缺刻缘绿藻磷脂酶A2(PLA2)的基因特征与功能

为进一步鉴定磷脂酶A2(PLA2)在缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa)油脂合成过程中的具体功能,研究利用RACE技术从缺刻缘绿藻H4301中克隆到pla2基因(Mipla2)的cDNA序列全长,共1082 bp。该全长包含180 bp的5′-非翻译区(UTR),464 bp的3′-UTR和438 bp的开放阅读框(ORF),编码1个由145个氨基酸组成的蛋白。其基因全长为1594 bp,含有3个内含子和4个外显子。多序列比对结果显示,MiPLA2具有保守的Ca^(2+)结合基序和催化活性基序。系统演化分析结果显示MiPLA2属于植物sPLA2-XIA家族。利用同源重组技术构建了pET32a-Mipla2原核表达载体,经过诱导和纯化,得到了分子量大小为31.36 kD的重组MiPLA2蛋白。体外酶促反应的产物经薄层层析分析显示,重组表达的MiPLA2具有催化磷脂酰胆碱(PC)水解成溶血磷脂酰胆碱(LPC)的功能。研究结果有助于解析花生四烯酸被优先用于三酰甘油(TAG)合成的途径与机理,为通过pla2基因的遗传改造提高该藻油脂产率的应用研究奠定了基础。

分泌型磷脂酶PLA2G5的生物学功能及其抑制剂研究进展

分泌型磷脂酶PLA2G5属于磷脂酶A2超家族的一员,在免疫细胞和非免疫细胞中均有表达.研究表明,PLA2G5参与生物学事件的发生发展,在特定的病理条件下具有诱导作用.本文简要阐述了PLA2G5的来源、结构特征、生物学功能和在疾病中的作用,以及现有或潜在的PLA2G5抑制剂,以期探索基于PLA2G5的治疗新靶标.

磷脂酶PLA2-Ⅰ B在胃癌组织中的表达下降

目的:明确磷脂酶PLA2-ⅠB在正常小鼠胃组织中的细胞表达类型,检测PLA2-ⅠB在人胃癌组织中的表达情况。方法:利用Northern印迹验证PLA2-ⅠB在小鼠胃组织中的表达;利用原位杂交明确PLA2-ⅠB在正常小鼠胃组织中的细胞表达类型;利用反转录PCR检测14例人胃癌组织中PLA2-ⅠB的表达情况。结果:PLA2-ⅠB主要表达在小鼠腺胃的主细胞;与癌旁相比,PLA2-ⅠB的表达在93%的人胃癌标本中显著下降。结论:磷脂酶PLA2-ⅠB在胃癌组织中的表达下降。

荧光脂质体法研究芍药甘草汤对磷脂酶A_2的抑制效应及其配伍作用

目的采用荧光脂质体研究芍药甘草汤对磷脂酶A2(PLA2)的抑制效应及其配伍作用。方法以磷脂酰胆碱和胆固醇等为主要材料,采用薄膜分散法-超声-膜挤出-葡聚糖凝胶柱色谱分离-冷冻干燥的联用技术制备包封羧基荧光素的脂质体;利用PLA2能水解磷脂破坏脂质体造成羧基荧光素渗漏的原理,将药物、PLA2和荧光脂质体共同温孵,检测从脂质体渗漏的羧基荧光素的荧光强度,该强度反映药物对PLA2的抑制强度。结果芍药甘草汤、甘草、甘草酸和对照药氯丙嗪对PLA2活性均具有较强的抑制作用,白芍抑制作用较弱,而芍药苷几乎无抑制作用;芍药甘草汤复方对PLA2的抑制作用强于单味甘草和白芍。结论芍药甘草汤对PLA2具有较强的抑制活性,白芍与甘草具有协同作用。

