Oct_4、PLAP基因在睾丸精原细胞瘤早期诊断中的意义

目的通过对Oct4、PLAP基因的研究,为早期诊断精原细胞瘤和精原细胞瘤提供分子生物学依据。方法应用免疫组化EnVision两步法,检测38例精原细胞瘤中Oct4、PLAP基因的表达。结果 Oct4在精原细胞瘤中的阳性表达率为100%,PLAP为89.47%;二者在正常睾丸组织中均不表达;显微镜下观察,Oct4仅在肿瘤细胞核及发育不良的细胞核上表达,而PLAP分布不均匀,在有些肿瘤细胞深染,有些肿瘤细胞上则无染色。结论与PLAP相比,Oct4在精原细胞瘤中均呈阳性表达,是更加灵敏的诊断精原细胞瘤的标记基因。

miR101通过PLAP-1调节牙周膜细胞成骨分化的研究

目的:研究miR101的表达变化靶向调节PLAP-1基因对牙周膜细胞成骨分化中细胞骨化功能的影响。方法:首先获得miR101过表达和表达抑制的慢病毒,以此转染人牙周膜细胞并对其进行成骨分化诱导,分别于矿化0、7、14、21 d采用定量RT-PCR检测各组靶基因PLAP-1mRNA的表达量;酶活性检测法检测各组细胞ALP活性变化;茜素红染色法检测各组细胞矿化结节形成情况。结果:miR101过表达后可抑制PLAP-1mRNA的表达,并使ALP活性升高、矿化结节形成量增多;而抑制miR101的表达后则可上调PLAP-1mRNA的表达水平,并使ALP的活性降低、矿化结节形成量减少。结论:在人牙周膜细胞骨向分化中miR101可能通过抑制PLAP-1而促进其成骨分化能力。

miR101慢病毒表达系统的构建及其在人牙周膜细胞骨向分化中靶向调节PLAP-1基因表达的研究

目的:构建miR101的慢病毒表达系统并验证其对牙周膜细胞PLAP-1基因的表达调控。方法:用矿化培养液培养牙周膜细胞,使用p LVX-shRNA1慢病毒表达系统构建获得超表达miR101和抑制表达miR101的慢病毒;用q PCR验证miR101的表达水平,使用Western检测PLAP-1的表达水平。结果:成功获得了miR101的慢病毒表达系统,用于转染矿化诱导液培养的人牙周膜细胞。过表达miR101可抑制PLAP-1的表达,抑制表达miR101可增强PLAP-1的表达。结论:miR101可以调节PLAP-1基因并参与人牙周膜细胞骨向分化中PLAP-1基因表达的调节,miR101可能在人牙周膜细胞骨向分化中发挥调节作用。

卵巢无性细胞瘤PLAP、NSE和PRL检测的临床意义

目的检测胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、催乳素(PRL)基因蛋白在卵巢无性细胞瘤中的表达及其临床意义。方法收集河南省肿瘤医院和郑州市中心医院1985年1月-2005年1月期间38例卵巢无性细胞瘤患者的临床和病理资料,临床一期20例(52.63%),二期7例(18.42%),三期7例(18.42%),四期4例(10.53%)。对此肿瘤组织分别做PLAP、NSE、PRL免疫组化染色。结果PLAP、NSE、PRL在卵巢无性细胞瘤中的阳性表达率分别为97.37%、63.16%、7.89%。NSE表达与临床分期及5年生存率有显著相关性(P<0.05)。结论NSE表达与晚期卵巢肿瘤密切相关;PLAP、NSE可看作是无性细胞瘤重要的组织标志物,肿瘤组织是血清PLAP、NSE的主要来源。

LIN28、CD30和PLAP在卵巢生殖细胞肿瘤诊断中的应用

目的探讨LIN28、CD30和PLAP在卵巢生殖细胞肿瘤(OGCTs)诊断中的应用价值。方法采用免疫组化MAXVISION法检测LIN28、CD30和PLAP在45例OGCTs中的表达,包括11例无性细胞瘤、16例卵黄囊瘤、4例胚胎性癌和14例未成熟性畸胎瘤。另选取10例正常卵巢组织作为对照。结果LIN28在无性细胞瘤(8/11)、卵黄囊瘤(16/16)、胚胎性癌(3/4)和未成熟性畸胎瘤(10/14)中呈弥漫型阳性。CD30在胚胎性癌(3/4)中阳性,在无性细胞瘤、卵黄囊瘤和未成熟性畸胎瘤中均为阴性。PLAP在无性细胞瘤(10/11)、卵黄囊瘤(9/16)和胚胎性癌(6/6)中阳性表达,在未成熟性畸胎瘤为阴性。结论 LIN28是诊断OGCTs敏感性和特异性均较好的免疫标志物。

