淫羊藿苷基于PLCγ1/AKT/eNOS/NO信号通路改善大鼠少弱精症

目的:探究淫羊藿苷对少弱精症的治疗作用及其作用机制。方法:以奥硝唑(800 mg/kg)所致少弱精症大鼠为动物模型,以淫羊藿苷(50、100 mg/kg)及左卡尼汀(100 mg/kg)干预。称量生殖器官质量,统计实验产仔率,分析附睾精子密度和精子活力;ELISA试剂盒检测血清睾酮含量;苏木精-伊红(HE)观察各组大鼠睾丸组织病理学;免疫荧光染色检测生精小管Sertoli细胞数量;试剂盒测定血清NO含量;Western Blot检测睾丸p-PLCγ1、p-AKT、p-eNOS表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷100 mg/kg组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01)。结论:淫羊藿苷可以改善少弱精症,其机制可能与PLCγ1/AKT/eNOS/NO通路有关。

基于Btk-PLCγ2-NFATc1通路分析调控miR-17-5p表达对根尖周炎大鼠骨破坏的修复作用

目的 分析基于布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)-磷脂酰肌醇特异性磷酯酶(PLCγ2)-活化T-细胞核因子(NFATc)1通路调控微小RNA-17-5p(miR-17-5p)表达对根尖周炎大鼠骨破坏的修复作用。方法 将60只大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、上调(C)组、下调(D)组各15只,除A组外,其余大鼠均建立根尖周炎模型,C组、D组分别转染miR-17-5p模拟物(mimics)、miR-17-5p抑制剂(inhibitor)行上调、下调转染,A组、B组给予等体积生理盐水干预。观察各组病理组织学、miR-17-5p表达量、骨细胞阳性细胞数、炎性浸润指标水平及Btk-PLCγ2-NFATc1通路蛋白表达量。结果 与C组相比,D组miR-17-5p表达量,炎性浸润指标水平,Btk、PLCγ2、NFATc1蛋白表达量显著较低(P<0.05)。与C组相比,D组骨细胞阳性细胞数显著较少(P<0.05)。结论 下调miR-17-5p可能通过下调Btk、PLCγ2、NFATc1蛋白表达量、抑制Btk-PLCγ2-NFATc1通路,减少骨细胞阳性细胞数,对骨破坏起一定的修复作用。

信号分子PLCγ-2PH结构域与PKC的结合

目的： 从大鼠脾脏克隆信号分子ＰＬＣγ２ 氨基端ＰＨ 结构域基因， 并进行ＧＳＴ 融合表达。检测信号分子ＰＬＣγ２ 氨基端ＰＨ 结构域与ＰＫＣ 的结合， 为进一步研究其在信号转导中所介导的功能、寻找其新配基奠定基础。方法：采用异硫氰酸胍变性和酚氯仿抽提的方法， 从大鼠新鲜脾组织中提取总ＲＮＡ， 紫外线定量后，反转录合成ｃＤＮＡ，以ＰＣＲ 扩增目的基因片段，双酶切后定向克隆到载体ｐ ＵＣ１９ 中。将引物末端用同位素（［ｒ － ３２ｐ］ＡＴＰ） 标记后，以双脱氧终止法测序；再将基因片段定向克隆到表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１ 中。以ＩＰＴＧ 在低温条件下（２６ ℃） 诱导１ ｈ ，进行ＧＳＴ融合表达。用ａｇａｒｏｓｅ ｂｅａｄｓ“锚定”，并纯化表达的ＧＳＴＰＨ 融合蛋白。将Ｊｕｒｋａｔ 细胞的裂解液与上述纯化的融合蛋白共孵育，以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测ＰＨ 结构域与ＰＫＣ 的结合。结果： 信号分子ＰＬＣγ２ 的ＰＨ 结构域基因完全正确，内部不含终止码，为一开放读框。在表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１ 中得到融合表达，表达产物为可溶性的。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测到ＰＨ 结构域与ＰＫＣ 的结合。结论：从组织细胞中克隆ＰＨ

