蜡样芽孢杆菌ATCC14579毒力基因plcR缺失株的构建及其一般特性

蜡样芽孢杆菌是土壤中的优势菌,具有作为益生菌的潜在能力,同时它也是条件致病菌,能引起食物中毒等。蜡样芽孢杆菌的多种毒力因子受到多效性调控子(pleiotropic regulator,plcR)的调控,在其条件致病性作用中起着重要作用。真养产碱杆菌JMP34(Alcaligenes eutrophus)质粒上的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)单加氧酶(tfdA)基因可以降解2,4-D。本研究利用同源重组技术使tfdA基因置换掉蜡样芽孢杆菌的plcR基因,构建了蜡样芽孢杆菌ATCC14579突变株B.cereus△plcRΩtf-dA,并对其毒性、一般生理生化特性进行分析。研究结果表明,突变株B.cereus△plcRΩtfdA的毒性显著减弱;生理生化实验结果显示突变株与野生株并没有明显区别,且突变株并没有表现出tfdA酶活性。所有的结果表明plcR控制着蜡样芽孢杆菌ATCC14579的致病性,同时剔除plcR并不破坏其酶系统。本研究为今后构建蜡样芽孢杆菌工程菌提供了新的思路和依据。

苏云金杆菌毒素调控基因plcR的特性与表达

根据蜡状芽胞杆菌plcR基因和papR基因序列设计特异引物,对6个Bt菌株(WB1、WB7、WB9、HD98、8010、8311)及5个Bc菌株(6A1、6A2、6A3、6A4、6S1)进行了PCR检测。结果显示,3个Bt菌株及4个Bc菌株含有plcR-papR基因。克隆了Bt8010、Bc6A2和6A3的plcR、papR基因,核苷酸序列分析表明,三个菌株的plcR、papR基因与NCBI数据库中的Bt、Bc及Ba相应序列都有很高的相似性。Bt8010的plcR基因编码框由846个核苷酸组成,可编码282个氨基酸;papR基因的编码框由144个核苷酸组成,可编码48个氨基酸。推导的氨基酸序列分析表明,Bt8010的PapR有21个氨基酸的信号肽序列,PlcR没有信号肽序列。与Bc6A2、6A3和Bc 569相比,Bt8010的PlcR和PapR在氨基酸序列上与Bc相应序列存在相对较大的差异。将plcR-papR基因连接到表达载体pHT304中,并转化至大肠杆菌JM109中成功进行了表达,为研究Bt plcR基因的功能奠定了基础。

PlcR在炭疽芽胞杆菌A16R中的功能研究

炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽胞杆菌(B.cereus)和苏云金芽胞杆菌(B.thuringiensis)均属于蜡样芽胞杆菌群,在遗传学上有很高的相似性。PlcR(Phospholipase C regulator)在蜡样芽胞杆菌中是十分重要的调控因子,但plc R基因在炭疽芽胞杆菌中发生一个无义突变导致在炭疽芽胞杆菌中产生一个截短Plc R蛋白。为了研究plc R基因对炭疽芽胞杆菌功能的影响,文章以蜡样芽胞杆菌CMCC6330基因组为模板,构建重组表达质粒p BE2A-plc R后导入炭疽芽胞杆菌疫苗株A16R中获得重组菌株,对其进行表型分析。结果显示,炭疽芽胞杆菌重组菌株的溶血活性基本没有恢复,但恢复了部分神经鞘磷脂酶活性,表明将蜡样芽胞杆菌的plc R基因导入炭疽芽胞杆菌后,可以直接激活神经鞘磷脂酶活性。

高致病性2型猪链球菌plcR基因敲除株的构建及其相关生物学特性的研究

【目的】构建高致病性2型猪链球菌05ZYH33菌株plcR基因敲除株,通过比较突变株与野生株生物学特性的差异,研究plcR基因在2型猪链球菌致病过程中的作用。【方法】利用同源重组技术敲除plcR基因,多重交叉PCR及RT-PCR鉴定并测序验证。比较野生株与突变株基本生物学特性的差异,小鼠攻毒实验分析plcR基因缺失对细菌毒力的影响。【结果】经RT-PCR证实05SSU0241与05SSU0242共转录,通过多重交叉PCR及RT-PCR证实成功构建plcR基因缺失突变株,基本生物学特性显示突变株的生长速率、菌落形态、溶血活性均无显著改变,小鼠致病性试验结果显示,野生株攻毒的小鼠死亡率为70%,突变株攻毒的小鼠死亡率为40%,毒力较野生株显著降低。【结论】plcR基因作为2型猪链球菌有毒株基因组中特有的外源基因,在细菌致病过程中具有重要作用。

2型猪链球菌新毒力因子PlcR的发现

2型猪链球菌（SS2）是一种重要的人畜共患传染病病原体。SS2感染不仅可致猪急性败血症、脑膜炎、关节炎、心内膜炎及急性死亡，并且可通过伤口和呼吸道等传播途径，导致人的感染发病和死亡。1998年和2005年在我国江苏“苏中”地区和四川资阳等市县人群中曾先后两次暴发大规模SS2感染人的事件。

重症肺炎患者血小板相关参数变化趋势与预后的关系

重症肺炎是呼吸与危重症医学科的一种常见的危重症感染性疾病。疾病特点为症状不典型,即患者不仅出现呼吸系统炎症、肺间质损伤等表现,或还伴随全身炎症反应,如高热、惊厥等;此病进展迅速、来势凶猛,且治疗费用昂贵、效果欠佳,死亡率居高不下,给患者及社会造成巨大的负担。早期识别疾病的发展趋势,评估患者病情严重程度并对其选取有效治疗措施,对降低患者致残率、病死率及合理利用医疗资源至关重要。但目前临床上还缺乏可以精准预测重症肺炎预后的常用指标。血小板相关参数对重症肺炎的预后评估的临床适用性及有效性尚存在争议。本文就血小板相关参数在重症肺炎患者病情评估中的作用进行综述,以帮助临床医生对重症肺炎进行更好评估及诊治。

