实,激活PI3K/Akt/eNOS通路诱导内皮依赖的NO/cGMP/PKG信号,从而舒张血管可能是其重要作用机制之一。