慢病毒导入的PLCγ1 siRNA对人大肠癌细胞增殖和黏附的影响

目的:制备在人大肠癌细胞系LoVo中稳定抑制PLCγ1(phospholiase C-gamma 1)的重组病毒,建立PLCγ1表达降低的细胞系,以便客观研究该基因的作用。方法:制备产生PLγ1 siRNA分子的重组慢病毒,在慢病毒感染LoVo细胞后以杀稻瘟菌素筛选稳定表达细胞系。应用Western-blot和RT-PCR对细胞中PLCγ1的蛋白和mRNA表达水平进行分析,XTT法和黏附能力测定分别检测其对细胞增殖和黏附的影响。结果:PLCγ1 siRNA显著下调了LoVo细胞中PLCγ1的表达,所构建的重组慢病毒导入的siRNA有较高的沉默效率,LoVo细胞的黏附能力显著降低,细胞增殖无明显改变。结论:研究证实了 PLCγ1基因可显著地影响大肠癌LoVo细胞的黏附能力,为利用PLCγ1介导的信号通路进行肿瘤基因治疗提供了实验依据。

新生儿脐血淋巴细胞PLCγ1的表达和意义

目的 :探讨新生儿出生时淋巴细胞功能障碍的可能环节。方法 :给予新生儿脐血和成人外周血淋巴细胞抗CD3单克隆抗体、PMA和IM刺激后 ,应用3H TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖反应 ;Westernblot法检测淋巴细胞PLCγ1的表达。结果 :抗CD3单克隆抗体刺激 ,脐血淋巴细胞增殖反应明显低于成人 ;PMA协同IM刺激后 ,脐血淋巴细胞的增殖反应明显高于应用抗CD3单抗刺激后的 ;脐血淋巴细胞PLCγ1的表达明显弱于成人。结论 :脐血淋巴细胞功能障碍可能与细胞活化的上游信号转导缺陷有关。

共刺激信号对脐血淋巴细胞增殖反应及PLCγ1表达的影响

目的探讨新生儿出生时淋巴细胞功能低下的可能环节。方法给予成人外周血和脐血淋巴细胞共刺激(抗CD3、抗CD28单抗)和跨膜刺激(phorbolmyristateacetate,PMA和ionomycin,IM)后,应用犤3H犦-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应;WesternBlot法检测淋巴细胞磷脂酶Cγ1(phospholipaseCγ1,PLCγ1)的表达。结果抗CD3+抗CD28单抗共刺激后,脐血淋巴细胞的增殖反应明显增强;PMA+IM跨膜刺激后,脐血淋巴细胞增殖反应的改善更接近于成人。给予抗CD3+抗CD28单抗共刺激后,脐血淋巴细胞PLCγ1的表达低于成人外周血;刺激前后脐血淋巴细胞PLCγ1表达差异无显著性,而成人外周血淋巴细胞PLCγ1表达则有显著增加。结论脐血淋巴细胞活化的下游途径可以发挥更接近于成人的作用,推测其功能障碍可能主要在于淋巴细胞活化的早期阶段。

野生型小鼠慢性根尖周炎模型PLCγ2的表达

背景:研究表明,抑制BTK-PLCγ2-Ca^(2+)信号通路,破骨细胞的形成和功能受到抑制,说明PLCγ2参与了破骨细胞的形成和分化。目的:通过建立野生型小鼠慢性根尖周炎模型,观察PLCγ2在小鼠实验性根尖周炎组织中的表达。方法:选用20只C57BL/6L野生型雄性小鼠,随机选取16只为实验组行双侧下颌第1磨牙开髓术,并将开髓后的髓腔暴露于口腔环境,诱导形成根尖周炎病损。分别于开髓后1,2,3和4周各随机处死4只小鼠,分离下颌骨。剩余4只不开髓作为空白对照,0周时处死后分离下颌骨。制作冰冻切片后用苏木精-伊红染色方法观察小鼠根尖组织炎症情况,免疫组织化学染色检测PLCγ2的表达与分布情况,酶组织化学染色检测根尖组织炎症区域破骨细胞的表达。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色结果:对照组小鼠下颌第1磨牙牙周组织几乎无炎性细胞浸润;实验组1-4周,下颌第1磨牙牙周组织炎性细胞浸润范围越来越大,牙槽骨破坏也逐渐增多,说明成功建立了小鼠根尖周炎模型;(2)免疫组织化学染色结果:发现PLCγ2在小鼠根尖周炎的0-4周都有表达;对照组根尖周组织中仅有少量PLCγ2的表达;实验组1-4周PLCγ2阳性表达随炎症细胞浸润范围的逐渐扩大而增长(P <0.05);(3)TRAP染色结果:对照组根尖牙周组织中几乎不能观察到破骨细胞;实验组1周,可观察到少量的多核破骨细胞;实验组2周,破骨细胞的数量持续增多;实验组3周达到峰值;实验组4周破骨细胞数量逐渐减少;与对照组相比差异均有显著性意义(P <0.05);(4)相关性分析:TRAP阳性细胞计数值和PLCγ2阳性细胞计数之间有显著相关性(r=0.627,P <0.001);(5)结果说明,PLCγ2在小鼠根尖周组织中有表达,提示其可能与根尖周炎症反应和骨吸收作用相关。

