紫草素通过HSP90/PKM2/HIF-1α介导脂多糖诱导的RAW264.7 巨噬细胞炎症反应

目的探讨紫草素对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞构建体外炎症模型,将细胞分为5组:空白组、LPS(20μg/ml)组和紫草素(0.8,1.4,2.0μmol/L)组。通过ELISA法检测紫草素对TNF-α、IL-6、IL-4和IL-10炎症因子分泌和生成的影响;免疫荧光法和Western blot法检测各组细胞M1型标志蛋白(iNOS)、M2型标志蛋白(Arg-1)表达水平;Western blot法检测各组细胞中糖酵解相关蛋白HSP90、PKM2和HIF-1α蛋白表达水平;采用试剂盒检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和乳酸水平;免疫共沉淀实验(CO-IP)检测各组细胞中HSP90、PKM2、HIF-1α蛋白之间相互作用。结果ELISA实验结果显示,与空白组相比,LPS组M1型相关因子TNF-α、IL-6分泌增多(P<0.05),M2型相关因子IL-10、IL-4分泌减少(P<0.05);而相比于LPS组,紫草素组M1型相关因子TNF-α、IL-6分泌降低(P<0.05),M2型相关因子IL-10、IL-4分泌上升(P<0.05),且与紫草素浓度呈剂量依赖性。免疫荧光和Western blot结果显示,与空白组相比,LPS组iNOS蛋白表达量和荧光强度增加(P<0.01);而与LPS组相比,紫草素组蛋白表达和荧光强度降低(P<0.001),Arg-1的表达趋势与iNOS相反(P<0.001)。与空白组相比,LPS组ATP和乳酸的释放增加,而与LPS组相比,紫草素组ATP和乳酸释放减少。与空白组相比,LPS组HIF-1α和PKM2表达显著增加(P<0.001),而与LPS组相比,紫草素组HIF-1α和PKM2表达呈剂量依赖性降低(P<0.001),但HSP90无明显变化,CO-IP实验表明紫草素破坏了HIF-1α与HSP90之间的相互作用。结论紫草素可调节LPS刺激的RAW264.7细胞M1/M2极化,改变M1和M2型巨噬细胞标记物水平,并通过破坏HSP90/PKM2/HIF-1α信号通路间相互作用,保护RAW264.7细胞减轻LPS诱导炎症反应,从而影响炎症的进展。

半枝莲总黄酮通过Smad4/PKM2/HIF-1α改善高糖诱导的足细胞损伤的机制研究

目的:观察半枝莲总黄酮(TF-SB)对高糖诱导的足细胞(MPC-5)损伤及Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路的影响。方法:首先采用CCK8法分析TF-SB对MPC-5细胞的安全性及药效浓度。随后MPC-5分为空白组、模型组和TF-SB组,除空白组外,模型组和TF-SB组采用高糖诱导建立MPC-5细胞损伤模型,分别检测TF-SB对MPC-5细胞ATP、凋亡和ROS水平的影响,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子(IL-1β、TNF-α、MCP-1)含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖酵解基因(GLU1、PFK1和HK1)表达丰度,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路中相关蛋白的表达水平;结果:与空白组相比,模型组MPC-5细胞ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著下降,凋亡和ROS水平、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量均显著增加(P<0.01);与模型组相比,TF-SB组ATP含量、GLU1、PKF1和HK1表达丰度显著升高,凋亡和ROS水平、IL-1β、TNF-α与MCP-1的含量均显著降低(P<0.01)。此外,与空白组相比,模型组Smad4、HIF-1α蛋白表达及细胞核中PKM2表达显著升高,细胞质中PKM2表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,TF-SB组Smad4、HIF-1α表达及细胞核中PKM2表达显著降低,而细胞质中PKM2表达显著升高(P<0.01);结论:TF-SB促进MPC-5细胞线粒体活性诱导糖酵解,进而抑制炎症的分泌,达到治疗糖尿病肾病的作用可能与通过抑制Smad4/PKM2/HIF-1α信号通路有关。

姜黄素通过调控HIF-1α/miR-760/LTBP2机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果研究