不同的人癌裸鼠移植瘤模型中磷脂酶A2的表达

目的观察磷脂酶A2(PLA2)在不同的人癌裸小鼠移植瘤模型中的蛋白表达及特征。方法分别采用肺癌、鼻咽癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、食管癌和卵巢癌肿瘤细胞株构建裸小鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至瘤体积达1 cm3后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤组织、正常组织及血清中4种主要类型PLA2(cPLA2、sPLA2、iPLA2和lp-PLA2)的蛋白表达,并以正常裸小鼠血清作对照。结果在呼吸系统、消化系统和生殖系统的8种人肿瘤细胞裸小鼠移植瘤模型中,肿瘤组织cPLA2、sPLA2、lp-PLA2的蛋白表达均显著或极显著高于正常组织(P<0.05,P<0.01),肿瘤组织iPLA2的蛋白表达均高于正常组织,除人结直肠癌细胞HT-29移植瘤模型外,均呈现极显著性差异(P<0.01)。8种移植瘤模型中,荷瘤小鼠血清中4种类型PLA2的蛋白含量均极显著高于正常小鼠(P<0.01)。结论 4种类型PLA2在呼吸系统、消化系统和生殖系统不同的裸小鼠移植瘤模型的肿瘤组织和血清中均呈现高表达,无肿瘤类型特异性,表明磷脂酶A2可能参与肿瘤的发生、发展。

铁包金按摩膏对腰椎间盘突出症大鼠腰背脊神经根中PLA2影响的实验研究

目的:观察铁包金按摩膏对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠突出的椎间盘节段脊背神经根中磷脂酶A2(PLA2)的调节作用。方法:健康SD大鼠48只,采用随机数法将大鼠分为空白组、铁包金组、狗皮膏组和模型组,每组12只。采用注射法建立非压迫型腰椎间盘髓核突出大鼠模型,造模成功后分别对各组进行相应处理:空白组模拟手术后正常饲养;铁包金组予铁包金按摩膏局部治疗;狗皮膏组采用狗皮膏外贴治疗;模型组给予凡士林局部对比治疗;分别测量治疗1周、2周、3周后各组LDH大鼠相应椎间盘节段脊背神经根中PLA2的活性并对数据进行统计学分析。结果:给药1周、2周、3周,各组PLA2活性均高于空白组(P<0.05)。给药2周,铁包金组、狗皮膏组均低于模型组(P<0.05);给药3周铁包金组、狗皮膏组PLA2均低于给药1周(P<0.05)。结论:铁包金按摩膏具有降低非压迫性髓核突出大鼠模型相应节段脊背神经根中PLA2活性的作用。

经皮激光椎间盘减压术对兔椎间盘内磷脂酶A2及神经传导速度的影响

目的探讨经皮激光椎间盘减压术(PLDD)对椎间盘突出症的治疗机制。方法15只大白兔随机分为3组:假手术组、治疗组、非治疗组,治疗组在手术造模的同时进行PLDD治疗。2周后对各实验组动物分别测定L6神经根神经传导速度及椎间盘中的磷脂酶A2(PLA2)活性。结果非治疗组神经传导速度显著低于假手术组(P<0.001);治疗组神经传导速度显著快于非治疗组(P<0.001)。治疗组PLA2活性较非手术组显著降低(P<0.001);非治疗组PLA2活性较假手术组显著性升高(P<0.001)。结论椎间盘纤维环损伤后PLA2水平升高,神经传导速度降低。PLDD可以降低受损后椎间盘内PLA2活性,从而达到治疗的作用。

Yes相关蛋白与老年患者抗PLA2R抗体相关膜性肾病病理分期及肾小球滤过率的相关性

目的评估老年抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体相关膜性肾病(MN)患者肾脏组织中Yes相关蛋白(YAP)表达及其与抗PLA2R抗体相关MN临床指标的相关性。方法收集60周岁以上PLA2R抗体阳性MN患者50例及肾肿瘤患者肾周正常组织50例,进行免疫组化实验,测定肾组织中YAP和PLA2R的表达水平,评估YAP表达和PLA2R表达的相关性。收集以上MN患者的临床信息,通过单因素和多因素Logistic分析评估老年PLA2R相关MN患者YAP高表达的风险因素。结果相比于正常肾组织,MN患者肾组织中YAP和PLA2R具有较高的表达水平(P<0.05),且MN分期越高,YAP和PLA2R表达水平越高。在抗PLA2R抗体相关的MN患者中,YAP表达水平和PLA2R水平呈显著正相关(P<0.05)。相比于YAP低表达组,YAP高表达组血清白蛋白(SAlb)水平和肾小球滤过率(GFR)显著降低(P<0.05),而尿蛋白(BUN)、肌酐(SCr)和胱抑素(Cys)-C水平显著增加(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示SCr和GFR与MN患者YAP高表达具有相关性(P<0.05)。结论YAP高表达与老年抗PLA2R抗体相关MN发展有关,YAP可能是PLA2R相关MN诊断和治疗的新颖分子靶标。

