经血源子宫内膜干细胞复合3D打印PLGA支架体外培养的相容性研究

[目的]通过经血源子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived mesenchymal stem cells,Men SCs)与3D打印PLGA支架材料的复合培养,探讨构建组织工程化骨软骨的可行性。[方法]预处理3D打印PLGA支架,取第5代Men SCs,倒置显微镜下观察细胞生物学特性,按1.0×106/m L的密度接种到PLGA支架材料上复合培养,通过倒置显微镜、Mico-CT、扫描电镜和组织病理学进行观察,并借此判断Men SCs与3D打印PLGA支架材料复合体外培养的融合性。[结果]Men SCs生长良好,细胞平铺生长,呈梭形或纺锤形,胞质薄,核圆居中,具有成纤维细胞形态。细胞传至第5代,为长梭形细胞单层,呈漩涡状排列。PLGA支架的微观呈现相互连通的多孔结构,结构疏松,孔隙大且互相交通,孔壁较薄。Men SCs在PLGA支架材料上生长状态良好,细胞在支架表面和内部生长,支架孔径内有细胞基质样组织连接,表明Men SCs与3D打印PLGA支架材料复合体外培养的融合性良好。[结论]经血源Men SCs是骨组织工程适宜的种子细胞,与3D打印的PLGA支架材料复合可体外构建组织工程骨。

TGF-β3对PLGA支架3-D培养兔髓核细胞影响的体外研究

目的评价转化生长因子β3(transforming growth factor-β,TGF-β3)对兔髓核细胞在聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylacticco-glycolic acid,PLGA)支架3-D培养的影响。方法应用粒子沥滤法制备多孔PLGA支架培养兔髓核细胞(1×106/PLGA),分为100ng/m L TGF-β3/PLGA,500 ng/m L TGF-β3/PLGA,1μg/m L TGF-β3/PLGA,PLGA对照组。通过MTT分析细胞增殖分化,1,9-二甲基亚甲蓝(DMMB)法检测糖胺多糖(GAG),q PCR检测Ⅱ型胶原(COLⅡ)、Aggrean差异,组织学观察TGF-β3对兔髓核细胞在PLGA支架微孔环境生长形态学改变。结果培养7、14、21 d后TGF-β3/PLGA组的髓核细胞活性、GAG产量、COL II及Aggrecan mRNA表达均高于PLGA对照组(P<0.05)。随着TGF-β3浓度递增,细胞活性及基质表达有显著增加(P<0.05)。21 d组织学HE染色显示TGF-β3/PLGA组较PLGA对照组中微孔支架吸附、积聚更多髓核细胞生长。结论 TGF-β3对PLGA三维培养髓核细胞更好提高分化增殖能力,促进细胞基质分泌。TGF-β3/PLGA支架可作为生物学治疗退变椎间盘病变潜在选择方法。

3D打印PLGA支架修复大鼠上颚骨缺损的实验研究

目的:探讨3D打印聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)支架修复大鼠上颚骨缺损的效果。方法:将PLGA溶解于丙酮中,利用3D打印机打印出间距为100μm、单层厚度为60μm的圆盘形网格状支架材料。将12只大鼠随机分为2组(n=6),制备直径为3 mm的上颚圆形骨缺损,实验组在骨缺损中植入3D打印的PLGA支架后缝合关闭缺损,对照组术后仅缝合关闭缺损。术后8周处死大鼠,行micro-CT及组织学检测观察缺损处骨组织修复情况。结果:成功制备3D打印PLGA支架。大鼠上颚骨缺损造模后8周,植入3D打印PLGA支架的实验组骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV)大于对照组(P<0.05),骨缺损未愈合面积小于对照组(P<0.05)。通过上颚骨组织HE染色,发现实验组骨缺损边缘有大量新生骨质,而对照组只有少量新生骨质。结论:3D打印PLGA支架能够促进大鼠上颚骨缺损的骨再生。