目的:探究姜黄素通过调控缺氧诱导因子-1α/微小RNA-760/潜在转化生长因子结合蛋白2(HIF-1α/miR-760/LTBP2)机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果。方法:40只SD大鼠中随机取10只作为正常组,正常饲养不作处理;另30只大鼠采用槟榔碱诱导建立口腔黏膜下纤维化模型。将30只模型大鼠随机分为模型组、姜黄素组和阳性对照组,每组10只。姜黄素组和阳性对照组大鼠分别予以相应药物,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续给药8周。比较各组大鼠张口度、颊黏膜组织变化、纤维化标志物及HIF-1α/miR-760/LTBP2信号轴表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠张口度明显减小(P<0.05),颊黏膜评分、颊黏膜组织TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1αmRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组和阳性对照组张口度均明显增大(P<0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1αmRNA、LTBP2 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),且姜黄素组张口度大于阳性对照组(P<0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ、miR-760 mRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均低于阳性对照组(P<0.05)。结论:姜黄素可能降低HIF-1α、miR-760、LTBP2表达,抑制口腔黏膜下纤维化。

紫草素通过PKM2/Hif-1α通路抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞株增殖的影响及其潜在机制

目的 探究紫草素对人视网膜母细胞瘤Y79细胞株增殖的影响及其潜在机制.方法 采用细胞计数的方法统计Y79细胞在不同处理情况下的细胞密度.采用免疫印迹方法检测Y79人视网膜母细胞瘤细胞 (Y79细胞) 在不同处理情况下的M2型丙酮酸脱氢酶 ( PKM2) 和低氧诱导因子-1α ( hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α) 的蛋白水平.采用转染PKM2-siRNA或Hif-1α-siRNA的方法, 分别下调 Y79 细胞中的PKM2或Hif-1α水平.结果 处理紫草素可抑制Y79细胞生长, 同时, 紫草素下调Y79细胞内的PKM2和Hif-1α水平. PKM2-siRNA或Hif-1α-siRNA转染Y79 细胞下调PKM2 或Hif-1α, 可分别抑制Y79 细胞的生长.预处理抑制PKM2或Hif-1α均可阻断紫草素引起的Y79细胞生长变缓.抑制PKM2可引起Y79细胞内Hif-1α水平下调;且抑制PKM2可阻断紫草素对Y79细胞内Hif-1α水平的影响.结论 紫草素可通过抑制PKM2进而下调Hif-1α, 从而抑制Y79细胞的增殖.

HIF-1a与PKM2在胆管腺癌中的表达及相关性研究

胆管癌是一种来源于肝外胆管上皮的消化系统恶性肿瘤，早期诊断困难，预后差，严重威胁人类健康。胆管癌的组织学分类中以腺癌占绝大多数，发病机制尚不明确。肿瘤的发生、发展与某些生物学标志物密切相关，缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a，HIF-1a）是在缺氧状态下普遍存在于人类机体的核转录因子，与肿瘤多种生物学行为密切相关，在肿瘤的发生和发展中具有重要的意义。

WIN55212-2通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路抑制糖酵解并减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究大麻素受体激动剂WIN55212-2(WIN)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,并探讨其通过糖酵解发挥作用的可能机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)创建小鼠脓毒症ALI模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照(control)组、LPS组(腹腔注射10 mg/kg LPS)、LPS+WIN组(注射LPS前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN)和LPS+WIN+MHY1485[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化剂]组(LPS造模前1 d腹腔注射10 mg/kg MHY1485,并在造模前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN和10 mg/kg MHY1485),每组6只。造模24 h后取材,计算肺指数;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA检测肺组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10表达水平,以及血清乳酸和乳酸脱氢酶A(LDHA)水平;Western blot检测mTOR/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(PFKFB3)信号通路相关蛋白水平。结果:相比于control组,LPS组小鼠肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织中IL-10水平降低(P<0.05),IL-1β水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),磷酸化mTOR(p-mTOR)、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+WIN组肺指数降低(P<0.05),HE染色显示肺组织受损减轻,肺组织IL-1β水平降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平降低(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平降低(P<0.05)。相较于LPS+WIN组,LPS+WIN+MHY1485组肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织IL-1β水平升高(P<0.05),IL-10水平降低(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:WIN55212-2可以减轻脓毒症小鼠ALI,其机制可能是通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路,抑制糖酵解,减轻炎症反应。