CKLF1通过激活PLCγ/FAK信号途径促进SH-SY5 Y细胞迁移

目的考察趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1)对神经系统细胞系SH-SY5Y细胞迁移运动的影响,并进一步研究其分子机制。方法采用CELLocate细胞定位法研究CKLF1在不同时间点对SH-SY5Y细胞迁移的影响;采用蛋白免疫印迹法观察CKLF1是否能够增强与细胞迁移密切相关的局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)Tyr-397位点的磷酸化水平,并进一步研究抑制FAK上游分子PLCγ对这一作用的影响;采用Boyden趋化小室法观察抑制FAK或PLCγ对CKLF1趋化活性的影响。结果 CKLF1对SH-SY5Y细胞具有趋化作用,能够诱导其迁移运动,并能明显增强FAK-pY397位点的磷酸化水平,而加入PLCγ抑制剂U73122则减弱了CKLF1诱导的FAK磷酸化水平的升高。此外,FAK抑制剂PF-573228和PLCγ抑制剂U73122均可明显抑制CKLF1的趋化活性。结论趋化因子CKLF1能够通过激活PLCγ/FAK信号途径,促进SHSY5Y细胞的迁移运动。

bFGF激活tyrosine kinase／PI3K／PLCγ增加血管内皮细胞[Mg^2＋]i的研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)对人脐带静脉内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HUVECs)内游离镁离子浓度([Mg2+]i)的调节机制研究。方法我们采用荧光指示剂mag-fura-2,运用PTi阳离子测定系统动态测HUVECs的[Mg2+]i。结果经酪氨酸激酶阻断剂(tyrphostin A23和genistein)、3-磷脂酰肌醇激酶阻断剂(wortmannin和LY294002)、磷脂酶Cγ阻断剂(U73122)预处理,能阻断bF-GF诱导的[Mg2+]i增加。但经磷脂酶Cγ阻断剂无活性的类似物(U73343)和丝裂原活化蛋白激酶阻断剂(SB202190和PD98059)预处理,不能阻断bFGF诱导的[Mg2+]i增加。结论bFGF通过酪氨酸激酶/3-磷脂酰肌醇激酶/磷脂酶Cγ信号传递途径使细胞内的Mg2+库释放Mg2+,从而增加HUVECs的[Mg2+]i。

PLCγ1基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响

旨在探究磷脂酶Cγ1(phospholipase Cgamma 1,PLCγ1)基因对绵羊早期胚胎体外发育的影响,为揭示PLCγ1基因在早期胚胎发育过程中的作用机制奠定基础。本研究选取包裹3层以上颗粒细胞的绵羊卵母细胞为试验材料,体外培养成熟后将其分为两组,利用显微注射技术将PLCγ1基因导入MⅡ期(减数第二次分裂中期)卵母细胞(n=127)中为试验组,以显微注射空载体pcDNA3.1-EGFP作为对照组(n=120),经48h后统计其卵裂率;并利用Ca^(2+)探针Rhod 2-AM监测MⅡ卵母细胞和显微注射后16、48、72、96、120h时各时期卵母细胞以及早期胚胎内Ca^(2+)波动。结果显示,PLCγ1基因显微注射后卵母细胞被激活,卵裂率为((19.67±0.2)%,P<0.01),桑椹胚发育率为((9.00±0.17)%,P<0.05);PLCγ1基因注射后,卵母细胞和早期胚胎不同发育时期有Ca^(2+)浓度变化,可观察发现Ca^(2+)主要分布在胞质中且注射48h时可达到峰值(P<0.01)。结果表明,PLCγ1基因可以引起绵羊卵母细胞发育过程中发生Ca^(2+)振荡,启动其卵裂,并促使早期胚胎的继续发育。