蜡样芽胞杆菌plcR基因功能及其无义突变株特征分析

目的分析比较蜡样芽胞杆菌HN001与plcR基因无义突变株HN1M的生物特征,并研究蜡样杆菌中plcR基因的功能。方法绘制生长曲线比较蜡样杆菌HN001和HN1M的生长性能;鉴别培养基平板比较两菌株产胞外酶能力;结晶紫染色法测定两菌株生物膜形成;RT-PCR分析两菌株中溶血酶、磷脂酶和肠毒素基因的转录水平;以C57BL/6N小鼠为动物模型比较两菌株的毒力大小。结果与HN001相比,HN1M稳定期菌密度和生物膜形成能力显著升高,溶血能力、产卵磷脂酶能力和对小鼠致病性显著减弱;HN1M中毒力基因hlyD、clO、hly、cerA、cerB、plcA、cytK、nhe和hblCDB转录水平显著下调;tlyA和hblA转录水平无显著差异。结论与HN001相比,蜡样杆菌plcR基因无义突变株HN1M溶血酶和磷脂酶的活性明显降低,毒力明显减弱,该研究为开发蜡样杆菌工程菌和研究plcR的功能提供了新思路。

蜡状芽胞杆菌群菌株中部分病原相关因子的检测

对26株蜡状芽胞杆菌群菌株进行了肠毒素基因及其它病原相关因子的检测。PCR结果表明,17株蜡状芽胞杆菌群菌株中含有病原调控因子plcR的同源序列。采用3组溶血肠毒素hbl基因和3组非溶血肠毒素nhe基因特异性引物,分别可从73%的菌株中至少扩增出一个与预期DNA片段大小一致的片段,其中,苏云金芽胞杆菌菌株中溶血素hbl基因和非溶血素nhe基因的阳性检出率为83%。蜡状芽胞杆菌DBt248完全没有溶血活性,而且在溶血素hbl和非溶血素nhe基因的3个亚基以及病原调控因子plcR的PCR检测中均为阴性,有望作为宿主菌用于苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的表达和应用。

蜡状芽胞杆菌转录激活子PIcR调控多基因的表达

蜡状芽胞杆菌是一种条件致病菌 ,它能引起食物中毒和其它形式的疾病。潜在的致病因子包括磷脂酶C、溶血素、肠毒素和呕吐毒素等。在很多致病菌中致病因子的表达都是协同调控的。从蜡状芽胞杆菌模式菌株ATCC1 4579经转座子诱变的文库 ,筛选到一株磷脂酶阴性的突变子 ,该突变子的蛋白酶活性明显减弱了。插入位点的序列分析表明 ,一个高度同源于苏云金芽胞杆菌转录激活子PlcR的基因被插入失活了。研究结果表明 ,除在苏云金芽胞杆菌中能激活磷脂酰肌醇磷脂酶C基因的转录外 ,转录激活子PlcR至少还能调控卵磷脂酶和一个或多个蛋白酶基因的表达 ,这是一个多效调节因子。

人全长PLCγ1基因真核表达载体的构建及鉴定(英文)

目的构建人全长PLCγ1基因真核表达载体,以便进一步研究PLCγ1的作用及其机制。方法自行设计一对带有HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物,采用RT-PCR技术从MG63细胞中扩增人全长PLCγ1cDNA(3878bp),纯化后,经HindⅢ-NotⅠ酶切,插入真核表达载体pLNCX2中,构建重组质粒pLNCX2/PLCγ1。通过PCR,限制性酶切分析及DNA直接测序对所构建的重组质粒进行鉴定。同时经瞬时转染后,利用RT-PCR及Westernblotting转染后LoVo细胞中PLCγ1的表达。结果RT-PCR产物经琼脂糖电泳分析所得片段大小与预期相符(3878bp)。重组质粒经HindⅢ-NotⅠ酶切后,得到3878bp(PLCγ1基因)及6100bp(载体pLNCX2)两个片段,同时重组质粒经HindⅢ-BglⅡ酶切后,得到约1300bp及约8500bp两个片段,与预期一致。DNA测序也证实了重组质粒的正确。经RT-PCR和Westernblot分析证实转染pLNCX2/PLCγ1的LoVo细胞中PLCγ1的表达均高于转染空质粒pLNCX2的LoVo细胞及未转染的LoVo细胞。结论成功构建了人全长PLCγ1基因真核表达载体pLNCX2/PLCγ1,为进一步研究PLCγ1的作用奠定了基础。

环线空中自行小车信息交换方式的应用研究

在汽车焊装生产线中,从下车体线到总拼线的输送系统采用多台自行小车环形运转的方式,它们与主控PLC之间的信息交换,传统的方法是采用滑触线的方式,存在着数据交换信息量受限、可靠性低和电气安装复杂等弊端。现将无线以太网的通讯技术应用于自行小车信息交换中,具有数据交换无限量、可靠性高和电气安装简单等优点,弥补了传统交换方式的缺陷。

论自动化供水控制系统

介绍一套用1台变频器控制4台水泵的变频供水系统,并说明如何通过上位机、PLC对水泵进行远程、自动、手动控制。

基于Tu8002的多点中央空调远程控制系统

远程控制是中央空调控制系统组成的一个重要部分。本文提出了基于Tu8002的多点中央空调远程控制系统,通过Tu80020实现了微机对PLC的远距离控制。该网络拓扑简单、运维成本低,但是稳定且可靠,在电厂等领域实现了对多点中央空调的远程监视及控制。