ZDF与SD大鼠动脉粥样硬化形成及其磷脂酶A2表达的比较研究

目的观察ZDF和SD大鼠动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）形成和AS组织中磷脂酶A2（cPLA2、sPLA2、LP．PLA2）的表达情况。方法取ZDF（faffa）大鼠和SD大鼠各6只，用高脂饲喂加小剂量多次腹腔注射7×10^5U／kg维生素D3注射液，建立ZDF大鼠AS模型组和SD大鼠AS模型；另取ZDF（fa／＋）大鼠和SD大鼠各6只，分别作为ZDF大鼠对照组和SD大鼠对照组，饲喂普通饲料。检测造模前后GLU、TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量和造模后血清Ca^2＋含量，并取AS大鼠腹主动脉进行HE染色和cPLA2、sPLA2、LP．PLA2的mRNA表达检测。结果ZDF大鼠AS模型组和SD大鼠AS模型组的空腹血糖、血脂水平和血清Ca2＋含量均显著升高（P〈0．01），腹主动脉出现典型的AS并伴明显的钙化，ZDF大鼠模型组血糖、血脂明显高于SD大鼠模型组，其AS病变也相对严重；ZDF大鼠AS模型组cPLA2和sPLA2的表达显著升高（P〈0．01），LP．PLA2的表达显著降低（P〈0．01）：而sD大鼠As模型组cPLA2、sPLA2、LP-PLA2的表达均显著升高（P〈0．01）。结论ZDF大鼠和SD大鼠进行高脂饲喂加小剂量多次注射维生素D3均能建立AS模型，ZDF（fa／fa）大鼠的AS病变相对严重，与其高血糖和高血脂状态有关；ZDF大鼠和SD大鼠中的PLA2的表达存在差异，这可能与SD大鼠AS形成的分子病理机制有关。

唐古特白刺对力竭运动大鼠心肌线粒体磷脂酶A_2影响机制的研究

观察了大鼠力竭运动后心肌线粒体磷脂酶A2活性的变化,发现运动后心肌线粒体磷脂酶A2活性显著升高,而对大鼠灌胃唐古特白刺后发现力竭运动后心肌线粒体磷脂酶A2活性显著下降.结果提示:唐古特白刺中的主要功效成分具有稳定自由基,提高机体免疫力,抗衰老等保健功效.

冠心病患者检测髓过氧化物酶和脂蛋白相关磷脂酶A2的临床意义

目的探讨冠心病患者检测髓过氧化物酶（MPO）和脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp—PLA2）对于诊断患者冠心病病变程度和冠脉狭窄支数的意义。方法对健康对照组50例、急性心肌梗死（AMI）组43例、稳定型心绞痛（SAP）组37例和不稳定型心绞痛（UAP）组40例的生化指标（主要是MP0和Lp-PLA2水平）测定并进行统计学分析。同一病变人群依据冠脉造影分为单支冠脉狭窄（Ⅰ组）45例、双支冠脉狭窄（Ⅱ组）40例、三支冠脉狭窄（Ⅲ组）35例，并进行MPO和LpPLA2水平分析。结果AMI组、UAP组和SAP组的TG水平明显比对照组高（t=4．912～6．984，P均〈0．05），HDL明显比对照组低（t=3．987～4．512，P均〈0．05），三组相比差异有统计学意义（t=4．032～4．687，P均〈0．05）。MPO和LpPLA2在冠心病各亚型患者中的水平明显比对照组高，且AMI组分别和SAP，UAP组相比，SAP和UAP组相比，差异均有统计学意义（t=9．654～11．065，t=10．954～12．005，P均〈0．011）。Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组间MPO水平比较差异无统计学意义（P〉0．05），而Lp—PLA2指标三组间水平差别有统计学意义（P〈0．01）。MPO和Lp—PLA2指标之间呈正相关关系（r=0．814，P〈0．01）。结论冠心病不同病变患者检测MPO和LpPLA2两个指标可反映患者病变程度和冠脉狭窄支数情况．