过表达BMP-12的兔BM-MSCs在3D打印PLGA支架上的增殖与分化特性研究

目的探讨过表达骨形态发生蛋白-12(Bone Morphogenic Protein 12,BMP-12)的兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs)在3D打印聚乳酸-羟基乙酸(Polylactic-co-glycolic Acid,PLGA)支架上的增殖与分化特性。方法采用3D打印技术制备PLGA支架,并检测其降解性能,分离、培养兔BM-MSCs,使用BMP-12重组腺病毒表达载体转染兔BMMSCs,并将其种植在PLGA支架上,检测支架的细胞毒性及种植的细胞在支架上的增殖活性,通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测种子细胞Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、BMP-12、SCX、Tnmd、Tnc的基因和蛋白表达水平。结果PLGA支架具有良好的生物相容性和生物可降解性。在种植了过表达BMP-12的BM-MSCs的3 D打印PLGA支架上,BM-MSCs的Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、BMP-12、SCX、Tnmd、Tnc的mRNA和蛋白表达水平显著升高。结论本研究结果提示,在携带过表达BMP-12的BM-MSCs的3 D打印PLGA支架上,BMP-12的过表达促进了BM-MSCs的腱向分化。携带过表达BMP-12的BM-MSCs的PLGA支架可以为肌腱损伤修复提供一种新的治疗方法。

PLGA支架降解均匀性的结构设计与优化研究

目的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)是一种生物可降解材料,是聚乳酸(PLA)和羟基乙酸(PGA)的共聚物,具有良好的生物相容性,降解方式为体降解。体降解会带来一个降解不均匀的问题,容易出现某一连接位置快速降解断裂,其余部分并未充分降解的情况,造成支架失效,分块脱落,造成危害。因为PLGA的降解性能主要与其受到的拉应力有关,故通过结构设计和优化,使得支架再植入后的应力分布的均匀性得到改善,从而改善支架的降解均匀性。方法将设计的支架平面展开。

牙胚细胞与PLGA支架体内复合培养的实验研究

目的摸索胎鼠牙胚细胞体外培养所需的条件及细胞-支架复合物在裸鼠体内培养的条件。方法取17日龄的胎鼠第一磨牙牙胚组织消化成细胞悬液,然后种植于PLGA支架上,再将细胞支架复合物埋植于裸鼠皮下,术后40d后取出细胞支架复合物,观察细胞与支架的吸附及生长,繁殖情况。结果细胞呈单层生长;细胞为多角形,紧密镶嵌成铺路石状;牙胚细胞染成蓝色,支架组织染成红色,牙胚细胞较散在分布,细胞与支架紧密贴附,适度伸展,并有基质分泌。结论牙胚细胞支架复合物在裸鼠体内能够成活,细胞与支架紧密贴附,生长正常并有基质分泌,表明PLGA是牙组织工程良好的支架材料。

胎儿骨髓间充质干细胞复合PLGA支架的形态学观察

目的：探讨胎儿骨髓间充质干细胞(fetal bone marrow mesenchymal stem cens，fBMSCs)与低热高压法制作的聚丙交酯-乙交酯(PLGA)支架材料复合培养，构建组织工程化骨的可行性。方法：预制PLGA支架材料，取5月胎儿肱骨和股骨骨髓，用单核细胞分离液分离fBMSCs，含双抗的低糖DMEM原代和传代培养，侄置显微镜下观察细胞生物学特性，用FITC标记的抗CD105、CD44和用PE标记的抗CD34、CD29对第4代细胞进行流式细胞鉴定，并与PLGA支架材料复合培养1周后行扫描电镜观察。结果：原代及传代培养的fBMSCs增殖较迅速，第4代CD105阳性细胞占84．08％，CD29阳性细胞占88．77％，CD44阳性细胞占89．53％。复合PLGA支架材料细胞生长状态良好。结论：骨髓间充质干细胞(fetal bone marrow mesenehymal stem cells，fBMSCs)是骨组织工程适宜的种子细胞，与低热高压制作的PLGA支架材料复合可体外构建组织工程骨。

PLGA的不同组成对支架材料性能的影响研究

研究PLGA的不同组成对支架材料的力学性能、降解性能和生物学性能的影响。采用溶液浇注/颗粒沥取法制备出不同组成的PLGA多孔支架,对支架的力学性能和降解速率进行考察,同时将人真皮成纤维细胞接种于不同组成的PLGA支架材料上,培养不同时间后,检测细胞的粘附率和增殖率,以及细胞产生的总胶原含量,并通过扫描电镜观察支架上的细胞形态。结果显示,随PLA比例的增加,支架的力学强度增加,降解速率降低,但都不是线性变化。70∶30比例的支架,拉伸强度最高,而70∶30和80∶20两种比例的支架,其降解速率没有显著性差异。PLGA不同组成的支架,均具有良好的细胞相容性,成纤维细胞粘附率和增殖率在三种比例的支架上没有显著性差异,细胞在支架表面生长良好,分泌大量的细胞外基质,细胞基本铺满整个支架。研究发现,PLGA的组成对支架力学性能、降解性能和生物学性能有细小但显著的影响,这将对组织构建选用PLGA支架材料提供有益的帮助。