2-APB通过PKCα/HIF-1α信号通路抑制H_(2)O_(2)诱导的软骨细胞凋亡

目的探讨2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB)对H_(2)O_(2)诱导的软骨细胞凋亡的作用及其机制。方法实验分为Control组、H_(2)O_(2)组、2-APB组和H_(2)O_(2)+2-APB组。CCK-8法检测各组细胞活力;显微镜下观察2-APB对H_(2)O_(2)诱导的软骨细胞形态变化的影响;TUNEL法和流式细胞术检测软骨细胞凋亡情况;流式细胞术检测脂质活性氧(ROS)水平;Western blot法检测2-APB对H_(2)O_(2)诱导的各组细胞中Cleaved-PARP、p-PKCα和HIF-1α蛋白的表达情况;免疫荧光法检测PKCα抑制剂BIM-Ⅰ对H_(2)O_(2)诱导的各组细胞中HIF-1α的荧光表达情况。结果2-APB对H_(2)O_(2)诱导的软骨细胞凋亡具有抑制作用,且当2-APB浓度为100μmol/L时抑制效果最为显著(F=235.80,P<0.01);2-APB能够抑制H_(2)O_(2)所致软骨细胞凋亡阳性率(F=114.80,P<0.01)以及ROS的水平(F=52.99,P<0.01),并且抑制Cleaved-PARP(F=10.10,P<0.05)、p-PKCα(F=24.56,P<0.05)和HIF-1α(F=6.85,P<0.05)蛋白的表达;PKCα抑制剂BIM-Ⅰ能够抑制H_(2)O_(2)所致HIF-1α荧光强度的增加。结论2-APB可以通过抑制PKCα/HIF-1α通路减少H_(2)O_(2)诱导的软骨细胞凋亡,进而保护软骨细胞。

基于Nrf2/HO-1/HIF-1α通路探讨升降散对EAE鼠巨噬细胞的调控作用

目的为探讨升降散(SJP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)鼠巨噬细胞的调控作用,并进一步揭示其作用的靶点。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为正常组(CON)、模型组(MOD)、升降散低剂量组(SJP-L)、升降散高剂量组(SJP-H)和醋酸泼尼松组(PAT)。除正常组以外,余下组别小鼠均构建EAE模型。通过行为学评分、体重变化和组织HE染色病理学评分评估药物疗效。采用免疫组织化学染色法测定CD86和CD206的表达,通过蛋白质免疫印迹法检测脊髓核因子E2相关因子2(Nuclear factor-E2-related factor2,Nrf2),血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1),超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD),缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达水平。结果与MOD相比,SJP各剂量组和PAT组显著缓解了EAE小鼠神经功能的缺损(P<0.05或P<0.01),减轻了中枢神经系统的炎症浸润(P<0.01或P<0.001);与CON组相比,MOD组的CD86表达明显升高(P<0.001),CD206的表达明显降低(P<0.001),与MOD组相比,SJP组抑制了CD86的表达(P<0.01或P<0.001),上调了CD206的表达(P<0.001);与CON组相比,MOD组Nrf2、HO-1和SOD-1蛋白显示出下调趋势(P<0.05,P<0.01或P<0.001),而HIF-1α被上调(P<0.01),SJP干预后上调了Nrf2、HO-1和SOD-1的水平(P<0.01),抑制了HIF-1α的表达(P<0.01)。结论升降散能通过调节巨噬细胞M1/M2的免疫平衡改善EAE鼠的临床症状,并减轻病灶的炎症浸润。同时高剂量升降散对Nrf2/HO-1/HIF-1α通路的活化具有一定的调节作用。