血浆置换联合CD20单克隆抗体治疗高PLA2R抗体滴度的特发性膜性肾病二例报告

特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)是原发性肾病综合征的主要病因,患病人数在我国呈逐年上升趋势[1]。根据2012年改善全球肾脏病预后组织(Kidney Disease:Improving Global Outcomes,KDIGO)[2]治疗指南,建议表现为肾病综合征的IMN患者有以下情况之一的考虑应用免疫抑制剂治疗:(1)经过至少6个月的降血压和降蛋白尿治疗,24 h尿蛋白持续超过4 g,并且维持在基线水平50%以上,且无下降趋势;(2)存在与肾病综合征相关的严重、致残或威胁生命的临床症状;(3)在确诊后6~12个月内血清肌酐升高≥30%,但估算肾小球滤过率不低于25~30 mL·min-1·(1.73 m 2)-1,且非肾病综合征并发症所致。

TNF-α、磷脂酶A2水平与重型颅脑损伤后心肌功能损伤的相关性研究

目的探讨和分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与磷脂酶A2(PLA2)与重型颅脑损伤后心肌功能损伤情况的相关性,以提高临床对心肌功能损伤的防治,降低死亡率。方法选取重症医学科2014年2月至2016年1月收治的重症颅脑损伤患者82例为观察组,另选取门诊部体检健康者45例为对照组,观察组入院时抽取静脉血、对照组取体检血样检查TNF-α、PLA2、心肌肌钙蛋白T(cTnT)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。比较观察组和对照组患者的检验结果,并分析观察组患者检验结果的相关性。结果观察组患者cTnT及CK-MB分别为(523.9±42.1)pg/ml、(179.2±31.1)U/L明显高于对照组的(25.6±9.0)pg/ml、(8.2±3.5)U/L,差异有统计学意义(t检验值分别为60.337和29.701,P均<0.01)。观察组患者TNF-α及PLA2分别为(42.3±12.5)pg/ml、(44.8±18.3)pg/ml,明显高于对照组的(1.1±0.4)pg/ml、(7.0±2.9)pg/ml,差异有统计学意义(t检验值分别为32.186和13.624,P均<0.01)。相关性分析结果显示:PLA2与cTnT、CK-MB成正相关(r=0.765,P<0.01;r=0.836,P<0.01);TNF-α与cTnT、CK-MB亦成正相关(r=0.903,P<0.01;r=0.924,P<0.01)。结论 TNF-α、PLA2与重型颅脑损伤后心肌功能损害的发生和发展相关,若能抑制两者在血液中的高浓度表达,则有可能减轻重型颅脑损伤后心肌功能损伤的程度。

IgG亚型、PLA2R及血清抗体检测在特发性膜性肾病诊断中的意义

目的研究特发性膜性肾病(IMN)患者肾组织IgG亚型、PLA2R及血清抗体表达,并评估PLA2R及抗体在IMN诊断中的价值。方法选取经肾活检证实的65例IMN患者,同时选取乙型肝炎相关膜性肾病(HBV-MN)、肿瘤相关膜性肾病等继发性膜性肾病28例及其他肾病25例(IgAN、微小病变肾病等)作为对照。本实验我们采用免疫组化荧光染色观察肾组织PLA2R及IgG亚型的表达,ELISA法检测血清抗PLA2R抗体,并将其与患者肾功能做相关分析。结果IgG4在IMN患者肾组织表达最多;肾组织PLA2R在IMN组、继发性膜性肾病组及其他肾病组阳性比例分别为76.92%、10.7%、4.0%,其诊断IMN的敏感度为76.9%,特异性为92.5%;血清抗PLA2R在IMN组、继发性膜性肾病组及其他肾病阳性比例分别为70.7%、7.1%、4.0%,其诊断IMN的敏感度为70.7%,特异性为94.3%;肾组织PLA2R及血清抗PLA2R抗体阳性比例在IMN患者的表达显著高于其他肾病,差异有统计学意义(P<0.05);且血清抗PLA2R抗体与血清ALB成负相关(r=-0.500)、与24 h尿蛋白成正相关(r=0.617)。结论肾组织IgG4、PLA2R及其血清抗PLA2R抗体可能作为特发性膜性肾病患者诊断标志物,用于IMN的诊断及病情的评估。

