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Functional Studies of Castor(Ricinus communis L.)PLC Family Genes in Arabidopsis Inflorescence Development 被引量:1
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作者 Yanpeng Wen Rui Luo +5 位作者 Lili Li Xiaotian Liang Xuemei Hu Ruxin Li Zhiyan Wang Fenglan Huang 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2023年第11期3091-3112,共22页
Castor(Ricinus communis L.)is one of the top 10 oil crops in the world,and inflorescence is a trait that directly affects its yield.Phospholipase C(PLCs)is involved in many plant activities and metabolic processes.To ... Castor(Ricinus communis L.)is one of the top 10 oil crops in the world,and inflorescence is a trait that directly affects its yield.Phospholipase C(PLCs)is involved in many plant activities and metabolic processes.To study the functions of PLC family genes in the regulation of the inflorescence development of the female line of Lm-type castor aLmAB2,we determined the expression levels of six PLC family genes of three types of inflorescences of aLmAB2(isofemale line,female line,bisexual line)at different developmental stages.The results showed that the 6 genes of the castor PLC family had relative expression levels at different developmental stages of the three types of inflorescences.The subcellular location of all six protein products was the cell membrane.The six genes were heterologously overexpressed in Arabidopsis thaliana to obtain the T3 generation-resistant Arabidopsis thaliana plants.The results showed that the overexpression of six genes significantly promoted the maturation of Arabidopsis thaliana,the growth of lateral moss,and the development of flowers and pods,but the development of basal leaves and stem leaves of Arabidopsis thaliana was significantly inhibited.According to homology analysis,it is speculated that PLC2,PLC2M,PLC2N,PLC4,PLC4X2,and PLC6 genes have the same regulatory function. 展开更多
关键词 CASTOR plc family genes the female line of Lm-type castor inflorescence development
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茄子PLC基因家族鉴定及其对低磷胁迫的响应研究
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作者 刘玉青 李卓孟 +4 位作者 徐晨潇 刘希港 李静 季托 杨凤娟 《山东农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2024年第4期548-556,共9页