过敏性紫癜患儿血清miRNA-125b、HIF-1α水平与Th1/Th2比值的相关性

目的探讨过敏性紫癜(HSP)患儿血清微RNA(miRNA)-125b、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平与Th1/Th2比值的相关性。方法前瞻性选取2020年1月至2023年12月商洛市中心医院收治的97例HSP患儿为试验组,97名健康体检儿童为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测miRNA-125b表达,酶联免疫吸附试验检测HIF-1α、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6及IL-1β等水平,流式细胞术检测Th1和Th2细胞数量及Th1/Th2比值。采用Pearson相关分析法分析miRNA-125b和HIF-1α与Th1/Th2比值的关系,并通过受试者操作特征(ROC)曲线评估血清miRNA-125b、HIF-1α及相关细胞因子水平对HSP的诊断价值。结果试验组患儿血清中miRNA-125b、HIF-1α、Th2细胞水平分别为0.82±0.18、125.78±20.54、7.83±1.57,均明显高于对照组(0.37±0.11、56.20±8.99、4.60±0.55),而Th1细胞、Th1/Th2比值水平分别为7.43±1.66、1.02±0.11,均明显低于对照组(11.89±2.80、2.90±0.58),差异均有统计学意义(P<0.05)。试验组患儿血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-4的水平分别为(32.5±4.8)、(21.3±3.9)、(11.0±1.8)、(5.3±1.1)pg/mL,均明显高于对照组[(14.8±3.7)、(11.7±2.8)、(6.0±1.3)、(2.5±0.7)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miRNA-125b和HIF-1α与Th1/Th2比值、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均呈显著负相关(P<0.05)。血清HIF-1α和miRNA-125b诊断HSP的曲线下面积分别为0.821和0.977。结论HSP患儿血清miRNA-125b和HIF-1α水平升高,Th1/Th2比值及相关免疫因子水平降低,检测血清HIF-1α和miRNA-125b水平对于诊断HSP有较高的临床价值。

肝细胞癌中HIF-1α依赖性的ATP2C1过表达指示不良预后

缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor, HIF)与肝细胞癌的发生发展相关。HIF-1α在包括肝细胞癌在内的多种癌症类型的发生发展中发挥着重要作用,但其在肝细胞癌中的靶基因尚未完全确定。为找到HIF-1α在肝癌中新的致癌靶点,通过整合HIF-1α敲除的RNA-seq数据,HIF-1α的ChIP-Seq数据,HIF-1α在肝癌中的共表达基因,以及肝癌相关的GEO(Gene Expression Omnibus)数据集,寻找HIF-1α的潜在靶基因。通过分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)肝癌数据库、GEO和HPA(Human Protein Atlas)数据集,研究HIF-1α与ATP2C1的相关性,ATP2C1在肝癌中的表达及预后。通过建立物理和化学(氯化钴)缺氧模型验证ATP2C1与低氧及HIF-1α的关系。通过GO(Gene Ontology),KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)和GSEA(Gene Set Enrichment Analysis)分析探索ATP2C1的生物学功能。通过设计体外实验证实ATP2C1对HCC的作用。利用STRING和BioGRID两个蛋白互作在线数据库获得ATP2C1的互作蛋白,并研究其在肝癌中的表达及相关性。通过整合及筛选数据,ATP2C1被鉴定为一个HIF-1α的潜在靶基因。ATP2C1与HIF-1α高度相关,在肝细胞癌中高表达,且伴随有不良预后。富集分析与体外实验的结果表明ATP2C1参与调控HCC细胞的增殖迁移。蛋白互作数据表明ATP2C1与TMEM165存在互作关系,生存分析表明TMEM1651高表达的肝癌患者预后较差。相关性分析的结果显示ATP2C1与肝癌中TMEM165和MMP2的表达高度相关,表明ATP2C1可能与TMEM165和MMP2存在互作关系,并参与了肝癌的进展过程。结果表明,ATP2C1是HIF-1α的靶基因和肝细胞癌的生物标志物,其敲低抑制了HCC的增殖和迁移。

黑素瘤患者组织中PKM2和HIF-1α的表达及其临床意义

目的:探究黑素瘤患者组织中络氨酸激酶M2(PKM2)以及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平变化及其临床意义。方法:对2018年1月-2019年1月92例在笔者医院接受治疗的黑素瘤患者相关资料进行回顾性分析,患者均为手术治疗,分别测定患者手术获取黑素瘤组织以及黑素瘤旁正常组织中PKM2、HIF-1α表达水平。不同组织PKM2、HIF-1α病理染色结果分析,比较不同组织PKM2、HIF-1α表达水平差异,不同临床特征患者PKM2、HIF-1α表达水平差异,比较不同预后患者PKM2、HIF-1α表达。结果:PKM2和HIF-1α分别在细胞质以及细胞核表达,阳性表达主要显示为棕黄色以及黄色粒状物质,而阴性则显示为蓝色粒状物质。黑素瘤组织PKM2、HIF-1α表达阳性率高于黑素瘤旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移情况与分化程度不同患者黑素瘤组织中PKM2表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤分期不同患者黑素瘤组织中HIF-1α表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。92例患者中位随访时间为10.34个月,随访期内失访3例,剩余89例患者中预后不良患者13例;预后良好组患者黑素瘤组织PKM2、HIF-1α表达均明显低于预后不良组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黑素瘤患者组织中PKM2、HIF-1α高表达,其表达水平与患者病情进展以及预后情况关系密切,可用于评估患者病情并预测患者预后。