施万细胞和神经干细胞在PLGA支架中共培养的扫描电镜观察

目的扫描电镜观察施万细胞和神经干细胞在生物可降解材料(乙交酯-丙交酯)共聚物(Poly(lactide-co-glycolide acid),PLGA)支架中的生长状态,探讨施万细胞、神经干细胞与 PLGA取向支架的细胞亲和性。方法体外培养大鼠神经干细胞和施万细胞,待细胞生长良好,移植接种至PLGA支架上,培养9d后行扫描电镜观察。结果施万细胞与神经干细胞在PLGA支架表面贴附,形态正常,生长良好。迁出神经球的神经干细胞分化成多种形态的细胞紧贴PLGA表面, 部分细胞形态类似神经细胞。结论施万细胞和神经干细胞在PLGA支架中生长良好,PLGA对施万细胞及神经干细胞具有良好的细胞亲和性。

胎儿骨髓间充质干细胞复合PLGA支架的形态学观察

目的探讨胎儿骨髓间充质干细胞(fetalbonemarrowmesenchymalstemcells,fBMSCs)与低热高压法制作的聚丙交酯-乙交酯(PLGA)支架材料复合培养,构建组织工程化骨的可行性。方法预制PLGA支架材料,取5月胎儿肱骨和股骨骨髓,用单核细胞分离液分离fBMSCs,含双抗的低糖DMEM原代和传代培养,倒置显微镜下观察细胞生物学特性,用FITC标记的抗CD105、CD44和用PE标记的抗CD34、CD29对第4代细胞进行流式细胞鉴定,并与PLGA支架材料复合培养1周后行扫描电镜观察。结果原代及传代培养的fBMSCs增殖较迅速,第4代CD105阳性细胞占84.08%,CD29阳性细胞占88.77%,CD44阳性细胞占89.53%。复合PLGA支架材料细胞生长状态良好。结论骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells,BMSCs)是骨组织工程适宜的种子细胞,与低热高压制作的PLGA支架材料复合可体外构建组织工程骨。

转基因细胞片复合PLGA支架修复兔软骨缺损的研究

细胞片技术是应用组织工程方法使培养细胞从培养表面分离而形成含有细胞外基质的一层完整片状结构,弥补了传统组织工程技术的不足,是获取种子细胞以及对种子细胞进行转移的一项新技术。为探讨体外生长分化因子-5(GDF5)基因转染修饰的BMSCs细胞片与GDF5转基因BMSCs负载的PLGA支架形成的共聚物修复兔甲状软骨缺损的效果,实验通过腺病毒转染GDF5基因至四代兔BMSCs,温度敏感性培养皿制备GDF5转基因细胞片并与负载有转染GDF5基因BMSCs的PLGA支架复合,移植至同种兔甲状软骨缺损处,分别于术后4、8周行大体观察和组织学检测其修复效果。实验分3组:(A)转基因细胞片包裹负载有转基因BMSCs的PLGA支架组;(B)负载有转基因BMSCs的PLGA支架组;(C)负载BMSCs的PLGA支架组。结果显示,体外成功收获了完整的GDF5转基因细胞片,Real time PCR检测到GDF5 mRNA的表达,行大体组织的II型胶原免疫组化和阿利新蓝染色显示:A组和B组均表达II型胶原和糖胺聚糖(GAG),但A组表达高于B组,有统计学意义(P<0.05)。由此可得,转基因细胞片包裹负载转基因BMSCs PLGA支架较传统转基因BMSCs负载PLGA支架方法具有更加优越的成软骨能力,能更有效地促进软骨缺损的修复。

PLGA多孔支架降解与成骨细胞相互作用的影响

研究聚丙交酯-乙交酯(PLGA)多孔支架降解和大鼠股骨成骨细胞生理活性之间的相互影响.将大鼠股骨成骨细胞接种于PLGA多孔支架上,观察4周降解时间内成骨细胞增殖活性、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙浓度的变化以及PLGA相对分子质量损失、拉伸性能和压缩性能的变化.实验结果表明,支架降解初期,成骨细胞增殖活性较高,ALP活性和分泌钙的浓度较低;支架降解中后期,细胞增殖速度明显减慢,ALP活性和分泌钙的浓度明显下降.接种有细胞的支架降解过程中相对分子质量减小的速度快于对照组,力学拉伸强度和压缩杨氏模量低于对照组.支架材料中后期降解对细胞产生的影响大于降解初期,细胞附着于支架的生理活动加快了支架降解速度.

