牛PLAG1基因多态性与大别山牛生长性状的相关性分析

以安徽大别山牛为试验群体,采用PCR和直接测序技术检测PLAG1基因的多态性,并探讨其多态性对大别山牛生长性状的影响,为大别山牛体尺性状的标记辅助选择和育种提供理论依据。利用在线软件分析牛PLAG1基因的结构特性,计算等位基因频率、基因型频率和遗传多样性指数,分析HardyWeinberg平衡状态,利用SPSS软件探索PLAG1基因多态性与大别山牛群体体尺性状的相关性。结果显示:牛PLAG1基因编码蛋白质前体结构包含有6个ZnF_C2H2区域和4个low complexity区域,PLAG1基因第1内含子区检测到1个19-bp Indel位点,3’UTR区检测到1个变异位点g.48316C>T,二者均属于中度多态(0.25<PIC<0.50),其中19-bp Indel位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),且DD基因型个体和WD基因型个体的腰角宽和坐骨端宽均显著优于WW基因型个体(P<0.05);g.48316C>T位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),且CT基因型个体的胸围显著优于TT基因型个体和CC基因型个体(P<0.05)。该研究结果初步表明牛PLAG1基因的多态性与其体尺性状显著相关,可以作为大别山牛体尺性状标记辅助选择候选基因之一。

湖羊PLAG1基因5′调控区多态性及其与早期体重的关联分析

旨在克隆湖羊PLAG1基因5′调控区序列,明确PLAG1基因5′调控区多态性与湖羊早期体重的关系,寻找用于湖羊生长性状辅助选择的分子标记。本研究利用5′RACE技术鉴定PLAG1基因转录起始位点,以456只断奶湖羊为对象,利用测序法筛选PLAG15′调控区SNP位点,使用SPSS 18.0软件分析不同基因型对湖羊初生体重和断奶体重的影响。结果表明,PLAG1基因转录起始位点均位于g.30535位点,测序发现,PLAG1基因5′调控序列存在15个SNPs位点,在湖羊群体中均有3种基因型,均处于Hardy-Weinberg平衡状态。关联分析发现,g.28888A>T位点AA型、g.28901G>T位点GG型、g.30802C>T位点CC型、g.30825A>G位点AA型的初生体重均显著大于相应的杂合基因型(P<0.05),g.30737T>C位点CC型断奶体重显著小于TC型(P<0.05)。连锁分析发现,g.28888A>T、g.28901G>T、g.28913T>A、g.29717G>C、g.29724A>C、g.29725G>A、g.29768T>C、g.29771A>G、g.30141T>A、g.30144A>G、g.30691C>A、g.30694A>T、g.30737T>C、g.30802C>T、g.30825A>G,15个位点连锁且有18种单倍型。将样本量较多的5种单倍型与湖羊早期体重进行关联分析发现,AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA单倍型初生体重显著大于ATGTTAGCACGATCAGTAAGCAATTCCTAG单倍型(P<0.05),断奶体重显著大于AAGGAAGGAAGGTTAATTAACCAACCCCAA单倍型(P<0.05)。上述结果表明,湖羊群体中PLAG1基因5′调控区存在15个连锁的SNPs位点,其中g.28888A>T、g.28901G>T、g.30802C>T、g.30825A>G位点与初生体重显著相关(P<0.05),g.30737T>C位点与断奶体重显著相关(P<0.05),AAGGTAGGAAGGTTAATTAACCAATCCCAA单倍型与初生体重和断奶体重显著相关(P<0.05),说明PLAG1基因可作为湖羊生长性状选择的候选遗传标记。