磷脂酶C(PhospholipaseC,PLC)是磷脂代谢中的主要水解酶之一,在植物生长发育和胁迫响应的信号转导过程中起重要作用。本研究从茄子基因组中鉴定出9个PLC基因,分布在6条染色体上,可分为两个亚家族,分别命名为SmPI-PLC1~SmPI-PLC6和SmNPC1... 磷脂酶C(PhospholipaseC,PLC)是磷脂代谢中的主要水解酶之一,在植物生长发育和胁迫响应的信号转导过程中起重要作用。本研究从茄子基因组中鉴定出9个PLC基因,分布在6条染色体上,可分为两个亚家族,分别命名为SmPI-PLC1~SmPI-PLC6和SmNPC1~SmNPC3,同亚族的PLC成员在基因结构和保守结构域上表现出一定的相似性;SmPLC启动子中存在多个响应逆境、光形态建成和激素信号的顺式作用元件;茄子的4条染色体与拟南芥3条染色体存在共线性,5条染色体与番茄4条染色体存在共线性。茄子组织特性分析表明,SmNPC2在其种子、根和叶中的表达量均高于茎、花和果实;与处理0d相比,随低磷胁迫时间延长,茄子幼苗根中SmNPC2表达量呈先升高后降低趋势,处理后1d,其表达量升高3.22倍,差异显著;添加外源生长素后,其表达量与处理0d时无显著差异。综上,本研究从全基因组水平鉴定和分析了茄子PLC基因家族,为深入研究其功能及解析低磷胁迫下的作用机制提供了参考依据。 展开更多
关键词 茄子 plc基因家族 全基因组鉴定 低磷 外源生长素
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番茄PLC基因家族鉴定及抗番茄褐色皱果病毒(ToBRFV)防御反应分析 被引量:3
3
作者 方远鹏 韦建明 李云洲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期230-240,共11页
番茄褐色皱果病毒(ToBRFV)被我国列为检疫性病毒,严重威胁番茄的安全生产。为了明确番茄磷脂酶C(PLC)的种类,探究番茄PCL在植株抗ToBRFV防御反应过程中的潜在作用。本研究首先基于生物信息学鉴定了10个番茄PLC家族成员,其中特异性磷脂酶... 番茄褐色皱果病毒(ToBRFV)被我国列为检疫性病毒,严重威胁番茄的安全生产。为了明确番茄磷脂酶C(PLC)的种类,探究番茄PCL在植株抗ToBRFV防御反应过程中的潜在作用。本研究首先基于生物信息学鉴定了10个番茄PLC家族成员,其中特异性磷脂酶C(PI-PLC)7个,非特异性磷脂酶C(NPC)3个,7个PI-PLC蛋白均具备3个核心结构域(PLC_X c、PLC_Y c、C2)和1个EF_hand-like结构域,3个NPC蛋白均只具有Phosphoesterase结构域。10个番茄PLC蛋白按照结构相似度可以划分为7个分支,分别为NPC1、NPC2、NPC6、PI-PLC2、PI-PLC3、PI-PLC4、PI-PLC6。另外,10个番茄PLC蛋白的二级结构占比类似,但三级结构存在明显差异。共线性分析结果显示,番茄PLC基因与水稻、拟南芥、雷蒙德式棉PLC基因间分别存在3、12、16对共线性关系。最后,通过转录组测序方法,检测了PLC基因家族在接种ToBRFV后的相对表达水平,结果显示,SlNPC1、SlNPC6、SlPLC4在ToBRFV接种的样本中表达水平较高,其他PLC基因则在ToBRFV接种后表达水平降低。本研究为番茄抗ToBRFV研究和育种奠定了技术与理论基础。 展开更多
关键词 番茄 plc基因家族 生物信息学 抗病毒 ToBRFV
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PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达分析
4
作者 袁利明 陈云蕾 +1 位作者 刘欣杰 赛务加甫 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第19期53-56,61,137,共6页
为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、... 为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、睾丸、卵巢、子宫)及淋巴组织(颈前淋巴、肩前淋巴、网胃淋巴、瓣胃淋巴、瘤胃淋巴、肠系淋巴、十二指肠淋巴、腹股沟淋巴、空肠淋巴和回盲淋巴)的表达规律进行研究。结果表明:哈萨克绵羊胰腺PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),卵巢PLC-γ1基因的相对表达量显著高于肾脏和子宫(P<0.05),其余器官PLC-γ1基因相对表达量均差异不显著(P>0.05);十二指肠淋巴PLC-γ1基因的相对表达量显著高于瓣胃淋巴(P<0.05),瓣胃淋巴PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他淋巴组织(P<0.01)。说明PLC-γ1基因在哈萨克绵羊各系统器官和淋巴组织中均有表达,并且在胰腺、卵巢、十二指肠淋巴、瓣胃淋巴中的表达明显,对机体免疫、生殖和消化等方面具有重要作用。 展开更多
关键词 哈萨克绵羊 plc-γ1基因 器官 淋巴 表达
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A型魏氏梭菌α毒素氨基端PLC结构分析与生物学活性鉴定 被引量:1
5
作者 许崇利 许崇波 宫语晨 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期213-219,共7页
利用PCR扩增技术克隆A型魏氏梭菌α毒素氨基端的PLC1-250基因,构建含PLC1-250基因表达质粒的BL21(DE3)(p N-PLC1-250)重组菌株,序列分析和酶切鉴定证实构建的p N-PLC1-250重组质粒含有目的基因且基因序列与阅读框架均正确。SDS-PAGE分... 利用PCR扩增技术克隆A型魏氏梭菌α毒素氨基端的PLC1-250基因,构建含PLC1-250基因表达质粒的BL21(DE3)(p N-PLC1-250)重组菌株,序列分析和酶切鉴定证实构建的p N-PLC1-250重组质粒含有目的基因且基因序列与阅读框架均正确。SDS-PAGE分析表明,PLC1-250蛋白表达量占菌体总蛋白相对含量的18.76%。利用SOPMA法预测PLC1-250蛋白分子的二级结构,且同源模建了其3D结构,结果表明,PLC1-250蛋白分子的二级结构主要为α螺旋和无规则卷曲,三级结构与α毒素相类似。此外,还对其生物学活性进行了鉴定,可为进一步探索α毒素作用的分子机制,以及其分子结构与生物学功能的关系奠定基础。 展开更多