独活寄生汤含药血清对PLGA/Fibrin复合支架培养兔髓核细胞代谢影响的研究

目的探讨独活寄生汤含药血清对兔髓核细胞在PLGA/Fibrin复合支架培养代谢的影响。方法应用冻干法制备PLGA/Fibrin支架培养兔髓核细胞,按照不同浓度独活寄生汤含药血清分为A组(100μg/ml)、B组(200μg/ml)、C组(500μg/ml)及D组(空白对照)。通过MTT分析细胞增殖分化,DMMB法检测硫酸糖胺多糖(GAG),qRT-PCR检测COLⅡ、aggrecan差异,组织学观察髓核细胞在PLGA/Fibrin复合支架微孔环境生长形态学改变。结果培养1、7及14d后A、B、C3组髓核细胞活性、GAG水平、COLⅡ及Aggrecan mRNA表达均高于D组,且随着独活寄生汤含药血清浓度递增,细胞活性及基质表达有显著增加。培养2周后HE染色显示A、B、C3组较D组微孔支架吸附、积聚更多髓核细胞生长。结论PLGA/Fibrin复合支架能满足兔髓核细胞的黏附、伸展及繁殖要求,并为维持细胞的体外增殖和代谢活动提供适宜的微环境。独活寄生汤能够更好提高髓核细胞分化增殖能力,促进细胞基质分泌,从而减缓了椎间盘的退变。

低氧环境下PLGA/胶原纤维支架对小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成肌腱分化影响

目的探讨低氧环境下PLGA/胶原纤维支架对小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)增殖及成肌腱分化的影响。方法利用静电纺丝技术制作出30组PLGA/胶原纤维支架,正常条件下培养的mBMSCs为正常对照组;以3%O2,5%CO2,92%N2建立细胞低氧模型,在低氧环境下培养mBMSCs为低氧对照组,mBMSCs种植在PLGA/胶原纤维支架为低氧支架实验组,各组均进行成肌腱分化诱导实验14 d。CCK-8实验检测3 d、5 d、7 d各组mBMSCs增殖的吸光度值,ELISA实验检测各组mBMSCs上清液肌腱细胞标志性蛋白Tenomodulin和Scleraxis含量。结果在3 d、5 d、7 d观察点内,正常对照组、低氧对照组、低氧支架实验组mBMSCs吸光度值差异有统计学意义(P<0.05),第3 d、5 d、7 d观察点内,低氧对照组mBMSCs吸光度值均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与低氧对照组相比,低氧支架实验组3 d、5 d、7 d吸光度A值均分别增高,差异有统计学意义(P<0.01)。在细胞低氧环境下,低氧支架实验组Tenomodulin蛋白(4.526±0.002)μmol/L和Scleraxis蛋白(3.752±0.004)μmol/L含量高于低氧对照组Tenomodulin蛋白(2.831±0.023)μmol/L和Scleraxis蛋白(2.457±0.032)μmol/L,低氧对照组Tenomodulin蛋白(2.831±0.023)μmol/L和Scleraxis蛋白(2.457±0.032)μmol/L含量高于正常对照组Tenomodulin蛋白(1.542±0.071)μmol/L和Scleraxis蛋白(1.136±0.056)μmol/L,3组对比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低氧环境下PLGA/胶原纤维支架可有效促进mBMSCs增殖和成肌腱分化。

不同浓度人源性抗菌肽LL-37/PLGA/β-TCP复合支架对兔骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响

