APE-1对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及PKM2表达的影响及机制探索

目的探索脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1(APE-1)对肝癌细胞裸鼠成瘤能力及丙酮酸激酶M2(PKM2)表达的影响及机制。方法基于沉默APE-1表达的肝癌Hep3B稳定细胞株,进行BALB/c-Nude裸鼠皮下成瘤。APE-1沉默组接种APE-1沉默表达的细胞,对照组接种转染空白质粒的细胞,每组10只裸鼠。8周后处死裸鼠,计算成瘤率,完整剥离肿瘤组织,称瘤体重量并计算肿瘤体积。免疫组化及Westernblot法检测肿瘤组织中APE-1及细胞增殖标志性蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、核KI-67抗原(Ki-67)表达。同样方法检测PKM2蛋白表达后,基于TCGA数据库中374例肝癌患者数据,分析APE-1与PKM2表达相关性,并比较PKM2不同表达肝癌患者中生存曲线差异。结果2组裸鼠成瘤率均为100%,APE-1沉默组的肿瘤重量及体积均小于对照组(P<0.05)。APE-1沉默组肿瘤组织中APE-1、PC-NA、Ki-67和PKM2蛋白表达均低于对照组(P<0.05)。APE-1和PKM2表达线性正相关(P<0.001),且PKM2在肝癌患者中高表达组和低表达组整体生存曲线分布比较差异有统计学意义(P<0.001),低表达组生存期更长。结论APE-1可能通过影响PKM2抑制肝癌细胞裸鼠成瘤能力,具有较强的抗肿瘤潜能。

黑素瘤患者组织中PKM2和HIF-1α的表达及其临床意义

目的:探究黑素瘤患者组织中络氨酸激酶M2(PKM2)以及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平变化及其临床意义。方法:对2018年1月-2019年1月92例在笔者医院接受治疗的黑素瘤患者相关资料进行回顾性分析,患者均为手术治疗,分别测定患者手术获取黑素瘤组织以及黑素瘤旁正常组织中PKM2、HIF-1α表达水平。不同组织PKM2、HIF-1α病理染色结果分析,比较不同组织PKM2、HIF-1α表达水平差异,不同临床特征患者PKM2、HIF-1α表达水平差异,比较不同预后患者PKM2、HIF-1α表达。结果:PKM2和HIF-1α分别在细胞质以及细胞核表达,阳性表达主要显示为棕黄色以及黄色粒状物质,而阴性则显示为蓝色粒状物质。黑素瘤组织PKM2、HIF-1α表达阳性率高于黑素瘤旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移情况与分化程度不同患者黑素瘤组织中PKM2表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤分期不同患者黑素瘤组织中HIF-1α表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。92例患者中位随访时间为10.34个月,随访期内失访3例,剩余89例患者中预后不良患者13例;预后良好组患者黑素瘤组织PKM2、HIF-1α表达均明显低于预后不良组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黑素瘤患者组织中PKM2、HIF-1α高表达,其表达水平与患者病情进展以及预后情况关系密切,可用于评估患者病情并预测患者预后。

过表达PKM2增加卵巢癌细胞的增殖和迁移

目的探究人M2型丙酮酸激酶（pyruvatekinasetypeM2，PKM2）对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的影响。方法将PKM2cDNA以XhoI和NotI位点克隆入pLVX—Neo—IRES．ZsGreenlvector慢病毒载体中，得到的重组载体及空载体分别与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2．G共转染入293T包装细胞．以得到PKM2过表达的慢病毒表达载体；将其转导入SKOV3细胞后用G418筛选稳定转染的细胞，分别测定PKM2过表达前后SKOV3细胞的增殖和迁移的改变。结果测序鉴定表明PKM2重组慢病毒表达载体正确无误。Western印迹检测结果显示转导PKM2慢病毒表达载体可增加SKOV3细胞中PKM2的表达。MTT测定和细胞划痕实验结果表明过表达PKM2可增加SKOV3的增殖和迁移。结论PKM2过表达可增加卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移。