真武汤合肾着汤加减治疗特发性膜性肾病合并急性肾损伤临床观察

目的观察真武汤合肾着汤加减对特发性膜性肾病(IMN)合并急性肾损伤(AKI)的临床疗效并探讨其作用机制。方法106例患者随机分为对照组与观察组各53例,对照组采用西医综合治疗,观察组在对照组基础上加用真武汤合肾着汤加减内服,连续治疗4周。比较两组治疗前后血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肌酐清除率(Ccr)、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、血清白蛋白(ALB)、三酰甘油(TAG)、总胆固醇(TC)等肾功能和血脂指标。比较治疗前后血液同型半胱氨酸(Hcy)水平、尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖糖苷酶(NAG)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)和肾损伤分子1(Kim-1)水平。比较血清抗磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体水平、免疫功能指标外周血T细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)水平、炎症因子白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-35(IL-35)水平以及脾肾阳虚证评分。比较治疗后临床总有效率。结果两组治疗前各项指标比较差别均不大(均P>0.05)。两组治疗后,24 h-UTP、Scr、BUN、TAG、TC、Hcy、NAG、β2-MG、Kim-1和抗PLA2R抗体水平下降(均P<0.05),Ccr和ALB水平升高(均P<0.05),且均以观察组为优(均P<0.05)。两组治疗后脾肾阳虚证各主要症状评分及总积分降低(均P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组治疗后IL-35、CD4+、CD4+/CD8+均高于对照组(均P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-17、CD8+水平则均低于对照组(均P<0.05)。观察组总有效率为92.45%,高于对照组的75.47%(P<0.05)。结论真武汤合肾着汤加减治疗IMN合并AKI临床疗效显著,其可调节免疫炎症因子,抑制抗PLA2R抗体,减轻肾损伤和蛋白尿,保护肾功能,改善临床症状。

再灌注致大鼠心肌生物膜损伤及益心康胶囊的保护作用

目的 :观察再灌注对心肌生物膜的损伤 ,评价中药复方—益心康胶囊 (H30 3)对生物膜保护作用。方法 :利用离体大鼠全心停灌 /再灌 (I/R)模型 ,预先灌注H30 3(0 .2 ,0 .1mg/mL ,灌注 10min) ,观察对MDA、磷脂酶A2 、磷脂、游离脂肪酸、膜脂流动性、ATPase及线粒体呼吸功能的影响。结果 :I/R可导致离体大鼠心脏生物膜产生严重损伤。H30 3可通过减轻大鼠心肌组织脂质过氧化程度、抑制PLA2 活性、升高线粒体磷脂含量、降低FFA水平、改善膜脂流动性、保护线粒体Ca2 + ATPase及肌纤维膜的Na+ ,K+ ATPase活性及改善线粒体呼吸功能等作用而发挥抗损作用。结论 :H30

大剂量山茛菪碱治疗急性胰腺炎的实验研究及临床应用

药物与分组：实验动物为健康SD大鼠100只，雌雄各半，体重250～300g／只，常规饲养。随机分为5组，每组20只：①正常对照组（NC）；②SAP组（SAP）；③SAP＋常规药物治疗对照组（SAP＋NT）；④SAP＋山莨菪碱治疗组（SAP＋654-2）；⑤SAP常规加大剂量山莨菪碱治疗组（SAP＋NT＋654-2）。另取SD大鼠60只，随机分组为3组，每组20只：①SAP组；②SAP＋NT组；③SAP＋NT＋654-2组。观察生存情况。