三七总皂苷对快速老化SAMP8小鼠PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对快速老化SAMP8小鼠PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路的影响。方法将SAMP8小鼠随机分为模型组、PNS高剂量组、PNS低剂量组,以SAMR1为对照,每天灌胃1次,连续2个月。药物干预后,尼氏染色法观察海马CA1区形态,酶活性试剂盒检测PKC的活性,实时定量PCR检测PI3K、Akt、PLCγ1和PKC mRNA的含量,免疫印迹法检测PI3K、Akt和磷酸化Akt蛋白、PLCγ1和磷酸化PLCγ1蛋白的表达水平。结果尼氏染色检测显示模型组SAMP8海马CA1区神经元数量减少,排列稀疏,PNS可减轻海马CA1区神经元损伤。酶活性试剂盒检测结果显示,与模型组相比,PNS高、低剂量组的PKC活性均显著提高(P<0.05),RT-PCR和免疫印迹结果显示,与模型组相比,PNS高剂量组的PI3K、Akt、PLCγ1和PKC mRNA含量明显增加(P<0.05),PNS高、低剂量组的PI3K、磷酸化Akt和磷酸化PLCγ1的蛋白表达水平均显著上升(P<0.05)。结论PNS可激活快速老化SAMP8小鼠PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路,可能是其改善神经元损伤的作用机制。

CKLF1 induces SH-SY5Y cell migration via PLCγ/FAK signaling pathway

Abstract： Aim To investigate the role of CKLF1 in SH-SYSY cell migration and its molecular regulatory mecha- nism. Methods SH-SYSY cells were stimulated with CKLF1 for 0.5, 2, 8 and 24 h, respectively. The migration distance and the percentage of migration cells were recorded by CELLocate analysis. The phosphorylation of focal adhesion kinase （FAK） at Tyr-397 site was detected by Western blot analysis. By chemotaxis assays, we confirmed the chemotaxis of CKLF1. Furthermore, FAK inhibitor PF-573228 and PLCγ inhibitor U73122 were used for the research of molecular regulatory mechanisms involved. Results CKLF1 promoted cell migration and induced a strong increase in the phosphorylation level of FAK - pY397, which were significantly attenuated by the presence of U73122 （a specific inhibitor for PLCγ）. In addition, the chemotaxis of CKLF1 was obviously blocked by the FAK inhibitor PF-573228. Conclusions CKLF1 induces SH-SYSY cell migration via PLCT/FAK signaling path- way.

电气控制与PLC创新实践型人才培养“三融合”模式构建与实践

培养创新实践型人才,关键在于课程教学的应用型改革。以电气控制与PLC课程为例,强化课程思政引导,构建“教、学、做、思”四维教学体系,采用模块化教学元素和“基础、进阶、拓展、综合”渐进式实验教学方法,结合“理论+实验、线上+线下、虚拟+现实、分工+合作”四元混合式教学模式开展实验教学,形成教学体系、教学方法、教学模式“三融合”模式,引导学生由被动式学习转变为主动式学习。实践证明,“三融合”模式适用于应用型本科院校,效果良好。

PLC在农业机械智能化调度与路径规划中的应用研究

随着现代农业技术的飞速发展,智能化农业机械成为提升农业生产效率与精准度的关键,尤其是可编程逻辑控制器(PLC)技术在农业机械的智能化调度与路径规划中扮演着至关重要的角色。基于此,文章分析了PLC基本原理,阐述了PLC在农业机械智能化调度系统设计及路径规划中的具体作用。结果表明,PLC系统的高速处理能力和开放的通信接口,使其成为实现农业机械自动化与智能化的有效平台。基于PLC的智能调度系统可以精确规划作业顺序,而集成的路径规划算法则可以显著提高作业的效率与精确度。