关键词 A型魏氏梭菌 α毒素plc基因 生物学活性 圆二色光谱
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重组产气荚膜梭菌plc基因植物乳酸杆菌的免疫效果评价
6
作者 张艳 周庆民 +8 位作者 冯万宇 徐馨 黄健 王新 李兰兰 王莹莹 郑晓星 宁秀云 李广兴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期3-8,129,130,共8页
为了评估表达产气荚膜梭菌α毒素plc基因的重组植物乳酸杆菌口服活菌疫苗的免疫保护效果,分别进行了重组活菌疫苗的免疫和产气荚膜梭菌攻菌试验。免疫组雏鸡分为3组,于7~28 d分别连续免疫p SIP409空载体植物乳酸杆菌、pSIP409-plc重组... 为了评估表达产气荚膜梭菌α毒素plc基因的重组植物乳酸杆菌口服活菌疫苗的免疫保护效果,分别进行了重组活菌疫苗的免疫和产气荚膜梭菌攻菌试验。免疫组雏鸡分为3组,于7~28 d分别连续免疫p SIP409空载体植物乳酸杆菌、pSIP409-plc重组植物乳酸杆菌和灭菌PBS;攻菌组雏鸡免疫方法同上,于43~47 d连续口服产气荚膜梭菌(设置PBS免疫组不攻菌只口服等量PBS对照)。通过病理组织学检查疫苗对雏鸡组织器官的损害作用; ELISA检测抗体动态变化、攻菌后细菌分离计数、剖检肠道病变评分、雏鸡体重变化和免疫器官发育情况来整体评价疫苗的免疫水平。结果显示,与对照组相比重组疫苗的免疫没有对雏鸡组织器官产生损害作用,plc特异性抗体IgG和s IgA水平检测显示,抗体水平随日龄增长呈现上升趋势,且与未免疫组有显著和极显著差异(P <0.05,P <0. 01);攻菌后免疫组雏鸡各项指标在短暂下降后很快升高,且明显高于未免疫组雏鸡。攻菌组各项试验也证明,我们的重组口服活菌疫苗对产气荚膜梭菌攻击雏鸡起到很好的保护作用。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 plc毒素 植物乳酸杆菌 免疫保护
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PLC delta1基因在上皮性卵巢肿瘤中的表达和临床意义
7
作者 何剑辉 杨国奋 +1 位作者 蔡木炎 谢丹 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期540-544,共5页
【目的】本研究旨在探讨PLC delta1在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义。【方法】采用免疫组化方法,检测PLC delta1在223例上皮性卵巢肿瘤(183例卵巢癌和对照组40例交界性卵巢肿瘤)组织芯片中的表达;结合患者的临床资料,分析PLC del... 【目的】本研究旨在探讨PLC delta1在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义。【方法】采用免疫组化方法,检测PLC delta1在223例上皮性卵巢肿瘤(183例卵巢癌和对照组40例交界性卵巢肿瘤)组织芯片中的表达;结合患者的临床资料,分析PLC delta1的表达与上皮性卵巢癌的关系。【结果】在有效检测的197例上皮性卵巢肿瘤标本中,大多数(25例,80.6%)交界性肿瘤呈现正常表达,而在卵巢癌中,多数(91例54.8%)肿瘤出现PLC delta1的过度表达,两者存在显著差异(P<0.0001);而且PLC delta1在卵巢癌中表达与肿瘤的临床分期、患者年龄有显著的相关性(P<0.0001)。【结论】PLC delta1在卵巢癌组织中的过度表达与肿瘤的恶性进展密切相关,可能是未来检测卵巢癌的一种有价值的新肿瘤标志物。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 plc delta1 癌基因
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PI-PLC基因调节植物花粉管生长作用的研究进展 被引量:1
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作者 李丽丽 常如慧 +5 位作者 杨丽凤 梁塔娜 张艳欣 姜桐桐 孙雪 黄凤兰 《贵州农业科学》 CAS 2018年第6期20-23,共4页
磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)能够水解植物细胞中的磷脂生成三磷酸肌醇(IP3),而IP3可以促进花粉管细胞中Ca^(2+)的释放,从而促进植物花粉管生长。深入了解PI-PLC调节植物生长的作用,从而为PI-PLC基因在植物生长中的进一步研究提供参... 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)能够水解植物细胞中的磷脂生成三磷酸肌醇(IP3),而IP3可以促进花粉管细胞中Ca^(2+)的释放,从而促进植物花粉管生长。深入了解PI-PLC调节植物生长的作用,从而为PI-PLC基因在植物生长中的进一步研究提供参考,从PI-PLC基因的定位与结构、PI-PLC与质膜的结合方式、IP3促进Ca^(2+)释放的途径以及PI-PLC调节植物花粉管极性生长的作用机制等方面进行综述,并对磷脂酶C的水解产物及其调控植物生长发育的分子机制研究进行了展望。 展开更多
