淫羊藿苷基于PLCγ1/AKT/eNOS/NO信号通路改善大鼠少弱精症

目的:探究淫羊藿苷对少弱精症的治疗作用及其作用机制。方法:以奥硝唑(800 mg/kg)所致少弱精症大鼠为动物模型,以淫羊藿苷(50、100 mg/kg)及左卡尼汀(100 mg/kg)干预。称量生殖器官质量,统计实验产仔率,分析附睾精子密度和精子活力;ELISA试剂盒检测血清睾酮含量;苏木精-伊红(HE)观察各组大鼠睾丸组织病理学;免疫荧光染色检测生精小管Sertoli细胞数量;试剂盒测定血清NO含量;Western Blot检测睾丸p-PLCγ1、p-AKT、p-eNOS表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷100 mg/kg组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01)。结论:淫羊藿苷可以改善少弱精症,其机制可能与PLCγ1/AKT/eNOS/NO通路有关。

ECE-1基因启动子甲基化调控AKT/eNOS通路对心肌肥厚的影响

目的探讨压力超负荷心肌肥厚大鼠内皮素转换酶-1(ECE-1)基因启动子的甲基化状态及其调控蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(AKT/eNOS)信号通路促进心肌肥厚发病的机制。方法雄性SD大鼠30只随机分成空白组、假手术组、实验组,每组10只。实验组通过腹主动脉缩窄术构建压力超负荷心肌肥厚模型,假手术组分离动脉但不结扎,空白组不手术;第43天检测心重比、心脏超声、心肌形态学改变;RT-qPCR检测心房利钠肽(ANP)和脑利钠肽(BNP)含量;免疫组化法检测ECE-1在心肌组织中的表达;MSP法检测ECE-1基因甲基化状态;Western blot法检测ECE-1、p-AKT、p-eNOS等表达。结果与假手术组比,实验组心重比、左室舒末后壁厚度增加,左室射血分数、左室短轴收缩率减小,形态学观察到实验组心肌明显肥厚(P<0.01),ANP和BNP mRNA表达升高(P<0.01)。与假手术组比,实验组大鼠心肌组织中ECE-1在细胞质表达上调(P<0.01);存在ECE-1非甲基化大鼠的ECE-1蛋白表达上调,p-AKT和p-eNOS蛋白表达下调(P<0.01)。结论压力超负荷心肌肥厚大鼠ECE-1基因启动子的非甲基化可能导致ECE-1表达增加,p-AKT、p-eNOS水平下降,其可能通过抑制AKT/eNO途径促进心肌肥厚的发生。

1-磷酸鞘氨醇受体2介导PI3K/AKT/eNOS通路抑制甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)对甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎的作用及机制。方法:采用甲型流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染野生C57BL/6小鼠和S1pr2^(-/-)小鼠,建立甲型流感病毒性肺炎动物模型。病毒感染4和6 d时观察比较对照组(模型组的野生小鼠)、JTE-013(S1PR2高效拮抗剂)处理的小鼠及S1pr2^(-/-)小鼠肺组织的病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、细胞总数及细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的表达,Western blot法检测小鼠肺组织的AKT和e NOS的磷酸化水平。结果:与模型对照组的野生鼠比较,JTE处理组和S1pr2^(-/-)组甲型流感病毒性肺炎更加严重;BALF中的蛋白浓度,总细胞数及炎性细胞因子表达显著增加;且PI3K下游靶点AKT和e NOS磷酸化显著增高(P<0.01)。结论:S1PR2通过介导PI3K/AKT/e NOS信号转导通路,调节NO生成,抑制血管通透性和炎性细胞因子释放,从而减轻甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎。