目的:研究不同浓度人源性抗菌肽LL-37/聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)/β-磷酸三钙(β-TCP)复合支架对于兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖、分化的影响。方法:制备LL-37/PLGA/β-TCP复合支架材料,按LL-37浓度分为0、1、5、10μmol/L组,另设置空白rBMSCs培养基为N组,每组三个培养皿,细胞密度为5×10^5个/皿。扫描电镜下观察不同浓度LL-37/PLGA/β-TCP复合支架形态。采用CCK-8检查方法检测各组干预rBMSCs 0、24、48、72、96、120 h后rBMSCs细胞增殖活力。干预rBMSCs 24 h后,采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白-1(BMP-1)及骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的mRNA相对表达量。干预rBMSCs 24 h后,采用ELISA检测各组ALP、BMP-1及BMP-7的蛋白水平。每个实验独立重复三次。结果:LL-37/PLGA/β-TCP复合支架材料随着LL-37浓度增加而呈现多孔、细胞吸附增多的趋势,促进细胞贴附生长。干预24 h后,10μmol/L组细胞增殖能力明显高于N组(P<0.05);随着干预时间延长,1、5、10μmol/L组均对rBMSCs有促进增殖作用,且呈浓度依赖作用。1、5、10μmol/L组ALP、BMP-1及BMP-7的mRNA相对表达量与蛋白表达水平均高于N组(P<0.05);1、5、10μmol/L组ALP、BMP-1及BMP-7的mRNA相对表达量与蛋白表达水平均呈高表达,且呈浓度依赖。结论:LL-37/PLGA/β-TCP复合支架可以显著促进rBMSCs增殖与分化,是一种潜在的骨组织工程支架。

聚—消旋乳酸—乙醇酸涂层支架置入小型猪冠状动脉后损伤处愈合过程的观察

目的 :了解聚—消旋乳酸—乙醇酸 (PLGA)涂层支架置入冠状动脉后损伤处的愈合过程。方法 :用摩尔比 60∶40的消旋乳酸与乙醇酸共混聚合浸涂Dragon支架制成PLGA涂层支架作为涂层组 ,Dragon支架作为对照组 ,支架置入小型猪冠状动脉 ,7日期与 1个月期各 8只猪 ,每只置入两枚支架。支架置入前、后、终点时行冠状动脉造影 ,处死动物后分离取出支架置入段冠状动脉 ,固定并制备标本行扫描电子显微镜 (SEM )观察与组织学检查。结果 :7日期 1只于支架置入右冠状动脉后 3h、左冠状动脉前降支后 1 5h时死亡 ,组织学示损伤后 1 5h已经有血细胞附着 ,3h见到纤维素附着。所有支架置入成功。SEM示 7日期两组均完全内皮化 ,制备标本时撕裂处见内皮下为纤维素。组织学示 7日期对照组 2支、涂层组 1支支架血管段形成血栓 ;7日期内膜组织成份主要为附着的纤维素 ,偶见到平滑肌细胞、纤维母细胞 ,表面为一层内皮细胞 ,两组间无差异 ;1个月期内膜组分主要为纤维素样肌性组织及细胞外基质 ,内膜增生的程度两组间无差异。各组 1个月期内膜均较 7日期的明显增厚。结论 :冠状动脉损伤 +支架置入后的愈合过程为 ,血小板附着于损伤处→纤维素附着→内皮细胞与中层平滑肌细胞移行、增生 ,内膜增生。纤维素附着可能是内皮化的基础。

热致相分离法制备聚(乳酸-乙醇酸)/羟基磷灰石复合骨组织工程支架材料的生物相容性

目的:观察热致相分离方法制备的聚(乳酸-乙醇酸)/羟基磷灰石复合骨组织工程支架的生物相容性,为其临床应用提供生物学依据。方法:①采用热致相分离法制备聚(乳酸-乙醇酸)/羟基磷灰石复合组织工程支架,用扫描电镜观察支架的微观形貌,应用比重瓶法测定支架的孔隙率。②将兔骨髓基质细胞与多孔支架进行体外联合培养,观察和测定细胞在支架上的黏附率和生长情况。③将支架植入兔背部皮下组织,观察活体情况,并于第4周麻醉后处死动物,剖开植入材料部分肌肉,分别用肉眼和苏木精-伊红染色切片观察肌肉组织周围有无明显的炎症反应、有无组织生长。结果:①支架的微观结构和孔隙率:支架的表面和内部都有着较均匀的孔径分布,孔径在100～150μm,孔隙呈近圆形,孔壁上还存在着很多小孔,孔隙之间有着较好的连通性,羟基磷灰石掺量在5%时候复合支架的孔隙率能达到80%以上。②细胞黏附情况:细胞能在复合支架上黏附、增殖,4h后材料的平均黏附率达到41.9%,体外培养7d后,细胞在支架孔隙内黏附铺展。③体内植入实验结果:材料植入体内4周后取出,肌肉组织无明显的炎症反应,表现出很好的组织相容性。结论:运用热致相分离的方法制备的聚(乳酸-乙醇酸)/羟基磷灰石复合骨组织工程支架孔径大小适当、孔隙率高,材料无明显毒性,具有较好的细胞亲和性和良好的生物相容性,具备了临床应用的前提。