关键词 特异性磷脂酶C PI-plc基因 三磷酸肌醇 Ca2+信号
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AA818342等6个新基因参与大鼠再生肝8种细胞的PLC信号转导
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作者 李静雯 秦波 +2 位作者 陈晓光 于亚男 徐存拴 《河南科学》 2010年第8期931-940,共10页
为了解AA818342、BM389035、BF289002、BF403759、AI170687、AI715484等6个新基因在PLC信号通路中的作用及与大鼠肝再生的相关性,分离大鼠再生肝8种细胞,检测它们的基因表达变化,分析新基因与已知基因的序列同源性、共表达关系及参与的... 为了解AA818342、BM389035、BF289002、BF403759、AI170687、AI715484等6个新基因在PLC信号通路中的作用及与大鼠肝再生的相关性,分离大鼠再生肝8种细胞,检测它们的基因表达变化,分析新基因与已知基因的序列同源性、共表达关系及参与的生理活动.结果表明,AA818342与col8a1同源,在30 h和72 h再生肝的卵圆细胞中表达下调,在各期再生肝的库普弗细胞中表达上调.BM389035与itga1同源,在168 h再生肝的树突状细胞中表达下调.BF289002与gnai1同源,在12 h和168 h再生肝的卵圆细胞表达上调.BF403759与cacna1d同源,在2 h再生肝的星形细胞表达上调.AI170687与mef2c同源,在36 h再生肝的树突状细胞中表达下调.AI715484与prkce同源,在2 h再生肝的星形细胞中表达上调.上述基因转录谱预示,AA818342等6个新基因属于PLC信号通路成分,参与大鼠再生肝8种细胞的PLC信号转导. 展开更多
关键词 大鼠肝再生 RAT Genome2302.0芯片 基因转录谱 plc信号转导
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磷脂酶C基因家族研究进展 被引量:8
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作者 王法微 王骐 +4 位作者 邓宇 董金晔 王南 李晓薇 李海燕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期33-39,共7页
磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因是磷脂酶基因家族中的一个成员,它能够水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成两个重要的信使分子肌醇三磷酸和二酰甘油。在动物中磷脂酶C基因可以通过调节胞内钙离子的释放以及激活蛋白激酶C来起作用,而植物中... 磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)基因是磷脂酶基因家族中的一个成员,它能够水解磷脂酰肌醇4,5-二磷酸生成两个重要的信使分子肌醇三磷酸和二酰甘油。在动物中磷脂酶C基因可以通过调节胞内钙离子的释放以及激活蛋白激酶C来起作用,而植物中磷脂酶C可以参与植物对生物及非生物胁迫的调节,但其作用的具体方式仍不清楚。综述了磷脂酶C基因的研究进展,主要包括基因的分类、结构以及其在不同逆境信号转导中的作用方式。 展开更多
关键词 plc基因 肌醇三磷酸 二酰甘油 结构 信号转导
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原发性肝癌患者血清p16和DAPK基因启动子甲基化的研究 被引量:3
11
作者 陈龙邦 林勍 +1 位作者 唐永明 王晶 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期175-177,共3页
目的研究原发性肝癌患者血清p16和DAPK基因启动子甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测64例PLC患者血清p16基因和DAPK基因启动子甲基化,并分析与临床病理资料的关系。结果PLC患者血清p16基因和DAPK基因甲基... 目的研究原发性肝癌患者血清p16和DAPK基因启动子甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测64例PLC患者血清p16基因和DAPK基因启动子甲基化,并分析与临床病理资料的关系。结果PLC患者血清p16基因和DAPK基因甲基化检出率分别为76.6%(49/64)和40.6%(26/64),而正常对照组和良性肝部疾病组血清未检出p16基因和DAPK基因甲基化;p16基因和DAPK基因甲基化检出率与HBsAg、分期及转移状态无明显关系,而与AFP有关联。结论p16基因和DAPK基因启动子异常甲基化参与了PLC的发生发展过程,并可作为PLC早期辅助诊断的分子标志物之一。 展开更多
关键词 原发性肝癌 P16基因 DAPK基因 血清DNA甲基化
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杨树磷酸肌醇特异性磷脂酶C基因家族鉴定与分析 被引量:5