柚皮苷联合头穴针刺对脑缺血大鼠血管新生及Notch1/Akt/eNOS通路的影响

目的观察柚皮苷联合头穴针刺对脑缺血大鼠脑组织血管新生及Notch1/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路的影响。方法将120只SD大鼠随机分组为假手术组、模型组、尼莫地平组、柚皮苷组、头穴针刺组和柚皮苷+头穴针刺组,每组20只。除假手术组外,其余组大鼠采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。造模成功后,尼莫地平组给予尼莫地平混悬液12 mg/kg灌胃,柚皮苷组给予柚皮苷溶液80 mg/kg灌胃,头穴针刺组给予头穴针刺干预,柚皮苷+头穴针刺组给予柚皮苷溶液80 mg/kg灌胃和头穴针刺干预,假手术组及模型组给予等量生理盐水灌胃,各组均每天干预1次,连续干预7 d。干预结束后,记录各组大鼠神经功能评分,干/湿重法和TTC染色观察大鼠脑组织含水量及脑梗死体积,ELISA法检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)水平,免疫组化法检测海马组织中VEGF阳性表达情况,Western blot法检测海马组织中Notch1、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、eNOS、磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达情况,RT-PCR法检测海马组织中Notch1、p-Akt、p-eNOS mRNA表达情况。结果模型组大鼠存在明显神经功能损伤及脑梗死,脑组织含水量、血清VEGF和VEGFR-2水平、海马组织中VEGF阳性表达数和Notch1蛋白及mRNA相对表达量均明显高于假手术组(P均<0.05),海马组织中p-Akt/Akt和p-eNOS/eNOS比值及Notch1、p-Akt、p-eNOS mRNA相对表达量均明显低于假手术组(P均<0.05)。与模型组比较,尼莫地平组、柚皮苷组、头穴针刺组和柚皮苷+头穴针刺组大鼠神经功能评分、脑含水量和梗死体积均明显降低(P均<0.05),且柚皮苷+头穴针刺组和尼莫地平组均明显低于柚皮苷组、头穴针刺组(P均<0.05);血清VEGF和VEGFR-2水平,海马组织中VEGF阳性表达数、p-Akt/Akt和p-eNOS/eNOS比值、Notch1蛋白及Notch1、p-Akt、p-eNOS mRNA相对表达量均明显增高(P均<0.05),且柚皮苷+头穴针刺组和尼莫地平组均明显高于柚皮苷组、头穴针刺组(P均<0.05);柚皮苷+头穴针刺组和尼莫地平组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论柚皮苷联合头穴针刺治疗可明显改善脑缺血大鼠神经功能,促进大鼠脑组织血管新生,其作用可能与激活Notch1/Akt/eNOS通路相关。

Exendin-4对Ⅰ型糖尿病小鼠内皮祖细胞功能及AKT/eNOS信号通路的影响

目的探讨Exendin-4对Ⅰ型糖尿病小鼠内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、迁移、黏附、衰老的影响及对AKT/eNOS信号通路的影响。方法采用密度梯度离心法分离并培养6月龄Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs,并用不同浓度的Exendin-4(1、5、10、25μmol·L^(-1))处理EPCs,观察EPCs体外克隆形成及增殖能力。同时观察其对糖尿病小鼠EPCs迁移、黏附及衰老的影响。Western blot检测Exendin-4处理对EPCs蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(AKT/eNOS)信号通路的影响。结果Exendin-4处理可增加Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs克隆形成及增殖能力,尤以10μmol·L^(-1)时作用效果最佳。Exendin-4处理可增加Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs的体外迁移、黏附功能,并抑制细胞衰老。Western blot结果显示,Exendin-4可增强AKT及eNOS磷酸化水平,而GLP-1R抑制剂Exendin-9-39和AKT抑制剂MK-2206则可以阻断这种效应。结论Exendin-4可改善Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs增殖、迁移、黏附能力并抑制细胞衰老,其机制可能与调控AKT/eNOS信号通路有关。

AQP1通过Akt/eNOS调节层流切应力诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成

切应力诱导的内皮细胞血管生成(angiogenesis)在内皮损伤修复中有重要作用,水通道蛋白1(AQP1)与血管生成密切相关,本研究探讨AQP1是否可通过调节Akt/eNOS信号通路,从而调节层流切应力诱导的内皮细胞血管生成。

与膜联蛋白A1抗炎作用相关的信号通路研究进展

膜联蛋白A1(AnxA1)是一类钙依赖的膜磷脂结合蛋白超家族,作为先天免疫系统和适应性免疫系统的关键调节蛋白,在调控抗炎反应、细胞分化、增殖、凋亡以及吞噬清除凋亡细胞等细胞生命活动中发挥重要作用。AnxA1与甲酰基肽受体家族受体结合后,通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、Gq/磷脂酶C(PLC)/蛋白激酶C(PKC)信号通路,调控炎症细胞的黏附、趋化、聚集以及凋亡细胞的吞噬,同时降低炎症因子的产生,在炎症发生、发展及消退过程中发挥重要作用。对AnxA1在抗炎方面信号通路的作用及机制的深入了解,有助于开发AnxA1调控的各种信号通路为靶点的药物,为临床治疗提供新的思路。