质粒修饰BMSC联合纳米支架促进软骨缺损修复的相关研究

目的探究慢病毒介导聚蛋白多糖(Aggrecan)过表达质粒转染骨髓间充质干细胞联合Gelatin/PLGA纳米纤维多孔支架向软骨细胞转化及软骨缺损修复的作用效果。方法构建慢病毒聚蛋白多糖过表达载体,培养骨髓间充质干细胞,构建兔模型软骨缺损模型,实验组造模后植入Gelatin/PLGA三维支架+转染聚蛋白多糖过表达载体骨髓间充质干细胞复合物;阴性对照组造模后植入Gelatin/PLGA三维支架+未转染骨髓间充质干细胞复合物;模型组造模后加入生理盐水处理。体外实验利用HE染色和免疫组织化学染色检测骨髓间充质干细胞联合Gelatin/PLGA纳米纤维多孔支架的联合培养体系向软骨细胞转化中聚蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白的表达。构建兔膝关节软骨缺损模型,HE染色和免疫组织化学分析复合支架材料对软骨缺损的修复效果。结果 a)实验组(Gelatin/PLGA纳米纤维多孔支架+转染Aggrecan过表达载体骨髓间充质干细胞复合物)中支架表面黏附的细胞与对照组(Gelatin/PLGA纳米纤维多孔支架+未转染骨髓间充质干细胞)相比,细胞数明显增多;b)动物模型大体观察结果显示,实验组的修复效果要明显优于阴性对照组;c)动物模型HE染色结果显示,阴性对照组多为纤维性修复,而实验组多为细胞性修复;d)免疫组织化学染色结果显示,实验组修复软骨组织中Aggrecan和Ⅱ型胶原含量要明显优于阴性对照组。结论 Gelatin/PLGA三维支架加转染Aggrecan过表达载体骨髓间充质干细胞复合物可以促进BMSC向软骨细胞的分化,并且分泌更多的含Aggrecan和Ⅱ型胶原成分的细胞外基质,从而发挥其促进软骨缺损修复的作用。

组织工程化软骨形成的细胞浓度选择

目的探讨兔组织工程化软骨形成的合适细胞浓度。方法分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后以1,2,4,6,8,10×107/ml 6种不同浓度种植到PLGA支架上。在体外培养软骨细胞支架复合物,4周终止培养,进行HE、Masson组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。结果体外培养的软骨组织,与正常软骨组织有相似的组织学特性,形成软骨组织适宜细胞浓度为4×107/ml。结论体外形成兔软骨组织的适宜细胞接种浓度为4×107/ml。

平面和三维培养对兔髓核细胞增殖和基质合成影响的实验研究

目的:探讨兔髓核细胞平面和三维培养对其增殖及基质合成的影响,为椎间盘组织工程寻找一种新的种子细胞获取方法。方法:体外培养兔髓核细胞,分为平面培养组和PLGA支架三维培养组两组,利用倒置显微镜、扫描电镜进行髓核细胞形态学观察,MTT法测定各组髓核细胞增殖情况,HE染色、免疫组化分析髓核细胞Ⅱ型胶原的表达,阿利新兰染色法测定培养液中髓核细胞合成的糖胺聚糖(GAG)含量。结果:经过两周的培养,两组髓核细胞均能够增殖;与平面培养组相比,三维培养组细胞增殖率、Ⅱ型胶原表达量、GAG合成量均增高(均P<0.01)。结论:髓核细胞能够与PLGA支架很好地黏附并增殖;PLGA支架三维培养较平面培养能促进髓核细胞增殖,提高Ⅱ型胶原和GAG的合成量,可作为椎间盘组织工程种子细胞获取的一种新方法。