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作者 张杰伟 丁莉萍 +2 位作者 陈亚娟 王宏芝 魏建华 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1181-1186,共6页
为了对已测序杨树Populus trichocarpa Torr.&Gray中磷酸肌醇特异性磷脂酶C(phosphoinositidespecific phospholipase C,PI-PLC)家族基因进行系统分析,利用杨树基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定杨树PI-PLC家族基因的基因结构、... 为了对已测序杨树Populus trichocarpa Torr.&Gray中磷酸肌醇特异性磷脂酶C(phosphoinositidespecific phospholipase C,PI-PLC)家族基因进行系统分析,利用杨树基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定杨树PI-PLC家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过蛋白序列比对进行进化和分类分析。结果表明,杨树中含有7个PI-PLC家族基因,含有8-10个外显子,分布于杨树的4条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,杨树PI-PLC蛋白均含有4个保守的EF、X、Y和C2结构域。蛋白质进化树分析结果表明PI-PLC可分为2个亚家族。 展开更多
关键词 磷酸肌醇特异性磷脂酶C 杨树 进化分析 基因家族
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桃磷酸肌醇特异性磷脂酶C基因家族鉴定与分析 被引量:4
13
作者 张杰伟 任飞 +2 位作者 张中保 谢华 魏建华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期185-190,共6页
为了对桃(Prunus persica var.Lovell)中PI-PLC家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃PI-PLC家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃中含有5个PI-PLC家... 为了对桃(Prunus persica var.Lovell)中PI-PLC家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃PI-PLC家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃中含有5个PI-PLC家族基因,预测他们均含有9个外显子,分布于桃的2条染色体上。保守结构域分析结果显示,桃中PI-PLC蛋白均含有4个保守的EF、X、Y和C2结构域。进化树分析结果表明桃PI-PLC家族基因可分为4个亚家族。 展开更多
关键词 磷酸肌醇特异性磷脂酶C 进化分析 基因家族
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原发性肝癌与人类白细胞抗原的相关性研究
14
作者 殷石 曹峰林 +1 位作者 王加伟 孙友强 《黑龙江医学》 1999年第7期19-20,共2页
目的:探讨原发性肝癌与人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类基因系统多态性之间的关系。方法:采用微量淋巴细胞毒(MIC)方法,对31例诊断明确的原发性肝癌(PLC)患者和101例无血缘关系的健康汉族人进行研究。结果:PDC组HLA-B8抗原频率较对... 目的:探讨原发性肝癌与人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类基因系统多态性之间的关系。方法:采用微量淋巴细胞毒(MIC)方法,对31例诊断明确的原发性肝癌(PLC)患者和101例无血缘关系的健康汉族人进行研究。结果:PDC组HLA-B8抗原频率较对照组显著增加(RR=30.15,P<0.001)。结论:HLA-B8为PLC的易感基因,其可能与PLC致病基因连锁不平衡或直接作为免疫应答基因而导致PLC的发生。 展开更多
关键词 原发性肝癌 人类白细胞抗原 HLA-B 相关性研究 诊断 对照组 抗原频率 结论 目的 方法
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产气荚膜梭菌实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法的建立和比较 被引量:14
15
作者 刘立兵 李睿文 +4 位作者 陈志敏 王金凤 孙晓霞 袁万哲 王建昌 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第4期268-272,共5页