关于PLAP-1在牙周组织中的表达以及对成骨细胞分化的影响研究

目的研究PLAP-1在牙周组织中的表达以及对成骨细胞分化的影响。方法取口腔科于2014月3月1日~2017年3月1日收治的62例需拔出健康前磨牙的患者为研究对象。62例患者共拔除70颗前磨牙。制备牙周组织标本,并进行培养。采用免疫组化ABC、DAB显色法对第三代细胞行波形丝蛋白抗体染色、PLAP-1染色。以Trizol法提取RNA,并进行逆转录、矿化结节形成实验。观察牙周组织中PLAP-1的表达及对成骨细胞分化的影响。结果 62例患者标本的免疫细胞化学染色结果显示,所有人牙周膜细胞(PDLC)中均表达PLAP-1。PLAP-1染色呈棕黄色颗粒状,沿细胞核周围分布。患者细胞膜、细胞核未见PLAP-1表达。标本350bp处出现一条目的条带。结论人牙周组织中PLAP-1特异性表达,PLAP-1超表达可对成骨细胞分化产生较强的抑制作用。

血清外泌体中NY-ESO-1,Alix,PLAP联合对非小细胞肺癌的诊断价值

探讨血清外泌体中纽约食管鳞状细胞癌抗原-1(NY-ESO-1)、Alix、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)联合对非小细胞肺癌的诊断价值。将早期非小细胞肺癌患者设为肺癌组、肺部良性疾病患者设为良性组、体检健康者设为对照组。结果显示,血清外泌体中NY-ESO-1,Alix,PLAP鉴别早期非小细胞肺癌患者与肺部良性疾病患者的灵敏度分别为98%、95%和90%,特异度分别为78%,80%,90%。鉴别早期非小细胞肺癌患者与健康体检者的灵敏度分别为95%,94%,95%,特异度分别为95%,95%,92%。联合鉴别早期非小细胞肺癌的诊断的的灵敏度为95.00%,特异度为91.00%,准确度为92.33%。结果说明,血清外泌体中NY-ESO-1,Alix,PLAP的表达量检测可作为诊断早期非小细胞肺癌的潜在标志。

中枢神经系统生殖细胞肿瘤中c-kit蛋白表达的临床病理学意义

目的探讨c-kit(CD117)在原发性中枢神经系统(CNS)生殖细胞肿瘤(GCTs)中的表达及其临床病理学意义。方法应用免疫组化EnVision法检测21例原发性CNS GCTs c-kit和PLAP的表达。结果生殖细胞瘤100%表达c-kit,87.5%表达PLAP,c-kit和PLAP在畸胎瘤中均不表达。c-kit和PLAP在松果体母细胞瘤、垂体腺瘤、中枢神经细胞瘤、淋巴瘤、低级别星形细胞瘤、朗格汉斯组织细胞增生症和髓母细胞瘤中不表达。结论c-kit和PLAP是原始生殖细胞较特异性标记之一,c-kit和PLAP高表达支持CNS GCTs起源于原始生殖细胞。c-kit在生殖细胞瘤中表达较PLAP更加敏感,是优于PLAP的诊断标记,可用于生殖细胞肿瘤诊断和鉴别诊断。同时也为药物靶向治疗生殖细胞瘤提供理论依据。

基于聚磷腈可降解电活性材料的合成及其降解行为研究

以六氯环三磷腈为原料,加热开环聚合制备了聚二氯磷腈,再分别以苯胺五聚体为功能单元、甘氨酸乙酯和赖氨酸为调节基团,通过两步亲核取代反应,合成了两种可用于神经支架工程材料的可降解电活性高分子聚[(甘氨酸乙酯/苯胺五聚体)磷腈](PGAP)和聚[(赖氨酸/苯胺五聚体)磷腈](PLAP)。通过红外、热重、核磁、循环伏安、紫外等对聚合物进行了全面的表征。在此基础上,重点研究了氨基酸类侧链取代基对聚磷腈降解行为的影响。研究结果表明,侧链氨基酸类取代基的类型和比例对此高分子材料的降解行为有着关键性影响。其降解速率随着取代基比例的增加而加快,此外,随着氨基酸侧链基团极性的增加,降解速率增加。