血清IL-10、HIF-1α、β2-MG与肾小球肾炎患者肾功能损害程度的相关性分析

目的:分析血清白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-l alpha,HIF-1α)、β2微球蛋白(β2-microglobin,β2-MG)联合检测与肾小球肾炎患者肾功能损害程度的相关性。方法:选取2020年7月至2023年4月我院收治的110例肾小球肾炎患者为研究对象。根据肾小球滤过率(Glomerular filtration rate,GFR)水平对患者的肾脏损伤程度进行分组,将患者分为重度受损组(n=42);中度受损组(n=37)以及轻度受损组(n=31)。对比三组入院时血清IL-10、HIF-1α、β2-MG及血肌酐(Serum creatinine,Scr)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、胱抑素C(Cystatin C,CysC)水平,分析其相关性,采用接受者操作特性(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)分析入院时各指标联合检测对重度肾功能损伤的诊断价值。结果:入院时血清IL-10、HIF-1α、β2-MG、sCr、BUN、Cys-C水平比较:重度受损组>中度受损组>轻度受损组(P<0.05);肾小球肾炎患者血清IL-10、HIF-1α、β2-MG与血清sCr、BUN、Cys-C均呈正相关(P<0.05);入院时血清IL-10、HIF-1α、β2-MG水平联合诊断肾功能重度受损患者的曲线下面积(Area Under Curve,AUC)为0.906。结论:血清IL-10、HIF-1α、β2-MG水平与肾小球肾炎患者肾功能损害程度密切相关,联合检测其水平对临床评估肾功能损伤程度具有重要意义。

HIF-1α/ALYREF/PKM2信号轴在膀胱癌糖酵解和肿瘤发生中的作用

背景与目的 丙酮酸激酶肌肉同工酶M2(pyruvate kinase muscle isozyme M2,PKM2)是糖酵解的限速酶,参与肿瘤的代谢和生长。PKM2在肿瘤中的调控网络复杂,在膀胱癌中尚未得到充分研究。PKM2 mRNA的5-甲基胞嘧啶(5-methylcytidine,m5C)修饰可能参与了膀胱癌的发病过程,机理有待深入研究。本文旨在探讨PKM2在膀胱癌中的生物学功能及其调控机制。方法 用Western blotting、qRT-PCR和免疫组织化学方法检测PKM2和Aly/REF输出因子(Aly/REF export factor,ALYREF)的表达水平。通过一系列体内实验和体外试验,研究膀胱癌细胞的生物学过程。通过RNA免疫沉淀、RNA测序和双荧光素酶报告分析,探讨PKM2在膀胱癌中的调控机制。结果 在膀胱癌中,我们首次证明了ALYREF稳定了PKM2的mRNA,并与其3’-非翻译区的m5C位点结合。ALYREF过表达通过PKM2介导的糖酵解促进膀胱癌细胞增殖。此外,PKM2和ALYREF高表达与膀胱癌患者生存不佳相关。最后,我们发现缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpla,HIF-1α)除了直接激活转录,还通过激活ALYREF间接上调PKM2的表达。结论 HIF-1α/ALYREF/PKM2轴上PKM2 mRNA的m5C修饰可能促进了膀胱癌的葡萄糖代谢,为膀胱癌的治疗提供了新的靶点。

