PKGIα通路抑制剂DT-3对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨PKGIα信号通路特异性抑制剂DT-3对胃癌细胞增殖和迁移的影响。方法:利用生物信息学分析,基于GEO、TCGA、HPA、Kaplan-Meier plotter数据库和GEPIA在线分析网站对PKGI在组织中的表达进行差异分析并探讨PKGI和PKGIα在胃癌患者中的预后情况。采用CCK-8、克隆形成实验检测DT-3对细胞增殖的影响,划痕愈合实验观察DT-3对细胞迁移的影响;Western blot-ting法验证PKGIα的蛋白表达和相关性分析。结果:胃腺癌组织中PKGI mRNA表达增高,在42种胃癌细胞株里有27种能检测到PKGI mRNA的表达,高表达PKGIαmRNA的胃癌组织更具肿瘤侵袭性;免疫组织化学(IHC)结果展示PKGI蛋白表达情况,12例胃癌组织中观察到6例存在中、高强度的细胞质染色阳性反应;PKGI和CDH1的表达呈负相关(r=-0.74,P<0.05);生存分析显示PKGI和PKGIαmRNA高表达对胃腺癌患者的总生存期(OS)有统计学意义(HR>1,logrank P<0.05)。实验结果表明PKGIα蛋白在人胃癌细胞株AGS中的表达增加;DT-3抑制细胞增殖迁移(P<0.05),使NF-κB磷酸化p65表达降低,且PKGI和NF-κB p-p65的表达呈极强正相关(r=0.957,P<0.05)。结论:通过抑制PKGIα信号通路,可以有效抑制胃癌细胞增殖迁移。

血小板源性生长因子-BB和cGMP依赖性蛋白激酶Iα对大鼠血管平滑肌细胞形态和骨架的影响(英文)

原代大鼠主动脉平滑肌细胞采用植块法培养。用编码cGMP依赖性蛋白激酶Iα基因的重组腺病毒(pAd-cGMP dependent protein kinase Iα,pAd-PKGIα)感染原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞和常规培养的大鼠肺动脉血管平滑肌细胞株CS-54,并用血小板源性生长因子-BB(plateletderivedgrowth factor-BB,PDGF-BB)作用细胞,研究PKGIα和PDGF-BB对形态学和细胞骨架的影响。倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光观察细胞应激纤维结构。结果表明PDG-BB不仅可以使CS-54细胞和原代大鼠主动脉平滑肌细胞的形态发生明显的变化,也使得细胞原有的应激纤维的数量减少,分布紊乱;pAd-PKGIα感染并经8-APT-cGMP刺激后应激纤维又可以重新恢复。这些结果证明PDGF-BB对大鼠血管平滑肌细胞株CS-54和原代大鼠主动脉平滑肌细胞形态和细胞骨架结构有影响,这些影响可以因PKGIα的表达和活性的增加而逆转。