真两性畸形合并精原细胞瘤1例临床病理分析及文献复习

目的:探讨真两性畸形合并精原细胞瘤1例的临床病理学特征及诊断。方法:报告1例真两性畸形,合并精原细胞瘤的组织病理学及免疫组化检测结果,同时结合文献复习,进行回顾分析。结果:患者社会性别男性,42岁,因双侧腰背部疼痛不适入院,全腹CT示中下腹巨大肿块。术后病理巨检见子宫样组织一块,体积7 cm×2 cm×6 cm,可见子宫颈及子宫内膜样结构,双侧可见输卵管及卵巢样组织;其左侧可见睾丸一枚,体积4.0 cm×2.5 cm×1.5cm,右侧见一巨大肿物22 cm×9 cm×6 cm,包膜完整,切面灰白灰红相间,并见少量睾丸组织;镜下见肿瘤组织被纤维组织分割包绕呈巢状、片状,肿瘤细胞体积较大,胞质丰富透明,核大深染,染色质粗大、颗粒状,可见核分裂像,间质可见少量淋巴细胞浸润。染色体核型为46,XX。免疫组化结果显示PLAP、CD117均为阳性,而AFP、Vimentin、EMA、S100、CK-LMW、Desmin、CD34及CD30均为阴性,Ki-67为20%阳性。结论:真两性畸形合并精原细胞瘤较为罕见,联合组织病理学分析及免疫表型检测对其诊断和鉴别诊断具有重要价值。

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和高压液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果ＰＬＡＰ的纯化倍数为１６１倍，比活力为１３８ｍｍｏｌ·ｓ－１／ｇ；纯化的ＰＬＡＰ经ＰＡＧＥ鉴定为单一区带，ＨＰＬＣ分析为单一对称峰；测得酶的亚基分子量为６４．６９ｋｕ．④结论纯化的ＰＬＡＰ已达电泳纯和层析纯。

汞对人类胎盘碱性磷酸酶活力与荧光光谱的影响

目的研究汞对人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）活力及其荧光光谱的影响，以探讨汞对ＰＬＡＰ抑制的分子机制。②方法应用分光光度法测定不同浓度ＨｇＣｌ２存在下的酶活力，用荧光法检测其荧光光谱；用双倒数作图法确定ＨｇＣｌ２对该酶的抑制类型。③结果当ＨｇＣｌ２浓度为０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ时，酶活力及其荧光强度迅速下降，最大发射峰位由３４７ｎｍ蓝移至３４０ｎｍ；ＨｇＣｌ２浓度为０．２５～１．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，酶活力、荧光强度及峰位均无显著变化；当ＨｇＣｌ２浓度＞１．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，随其浓度增加，酶活力和荧光强度又快速下降，但峰位不变；ＨｇＣｌ２浓度高达１０．００ｍｍｏｌ／Ｌ时，酶仍有部分活力。ＨｇＣｌ２是ＰＬＡＰ混合性抑制剂，其抑制常数为３．６０ｍｍｏｌ／Ｌ．④结论ＨｇＣｌ２抑制了ＰＬＡＰ的活力，并使其构象发生了改变。

人类胎盘碱性磷酸酶部分性质的研究

目的探讨纯化的人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）的部分性质，为其结构与功能的研究积累资料。②方法应用分光光度法观察了温度、酸碱度及抑制剂对酶活力的影响；同时对其紫外吸收光谱进行了测定。③结果在该实验条件下，酶的最适温度为６５℃，对热稳定，－２５℃冷冻后酶的活力明显下降；最适ｐＨ为１１．０，在ｐＨ７．０～１１．５之间稳定；以对硝基酚磷酸二钠为底物，其Ｋｍ值为０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ；Ｌ－苯丙氨酸是ＰＬＡＰ的反竞争性抑制剂，其抑制常数为２．３５ｍｍｏｌ／Ｌ，而ＮａＨ２ＰＯ４是ＰＬＡＰ的竞争性抑制剂，其抑制常数为０．９９ｍｍｏｌ／Ｌ；酶蛋白的最大紫外吸收波长为２８０ｎｍ．④结论了解纯化ＰＬＡＰ的上述性质，有助于其结构与功能的研究。

碱性磷酸酯酶基因在鸡胚和人乳腺癌细胞中的表达

通过PCR方法从pSEAP2-control质粒获得人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)基因,并克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)卵清蛋白基因调控区下游。pSEAP2-control和pAB-Sig-AP-SV40质粒转染鸡胚细胞和乳腺癌细胞(MCF-7),转染48h后以对硝基苯磷酸钠(pNPP)为底物检测PLAP的活性,结果pSEAP2-control在鸡胚细胞和MCF-7细胞中表达PLAP,pAB-Sig-AP-SV40在鸡胚细胞中不表达,而在MCF-7细胞中表达。说明鸡胚细胞可以表达有活性的人源糖蛋白,另外也说明在雌激素受体细胞中,鸡卵清蛋白基因启动子可启动外源基因表达。