HIF-1α、HIF-2α和MT在人甲状腺乳头状癌中的表达及其意义

目的:探讨HIF-1α、HIF-2α和MT在人甲状腺乳头状癌中的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测70例人甲状腺乳头状癌组织和40例正常甲状腺组织中HIF-1α、HIF-2α和MT的表达水平,并分析这三种蛋白表达与临床病理指标的相关性及三者间的表达相关性。结果:在70例人甲状腺乳头状癌组织中,HIF-1α、HIF-2α和MT的阳性表达率分别为52.86%(37/70)、50.00%(35/70)和44.29%(31/70)。HIF-1α、HIF-2α和MT的表达与颈部淋巴结转移有显著相关性(P=0.034,P=0.022,P=0.032)。此外,HIF-1α与HIF-2α的表达呈显著正相关(rs=0.258,P=0.031),HIF-1α与MT的表达呈显著正相关(rs=0.266,P=0.026),HIF-2α与MT的表达呈显著正相关(rs=0.259,P=0.030)。两种蛋白(HIF-1α/HIF-2α,HIF-1α/MT,HIF-2α/MT)联合表达较一种蛋白表达与颈部淋巴结转移更具相关性(HIF-1α/HIF-2α:P=0.004,HIF-1α/MT:P=0.024,HIF-2α/MT:P=0.029)。HIF-1α、HIF-2α和MT三种蛋白联合表达较两种或一种蛋白表达与颈部淋巴结转移更具有相关性(P=0.017)。结论:HIF-1α、HIF-2α和MT在人甲状腺乳头状癌组织中的表达与颈部淋巴结转移密切相关,且三者的表达密切相关,HIF-1α、HIF-2α和MT在人甲状腺乳头状癌中的表达情况可作为监测甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的指标。

低氧和牙周炎对牙周组织中HIF-1α和MMP2表达的影响

目的研究低氧条件下HIF-1α、MMP2在大鼠牙周炎牙周组织中的表达及其与牙周炎的相关性,初步探讨HIF-1α与MMP2之间的关系。方法建立低氧牙周炎动物模型,40只大鼠采用简单随机化分组法分为常氧组、常氧牙周炎组、低氧组、低氧牙周炎组,每组10只,分别检测牙龈指数、菌斑指数、探诊深度及牙槽骨吸收度4项牙周炎临床指标;牙周组织切片HE染色观察牙周炎症程度;免疫组化及Western blot检测牙周组织中HIF-1α、MMP2的表达。结果牙周炎各临床指标及组织切片的HE染色均表明低氧牙周炎组大鼠牙周组织炎症程度最重;与常氧两组比较,低氧组均促进了牙周组织中HIF-1α、MMP2的表达(P<0.05);与非牙周炎组比较,牙周炎组HIF-1α、MMP2表达明显增加(P<0.05);低氧牙周炎组HIF-1α、MMP2表达最高(P<0.05)。结论低氧促进了牙周炎组织中HIF-1α、MMP2的表达,加速了牙周炎的发展进程。

HIF-1α和HIF-2α上调非小细胞肺癌中CCR7的表达

背景与目的CCR7与非小细胞肺癌的淋巴结转移密切相关,但CCR7的上调机制却不是很清楚。本研究通过观察趋化因子受体CCR7和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)在非小细胞肺癌组织中的表达及相互关系,探讨非小细胞肺癌CCR7上调机制。方法应用免疫组织化学染色(SP法)检测94例非小细胞肺癌组织中CCR7、HIF-1α和HIF-2α的表达,并联合运用RNAi技术沉默人肺腺癌A549细胞中HIF-1α、HIF-2α表达,采用RT-PCR和免疫荧光方法观察CCR7的变化情况,分析CCR7表达与HIF-1α、HIF-2α之间的关系。结果免疫组织化学结果显示:CCR7主要表达于癌细胞质和(或)胞膜,HIF-1α、HIF-2α主要表达于癌细胞核和(或)细胞质,非小细胞肺癌中CCR7、HIF-1α和HIF-2α的表达率分别为75.53%(71/94)、54.25%(51/94)和70.21%(66/94),χ2检验显示CCR7表达与非小细胞肺癌的临床病理分期(P<0.001)和淋巴结转移(P=0.001)有密切关系,而与年龄、性别、组织学类型无关(P>0.05)。此外,CCR7和HIF-1α、HIF-2α表达正相关(r=0.272,P<0.01)(r=0.225,P<0.05)。向A549细胞中转染HIF-1α、HIF-2α特异性siRNA,分别抑制HIF-1α、HIF-2α表达后发现CCR7的mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05)。结论CCR7表达与非小细胞肺癌侵袭转移密切相关,CCR7在NSCLC中过表达受HIF-1α和HIF-2α调控。