波尔山羊PLAG1基因克隆、多态性鉴定及其与出生体重、体尺性状的关联分析

【目的】试验旨在研究多形性腺瘤基因1(plemorphic adenoma gene 1,PLAG1)基因序列特征、多态性以及对山羊出生体重、体尺的影响。【方法】以波尔山羊为研究对象,克隆PLAG1基因序列并测序,采用实时荧光定量PCR鉴定其在不同年龄和体重波尔山羊组织中的表达模式,采用Western blotting方法检测PLAG1在不同体重羔羊腿肌中的表达水平,进一步筛选PLAG1基因CDS和3′-UTR区SNP,并分析各位点不同基因型与波尔山羊出生体重、体尺的相关性。【结果】波尔山羊PLAG1基因CDS全长1 500 bp,编码499个氨基酸,PLAG1蛋白相对保守。组织表达谱显示,PLAG1基因在出生体重较大的羔羊心脏、小肠和腿肌中表达水平显著或极显著高于出生体重较小的羔羊,在胎羊各组织中mRNA表达水平均显著或极显著高于成年母羊(P<0.05;P<0.01);PLAG1蛋白在出生体重较大的羔羊腿肌中表达量极显著高于出生体重较小的羔羊(P<0.01)。在波尔山羊PLAG1基因3′-UTR区共筛选到6个SNPs位点,分别为:2664 A>G、2712 A>G、2721 T>C、2879 T>A、2990 A>T和3270 A>G。关联分析发现,2664 A>G位点AG基因型个体出生管围显著大于GG基因型(P<0.05);2721 T>C位点TT基因型个体出生体长显著大于TC基因型(P<0.05);2879 T>A位点TA基因型个体出生管围显著大于AA基因型(P<0.05);2990 A>T位点AA基因型个体出生体重显著高于AT基因型(P<0.05);3270 A>G位点GG基因型个体出生体长显著大于AA基因型,AG基因型个体出生胸围显著大于AA基因型(P<0.05)。【结论】PLAG1基因在波尔山羊胎羊各组织中表达水平均高于成年母羊,发育早期的表达水平与出生羔羊体重相关。PLAG1基因可作为分子标记用于波尔山羊早期生长选育。

p53基因敲除PLAG1转基因小鼠模型构建的研究

目的:建立p53基因敲除plag1转基因小鼠模型。方法:依托plag1转基因多形性腺瘤小鼠。取两只plag1+母鼠与一只p53+/-雄鼠杂交,分别取F1代中基因型为plag1+p53+/-的雌雄小鼠交配,得到基因型分别为plag1+p53-/-,plag1+p53+/-及plag1+p53+/+的三种多形性腺瘤小鼠,分别测量比较三种基因型多形性腺瘤的生长速度。结果:plag1+p53-/-基因型小鼠生长迟缓,寿命短,未能长出肿瘤便已死去。plag1+p53+/-肿瘤生长速度较同龄plag1+p53+/+小鼠相比较快,且有明显的差异(P<0.05)。结论:构建了p53基因敲除plag1转基因小鼠模型,且结果显示p53基因与PLAG1基因的相互作用和多形性腺瘤的生长速度增快有关。

Silver-Russell综合征致病基因的研究进展

Silver-Russell综合征(SRS)是一种导致产前和产后生长迟缓的印迹障碍疾病,通常是由胎儿生长因子IGF2的表观遗传下调引起。SRS的主要遗传原因是11p15染色体甲基化缺失(11p15 LOM)和7号染色体母体单亲二体[upd(7)mat]。近年来,HMGA2、PLAG1、IGF2及CDKN1C被认为是SRS的新责任基因。随着研究的深入进展,新的致病变体被发现,HMGA2基因新突变位点(c.111+1G>T、c.239C>T、c.223C>T、c.193C>T和c.189del)及PLAG1基因新突变位点(c.439del、c.1363del、c.589C>T和c.551delA)通过影响DNA结合导致SRS,IGF2基因新突变位点(c.195delC、c.157+3A>C、c.157+5G>A、c.110_117delinsAGGTAA、c.101G>A、c.78C>G和c.158_159dup等)被认定为与SRS相关。CDKN1C基因突变位点(c.836G>T、c.835C>A和c.947G>A)通过增加蛋白的功能性抑制细胞分裂周期进程导致SRS。