铜肽PLGA纳米粒子对黑素细胞黑色素合成作用的研究

铜肽(GHK-Cu)是甘氨酰组氨酰赖氨酸三肽与铜的络合物,具有多种生物活性.以乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)为载药材料制备铜肽PLGA纳米粒子,并研究其对黑素细胞酪氨酸酶活性和黑色素合成的作用.实验结果表明:铜肽对蘑菇酪氨酸酶具有激活作用;PLGA纳米粒子中铜肽的包封率为40.12%,粒径大小为100～200nm,在透射电镜下为大小均匀的圆形粒子.铜肽PLGA纳米粒子可以将铜肽成功导入黑色素细胞内,激活酪氨酸酶的活性并增加黑色素的含量.研究结果为研究铜肽PLGA纳米粒子对色素减退或色素脱失性皮肤病的治疗作用提供了初步的实验依据.

载GOD/Fe3O4的PLGA纳米粒子对视网膜母细胞瘤疗效的体外研究

目的探讨一种新型的包裹葡萄糖氧化酶(GOD)/超顺磁性四氧化三铁纳米粒(Fe3O4Nps)的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒子对视网膜母细胞瘤(RB)体外治疗的效果。方法利用双乳化法制备包裹GOD/Fe3O4的PLGA纳米粒子,对其粒径大小、电位、外部形态和内部结构等相关表征进行检测。依据包含的不同纳米粒子设立空白对照组、Fe3O4/PLGA(PF)组、GOD/PLGA(PG)组、GOD/Fe3O4/PLGA(PFG)组;设立不同浓度(0、0.0625、0.125、0.25μg/ml)的PFG纳米粒子组,以验证其毒性作用。检测不同纳米粒子组与Y79细胞共孵育后对Y79细胞的毒性作用、存活情况及活性氧产生情况。结果成功制备出包裹了GOD/Fe3O4的PLGA纳米粒子,其平均粒径为299.3 nm,形态均一呈圆形。纳米粒子与Y79细胞共孵育后被Y79细胞吞噬,产生大量活性氧;细胞毒性实验结果显示,PFG组Y79细胞存活率[(53.648±2.565)%]明显低于空白对照组[(100.028±4.491)%]、PF组[(97.782±17.520)%]、PG组[(87.438±3.537)%](F=21.226,P<0.01);0.25μg/ml的PFG纳米粒子组Y79细胞存活率[(51.770±1.529)%]明显低于对照组[(100.000±5.021)%]、0.0625μg/ml组[(85.723±6.903)%]、0.125μg/ml组[(74.535±8.282)%](F=34.593,P<0.01)。激光共聚焦显微镜下观察,结果显示PFG组Y79细胞大量死亡。结论成功制备了包裹GOD/Fe3O4的新型PLGA纳米粒子;该纳米粒子具有良好的活性氧产生能力,能杀死Y79肿瘤细胞,有望成为一种治疗RB的新方法。

鼠尾静脉注射装载脑抗原的纳米粒子治疗手术脑损伤的实验研究

目的:研究装载髓鞘碱性蛋白(MBP)的纳米粒子的物理、化学特性,探讨鼠尾静脉注射装载MBP的纳米粒子诱导免疫耐受治疗手术脑损伤(SBI)继发性炎症的疗效。方法:①采用乳化溶剂挥发法合成含有支链普鲁兰多糖的聚乙烯醇(PVA)修饰聚-(β氨基酯)(PBAE)/聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)芯的纳米粒子;②30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、对照组及实验组,每组10只。假手术组只开骨窗,保持硬脑膜的完整;对照组和实验组建立SBI模型,对照组经鼠尾静脉注射装载生理盐水(NS)的纳米粒子,实验组经鼠尾静脉注射装载同种异体MBP的纳米粒子。分别于SBI后1、7、14、21 d通过ELISA检测外周血血清中IL-2、IL-4水平,流式细胞术检测外周血CD4/^(+)CD8^(+)T细胞比值,进行改良神经功能缺陷评分(MNSS)。SBI后第21天以脑组织切片免疫组织化学染色法检测神经小胶质细胞的表面标记物离子钙接头分子(Iba-1)表达水平。结果:①成功制备装载MBP或NS的纳米粒子,平均直径分别为266.4 nm和287.5 nm,平均Zeta电位值分别为14.2 mV和9.7 mV,电子显微镜观察具有典型的“核-壳结构”;②术后第7、14、21天,实验组MNSS低于对照组,对照组高于假手术组(P<0.05)。术后第7、14天,假手术组和实验组IL-2浓度低于对照组(P<0.05),假手术组和对照组IL-4浓度低于实验组(P<0.05)。术后第7、14、21天,假手术组和实验组CD4/^(+)CD8^(+)T细胞低于对照组(P<0.05)。术后21 d大鼠脑组织切片Iba-1表达阳性的细胞显微镜下呈棕黄色,实验组Iba-1表达量较对照组明显降低。结论:①本实验设计的新型纳米粒子对MBP具有高效和稳定的装载性;②鼠尾静脉注射装载MBP的纳米粒子能诱导机体产生免疫耐受,降低SBI术后继发性炎症反应及脑神经功能缺陷,可激活小胶质细胞从而保护脑神经细胞。