胃肝样腺癌的免疫病理特点分析—附1例病例报告

目的:报道1例伴有神经内分泌特征的胃肝样腺癌,分析其病理组织形态学特点及临床表现。方法:组织形态学结合免疫组织化学研究。结果:本例胃肝样腺癌患者血清AFP水平显著升高;组织学检查显示该肿瘤由类似肝细胞肝癌和腺癌两种病变组成;免疫组织化学染色显示,病变组织表达AFP、PLAP和HCG。结论:伴PLAP和HCG表达的胃肝样腺癌属于未分化癌,未分化癌其组织学特点与胃肝样腺癌相似;胃肝样腺癌伴有PLAP和HCG表达的机制及其生物学行为有待深入研究。

随意超薄皮瓣的超薄层次及长宽比例的实验研究

选用１２只体重２５～３０ｋｇ的家猪为实验动物，对随意超薄皮瓣的超薄层次、长宽比例及断蒂时间与传统随意型皮瓣移植后作对比研究。结果表明，传统随意皮瓣成活的长宽比为２：１；皮瓣超薄至在真皮下血管网的下方保留２～３ｍｍ脂肪及在真皮下血管网的下方保留１／３浅筋膜，这二种超薄层次的皮瓣成活的长宽比例均为２．５：１，并可提前到术后６天断蒂。

人正常早孕滋养细胞体外培养株的系统鉴定

目的建立人早孕滋养细胞株(HPT-8)的系统鉴定方法。方法通过光镜、扫描电镜、透射电镜、免疫组化和免疫荧光激光共聚焦的方法对体外培养出的HPT-8进行系统鉴定评价。结果电镜下可见细胞表面微绒毛丰富;胞质丰富;内质网扩张明显,细胞间紧密的桥粒样结构连接;检测细胞胞浆中角蛋白18和波形蛋白均为阳性,细胞胞浆中角蛋白7为阳性,细胞膜上移动相关蛋白为阳性。表皮生长因子受体、滋养细胞趋化因子和胎盘碱性磷酸酶结果均阳性,而人绒毛促性腺激素和胎盘催乳素结果均为阴性。结论通过多种方法对HPT-8进行形态、超微结构、蛋白骨架和功能指标的综合评价,可以较全面的确定体外传至72代的细胞株HPT-8为具有部分内分泌功能的滋养细胞株,为进一步开展实验研究建立细胞模型。

睾丸生殖细胞肿瘤瘤旁原位癌病变组织病理及免疫组化研究

目的观察睾丸原位癌病理形态学改变并探讨胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的表达及意义。方法对14例睾丸生殖细胞肿瘤瘤旁原位癌病变组织进行HE染色观察,采用免疫组化方法检测其PLAP表达。结果原位癌病变在曲细精管呈弥漫分布,受累曲细精管变细,基底膜增厚,管内生精细胞消失,仅见癌细胞和Sertoli细胞。癌细胞体积大,核硕大,染色质细,常见居中核仁,胞质透亮,瘤细胞靠近基底膜排列,管内Sertoli细胞正常。免疫组化结果显示,14例睾丸原位癌均表达PLAP,其中12例呈强(+),正常生精细胞及阴性对照无PLAP表达。结论睾丸原位癌呈特征性的病理形态学改变,癌细胞高表达PLAP,表明PLAP是一种特异性强、灵敏度高的肿瘤标记物,它在睾丸原位癌早期诊断中具有实用价值。

挤按法联合复方炉甘石眼膏治疗老年睑板腺功能异常干眼症疗效观察

目的:观察挤按法联合复方炉甘石眼膏治疗老年睑板腺功能异常干眼症临床疗效。方法:对57例(107眼)睑板腺功能异常干眼症患者采用睑板腺挤按,睡前患眼涂复方炉甘石眼膏及温水清洗治疗。随访0.5 a以上。结果:显效:35例(69眼),好转17例(28眼),无效5例(10眼);有效率:90.66%。结论:挤按法联合复方炉甘石眼膏是较为理想的治疗老年睑板功能异常干眼症方法。

人胎盘碱性磷酸酯酶基因在鸡蛋蛋清中的表达

利用PCR方法从pSEAP2-control质粒中扩增获得人胎盘碱性磷酸酯酶基因plap的cDNA,将其克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)的卵清蛋白基因调控区下游。通过脂质体精子载体法人工授精母鸡,收集鸡蛋、孵化。雏鸡出壳后,抽提鸡冠基因组DNA,采用PCR方法检测两组孵化后代中的嵌合体鸡,第1组母鸡(95羽)中plap的PCR阳性检出率为75%,第2组母鸡(128羽)的阳性检出性率为81%。经Western blotting检测,仅1只嵌合体母鸡所产鸡蛋蛋清中检测到plap产物的存在。