根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立产气荚膜梭菌的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光聚合酶重组酶扩增(recombinase polymerase amplification,R... 根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立产气荚膜梭菌的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光聚合酶重组酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。特异性分析结果表明,建立的两种检测方法特异性强,仅对产气荚膜梭菌有特异性扩增,对其他细菌均无扩增;两种方法的检出限均为1.3 pg/μL。在人工污染模拟样品的检测中,两种方法的检出限均为1.0×102 CFU/mL;实时荧光RPA需要3~13 min即可实现对所有阳性样品的检测,而实时荧光PCR则需要24~46 min(Ct值为17.45~33.65)。实时荧光RPA方法在检测时间、操作方便性和仪器便携性方面,明显优于实时荧光PCR方法。本研究建立的实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法特异性强、灵敏性高、操作方便,为实验设备装备较差的基层检测实验室和疫情突发现场产气荚膜梭菌的快速检测提供有效技术手段。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 plc基因 实时荧光聚合酶重组酶扩增 实时荧光聚合酶链式反应
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兰花磷酸肌醇特异性磷脂酶C基因家族生物信息学分析 被引量:4
16
作者 胡广隆 陈亚娟 +2 位作者 魏建华 王宏芝 张杰伟 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期2218-2223,共6页
【目的】为研究兰花(Phalaenopsis equestris)中PI-PLC基因家族各成员在兰花中的生理功能。【方法】利用兰花基因组数据库,经过生物信息学分析,获得兰花PI-PLC基因家族成员的基因结构、染色体定位和编码蛋白,经过多重序列比对进行进化... 【目的】为研究兰花(Phalaenopsis equestris)中PI-PLC基因家族各成员在兰花中的生理功能。【方法】利用兰花基因组数据库,经过生物信息学分析,获得兰花PI-PLC基因家族成员的基因结构、染色体定位和编码蛋白,经过多重序列比对进行进化和分类分析。【结果】结果表明:兰花基因组中含有3个PI-PLC家族基因成员,分别含有9~13个外显子。TMHMM跨膜区结构分析显示,兰花PI-PLC蛋白均不含有跨膜区;MEME保守结构域分析显示,兰花PI-PLC蛋白均含有4个保守的EF、X、Y和C2结构域。【结论】以上结果对解析兰花PI-PLC蛋白的生物学功能提供重要的线索。 展开更多
关键词 磷酸肌醇特异性磷脂酶C 兰花 基因家族 进化分析
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绵羊磷脂酶C-γ1基因克隆及生物信息学分析 被引量:5
17
作者 袁利明 胡广东 +4 位作者 刘欣杰 吴晓雪 刘素平 陈宁 赛务加甫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期1883-1893,共11页
本研究旨对绵羊磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)基因预测序列进行筛选鉴定,获取PLC-γ1基因序列并对其生物信息学进行分析。根据GeneBank(登录号:NC_040264.1)及Ensembl(登录号:ENSOARG00000001700.1)给出的绵羊PLC-γ1的4种不同预测的转录本的编... 本研究旨对绵羊磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)基因预测序列进行筛选鉴定,获取PLC-γ1基因序列并对其生物信息学进行分析。根据GeneBank(登录号:NC_040264.1)及Ensembl(登录号:ENSOARG00000001700.1)给出的绵羊PLC-γ1的4种不同预测的转录本的编码区(CDS)区进行BLAST对比,在非同源区内两端设计引物,从绵羊卵巢提取总RNA并转录成cDNA,运用RT-PCR方法扩增该特异性片段,胶回收后测序,经BLAST比对筛选出和与该片段一致基因序列。根据筛选序列的引物,运用LA Taq(GC Buffer)高保真酶对绵羊PLC-γ1基因进行PCR扩增,胶回收产物连接PUC57-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑选单克隆进行测序。利用生物信息学技术对该基因及编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出非同源片段330 bp,经BLAST对比分析,预测的转录本X3预测序列与其一致,连接PUC57-T载体,经测序成功扩增3870 bp的绵羊PLC-γ1基因。绵羊PLC-γ1基因与山羊关系紧密,与牛、马、猪等家畜具有较强的进化关系,蛋白分子式为C_(6582)H_(10160)N_(1812)O_(1962)S_(58)。理论分子质量为147.9 ku,存在于细胞质内,且不具备跨膜性,无信号肽,为亲水性弱酸不稳定蛋白。该基因N、C端GC含量偏高,分别达80%、70%以上,具备SH2、SH3、C2等高度保守结构域,二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为36.46%、16.14%、5.04%和42.36%,磷酸化位点有112个,Y428、Y509和S514为关键磷酸化位点。本研究结果为绵羊PLC-γ1蛋白表达研究提供了理论依据,对研究新疆地方品种羊的胚胎发育、提高受精率等具有重要意义。 展开更多
关键词 绵羊 磷脂酶C-γ1(plc-γ1)基因 生物信息学分析