基于S1PR1/PI3K/Akt/eNOS信号通路探究健脾化痰方对高脂血症脾虚痰浊小猪血管内皮的保护机制

目的:基于S1PR1/PI3K/Akt/eNOS信号通路探究健脾化痰方对高脂血症(HLP)脾虚痰浊小猪血管内皮的保护机制。方法:普通级广西巴马小型猪15只按随机数字表法随机分为正常组、模型组和健脾化痰组,每组5只。正常组予基础饲料喂饲,模型组和健脾化痰组均予高脂饲料喂饲,造模周期为24周,其中健脾化痰组小型猪在0~24周均应用健脾化痰中药干预。24周后全自动生化分析仪检测各组小猪血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;ELISA法检测各组小猪血清NO、ET-1水平;Western blot法检测各组小猪冠状动脉内皮PI3K、p-Akt/Akt、S1PR1、p-eNOS/eNOS蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组TG、TC、LDL-C、ET-1水平升高(P<0.01),HDL-C、NO水平降低(P<0.05,P<0.01),冠状动脉内皮PI3K、p-Akt/Akt、S1PR1、p-eNOS/eNOS蛋白表达水平下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,健脾化痰组小猪TG、LDL-C、ET-1水平降低(P<0.05,P<0.01),NO水平升高(P<0.01);健脾化痰组小猪冠状动脉内皮PI3K、p-Akt/Akt、S1PR1、p-eNOS/eNOS蛋白表达水平上调(P<0.05,P<0.01)。结论:健脾化痰中药具有良好的保护血管内皮功能的作用,其机制可能是通过激活S1PR1/PI3K/Akt/eNOS信号通路实现的。

人参皂苷Rg_1通过PI3K/Akt/eNOS信号通路调控异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌的抗氧化作用

目的:观察人参皂苷Rg_1预处理对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)通路的影响。方法:采用异丙肾上腺素建立SD大鼠急性心肌缺血模型,将50只大鼠随机分为正常组,模型组,葛根素组,人参皂苷Rg_1高、低剂量组(20,10 mg·kg^(-1));Moor激光血流成像系统观测各组大鼠心脏表面血流值;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定各组大鼠血清中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH),一氧化氮(NO)的水平以及心肌中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测各组大鼠心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测各组大鼠心肌PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠心脏表面平均血流量明显下降,血清NO降低,CK,LDH升高;心肌MDA含量升高,GSH-Px含量下降,eNOS mRNA含量显著降低,PI3K/Akt通路蛋白的表达有所降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,人参皂苷Rg_1高、低剂量组,心肌表面平均血流有显著提升,血清NO升高,CK,LDH降低,心肌MDA含量降低,GSH-Px含量升高,eNOS mRNA表达含量升高,PI3K/Akt通路蛋白的表达有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论:人参皂苷Rg_1可以通过调控PI3K-Akt-eNOS信号通路改善急性心肌缺血大鼠心脏变化防治心血管病变。

腺病毒介导的shRNA下调GLP-1R表达对小鼠内皮祖细胞功能的影响及机制研究

目的探讨腺病毒介导的shRNA下调胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)基因表达对小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)迁移、黏附、衰老的影响及其可能机制。方法采用密度梯度离心法分离并培养小鼠骨髓EPCs,以腺病毒为载体将靶向GLP-1R的shRNA干扰重组体转染至体外培养的EPCs;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(Western Blot)验证GLP-1R基因表达下调。利用Transwell小室检测EPCs迁移能力,黏附实验检测其黏附能力,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,Western Blot检测AKT/eNOS信号通路变化情况。实验分为正常组(在腺病毒转染步骤以EGM-2代替腺病毒液)、对照组(转染表达绿色荧光蛋白的空病毒)和转染组(转染靶向GLP-1R并表达绿色荧光蛋白的RNA干扰重组腺病毒)。结果靶向GLP-1R的shRNA成功转染体外EPCs并下调GLP-1R mRNA及蛋白表达(P<0.01);功能实验显示,与对照组比较,转染组EPCs迁移能力明显降低(P<0.01),黏附能力受损(P<0.01),细胞衰老增加(P<0.01);信号通路显示AKT/eNOS磷酸化水平明显降低(P<0.01)。结论GLP-1R基因表达下调能显著抑制小鼠EPCs迁移及黏附能力,并诱导细胞衰老,其机制可能与调控AKT/eNOS信号通路有关。