基于PLC技术的播种机电气自动化技术探究

以进一步提升小麦播种机的作业控制精度及综合播种效率为目标,选取电控单元为改进设计出发点,基于PLC与电气控制技术展开布局设计与应用探究。结合小麦播种所要达到的作业标准及其结构组成特点,建立用于实现精准智能控制的理论计算模型,并进行规范的PLC自动控制程序设计与电气组件配置,形成高质量的全闭环自动播种系统,展开PLC电气控制下的播种作业性能验证。试验结果表明:基于PLC技术的小麦播种机结构控制改进设计,可令播种控制准确率与播种合格率同步得到显著提升,重播率与漏播率分别可控制在5.26%与3.37%,整机播种作业试验效果良好,具有很强的实践推广性,可为类似播种农机智能化的发展提供借鉴与参考。

基于5G多接入边缘计算的云化PLC系统架构设计与应用

随着工业控制系统对柔性化、扁平化的要求不断提升,以PLC为构建基础的传统工业控制网络在大规模接入、算力提升和部署灵活性方面均受到限制.针对这些问题,融合5G网络和边缘计算技术,设计了基于5G多接入边缘计算的云化PLC系统架构,阐述了该架构的运行机制和所涉及的关键技术;在此基础上,进行PLC系统的云化部署和调试,实现了工业现场、企业数据中心、5G网络和边缘网络的集成;最后,通过在某汽车制造公司产线改造过程中的应用,验证了所提架构的有效性.

基于虚拟仿真技术的PLC实训平台设计研究

针对PLC实训平台的特点及受场地、成本限制等诸多问题,该文设计一种以虚拟仿真模型为控制对象的PLC实训平台。该实训平台主要包括PLC和虚拟控制对象2部分,其中,虚拟控制对象由西门子NX MCD应用模块构建,而两者的数据连接则采用OPC通信方式。结果表明,该实训平台的设计能为实践教学提供丰富的工业控制领域典型的虚拟控制对象,并能实现对控制程序的调试与仿真运行,有效地锻炼学生的PLC工程实践能力,也是对传统线下PLC实践教学的有益补充。

PLC技术课程的实践教学设计探究

文章主要探究在PLC实践教学中如何让学生熟练掌握控制原理和编程方法。采用教学做一体化的教学手段和方法,通过学生反复的实践操练,取得了较好的教学效果,体现出实践性教学方法在高职院校专业课教学中的重要性。

Factory IO在PLC应用技术课程虚拟仿真教学中的应用

提出一种基于Factory IO的PLC应用技术课程虚拟仿真教学方法。根据项目设计任务要求,从Factory IO的部件库中选择合适的零部件绘制虚拟设备图,按设计任务要求对虚拟设备进行手动调试,选择和配置PLC,将虚拟设备的信号连接到PLC I/O接口。根据项目的知识点和技能点,在TIA博途中选择合适的指令和编程方法进行程序设计。软硬件设计完成后,进行TIA博途与Factory IO的通信设置与连接,运行Factory IO中的虚拟设备,操作相关控制按钮,观察设备运行情况,修改完善设备和程序直到完全满足设计任务要求。

基于PLC构建电力巡检机器人自动化控制系统

该文对电力巡检机器人的自动化控制系统进行以PLC为基础的设计,提升电力调度的效率与安全性。基于PLC构建电力巡检机器人自动化控制系统总体架构,通过上位机接收操纵台传递的操作者信息以及下位机传递的温度、角度等状态信息,通过OPC通信程序将指令下发至下位机,下位机依据上位机下达指令,通过PID驱动控制器完成电力巡检机器人运动控制,利用模糊C均值聚类方法判别电力巡检机器人故障,将结果实时传送到上位机操纵台的显示器,及时反馈机器人的工作状态。实验结果表明,该系统可以控制机器人完成电力巡检,该系统应用后可有效检测机器人故障,使其具备优秀的避障能力,可实现上下位机实时通信。