HIF-1α、ROCK-2、FoxM1在醋酸铅诱导PC12细胞损伤中的表达变化

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶-2(Rho associated coiled coil forming protein kinase-2,ROCK-2)、叉头蛋白M1(forkhead box protein M1,Fox M1)在醋酸铅[Pb(Ac)_2]诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中的表达和意义。方法将PC12细胞暴露于不同浓度的Pb(Ac)_2(100、200、400μmol·L^(-1))24 h以诱导细胞发生损伤。采用噻唑蓝比色法检测细胞的存活率,倒置显微镜观察细胞形态的变化,乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,采用试剂盒检测丙二醛(malondialdehvde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,Hoechst 33342单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、ROCK-2、Fox M1、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia,Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。结果 MTT实验显示Pb(Ac)_2对PC12细胞具有明显抑制作用并呈剂量依赖性,与对照组相比,Pb(Ac)_2可增加细胞内LDH漏出率,升高MDA含量,降低SOD含量,诱导细胞发生凋亡。此外,Pb(Ac)_2上调细胞HIF-1α、ROCK-2的表达,下调Fox M1的表达,提高Bax/Bcl-2的表达比例。结论 Pb(Ac)_2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α、ROCK-2、FoxM 1的表达以及自由基损伤有关。

HIF-1α和HIF-2α基因在藏绵羊不同组织中的表达及其意义

高原低氧适应性研究对于了解高原土著动物的遗传进化和高原疾病的治疗有着重要意义。HIF(hypoxia inducible factor)是氧信号转导系统的重要转录因子,在细胞的低氧应答中起着关键作用。实验旨在研究HIF-1α和HIF-2α基因表达特征在藏绵羊低氧适应中的意义。采用RT-q PCR技术对藏绵羊HIF-1a和HIF-2a基因进行了组织表达分析。结果表明:HIF-1α和HIF-2α基因在藏绵羊的8种组织(心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑和脑干)中均有表达。HIF-1α基因在肺和小脑中有高水平表达,其他依次是肾、脑干、大脑、心、脾和肝。HIF-2α基因在肺中表达水平最高,其他依次是脑干、心、肾、小脑、大脑和肝。结论:该研究首次证实,HIF-1α和HIF-2α基因在藏绵羊脾、大脑、小脑和脑干中均有表达,且HIF-1α在小脑中的表达水平较高。HIF-1α和HIF-2α基因在藏绵羊上呈表达广泛性和组织差异性,与其他高原土著动物有着类似的表达特征。这种个别组织HIF-1α和HIF-2α表达水平的提高提示,其正是维持低氧环境下生物体功能活动正常运转的分子基础。

HIF-1α、MMP-2和VEGF在脑胶质瘤中的表达及相关性分析

0引言HIF-1α是缺氧条件下的一种转录因子,MMP-2是降解细胞外基质和基底膜的重要因子,VEGF有促进肿瘤血管生长的作用,三者在胶质瘤的发展和浸润中起重要作用。本研究检测HIF-1α、MMP-2和VEGF蛋白在不同脑组织中的表达情况以及与临床病理之间的关系,以探讨它们在胶质瘤发生、

ECHS1和PKM2蛋白在胆管癌中的表达及临床意义

目的探讨ECHS1和PKM2蛋白在胆管癌中的表达特点与预后的关系。方法采用免疫组化方法检测17例胆管癌及其癌旁正常胆管组织中ECHS1和PKM2蛋白的表达情况,并分析两种蛋白表达与胆管癌临床病理特征及预后的关系。结果ECHS1和PKM2蛋白在胆管癌组织中的阳性率分别为58.8%和64.7%,高于癌旁组织中的阳性率17.9%和21.4%,差异有统计学意义(P<0.05);ECHS1和PKM2蛋白与胆管癌患者性别、年龄及肿瘤直径无相关性,而与胆管癌分化程度、TNM分期及生存时间有相关性。结论 ECHS1和PKM2蛋白表达水平与胆管癌发生、发展及转移关系密切。