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乳制品及婴幼儿配方食品中蜡样芽孢杆菌的快速检测 被引量:2
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作者 刘新梅 程逸宇 +4 位作者 张弛 方昕 高翔 朱荣 杨军 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期51-53,共3页
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种常见的食源性致病菌,通过产生腹泻毒素和呕吐毒素导致食物中毒。针对蜡样芽孢杆菌的特异性卵磷脂-水解磷脂酶C基因(pc-plc)进行实时荧光PCR检测,开发出一种新的快速检测方法,能够快速准确地检测乳... 蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种常见的食源性致病菌,通过产生腹泻毒素和呕吐毒素导致食物中毒。针对蜡样芽孢杆菌的特异性卵磷脂-水解磷脂酶C基因(pc-plc)进行实时荧光PCR检测,开发出一种新的快速检测方法,能够快速准确地检测乳制品及婴幼儿配方食品中的蜡样芽孢杆菌。该方法具有较高的特异性,灵敏度可达150 g-1。人工污染实验表明,在婴儿米粉中蜡样芽孢杆菌检测灵敏度可到200 g-1;在巴氏杀菌乳、酸奶、婴幼儿奶粉中检测灵敏度为103g-1。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 卵磷脂-水解磷脂酶C基因(pc-plc) 实时荧光PCR快速检测
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产气荚膜梭菌plc基因的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量:8
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作者 郑晓星 解真真 +6 位作者 任晓峰 王衡 王勇 杨静红 任玉东 马德星 李广兴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1048-1052,共5页
采用PCR方法扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-plc,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经切胶纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应... 采用PCR方法扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-plc,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经切胶纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导4~5h后重组蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为66ku。用间接ELISA方法检测的多抗血清效价达到1∶65 536。Western-blot结果证实,重组蛋白与制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的反应原性,而且多抗血清能够检测产气荚膜梭菌分泌的天然α毒素蛋白。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 plc基因 多克隆抗体 蛋白质印迹
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荧光MIRA法快速检测食品中产气荚膜梭菌
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作者 张士财 丁卫平 +4 位作者 伊廷存 张瑞 朱富强 崔俊凤 霍胜楠 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期139-146,共8页
目的基于荧光多酶恒温快速扩增(MIRA)技术,建立一种快速准确检测食品中产气荚膜梭菌的方法。方法利用产气荚膜梭菌共有α毒素编码基因plc保守序列设计引物探针,并建立和优化荧光MIRA方法;提取17种非目标菌基因组DNA进行方法特异性验证;... 目的基于荧光多酶恒温快速扩增(MIRA)技术,建立一种快速准确检测食品中产气荚膜梭菌的方法。方法利用产气荚膜梭菌共有α毒素编码基因plc保守序列设计引物探针,并建立和优化荧光MIRA方法;提取17种非目标菌基因组DNA进行方法特异性验证;梯度稀释目标菌基因组DNA和菌液用于方法灵敏度评价;选取4种食品进行基质干扰试验,评估方法的稳定性;检测实际样品并与国家标准方法进行比较,以验证该方法的实用性。结果该方法特异性强,检测多种非目标致病菌均呈阴性反应;灵敏度高,以基因组DNA为模板和菌液为模板时最低检测限分别为1.05×10^(1) fg/μL和7.5×10^(0) CFU/mL;该方法不受基质影响,抗干扰能力强;耗时短,约20 min即可完成检测。结论本研究中的荧光MIRA方法快速准确、灵敏度高、特异性强,可用于食品中产气荚膜梭菌的快速检测。 展开更多
关键词 多酶恒温快速扩增 产气荚膜梭菌 plc基因 分子检测 食源性致病菌
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