miR-10b调控PLK1蛋白对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的作用

目的探讨微小核糖核酸-10b(miR-10b)调控PLK1蛋白对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的作用。方法检测miR-10b鼻咽癌组织和细胞株中的表达水平,miR-10b和PLK1蛋白之间的关系; miR-10b对鼻咽癌细胞增殖和细胞周期影响; miR-10b对裸鼠移植瘤中PLK1表达的影响。结果鼻咽癌肿瘤组织中miR-10b的表达水平低于正常组织,且在CNE2细胞株中表达水平最低(P <0. 05);抑制miR-10b后PLK1蛋白的表达水平上调,增加miR-10b的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖(P <0. 05)。miR-10b-mimic组G1和M期细胞比例减少,S期和G2期的细胞比例增加; miR-10b组裸鼠肿瘤平均体积和平均质量均高于对照组(P <0. 05),miR-10b-mimic组裸鼠肿瘤中ki67和PCNA表达水平较强。结论 miR-10b靶向PLK1对鼻咽癌细胞增殖行为有一定的抑制作用,miR-10b在人鼻咽癌的发生发展过程中扮演着重要角色。

宫颈癌中Plk1蛋白表达与疾病进展及患者远期生存率的关系

目的探讨宫颈癌组织中polo-like kinase 1(Plk 1)蛋白的表达与肿瘤发生发展、远期生存率的关系。方法选取80例宫颈癌组织标本(宫颈癌组)、宫颈上皮瘤组织作为CIN组(40例)、正常宫颈组织标本40例(对照组),收集时间2011年1月-2012年12月,采用免疫组化染色检测3组标本中的Plk1蛋白表达情况,分析Plk1蛋白与宫颈癌发生发展、远期生存率的关系。结果宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达率(73.75%)显著高于CIN组(45.00%)、对照组(12.50%),差异具有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达与分化程度、国际妇产联盟(FIGO)分期、是否发生淋巴结转移、间质浸润程度、是否发生脉管浸润具有显著的统计学意义(P<0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达与患者肿瘤直径、年龄的关系无统计学意义(P>0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达患者的3年生存率76.27%与阴性表达组的85.71%差异无统计学意义(P>0.05);宫颈癌组的Plk1蛋白阳性表达患者的5年生存率40.68%显著低于阴性表达组的66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与CIN组织和正常宫颈组织相比,Plk1蛋白在宫颈癌中表达程度显著上调,并且与肿瘤的进展、患者远期生存密切相关。

冬凌草甲素上调PLK1对Jurkat细胞细胞周期的影响

目的·探索冬凌草甲素对Jurkat细胞增殖的抑制作用及其机制。方法·采用CCK-8法、流式细胞术、瑞士吉姆萨染色、蛋白质印迹法,检测冬凌草甲素处理后Jurkat细胞的增殖情况、细胞周期、凋亡情况及有丝分裂相关蛋白激酶表达情况。蛋白质印迹法检测冬凌草甲素处理后,Jurkat细胞中Polo样蛋白激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)下游蛋白的磷酸化水平。通过计算机模拟、免疫沉淀、蛋白质印迹法、细胞热力学迁移实验方法研究冬凌草甲素与PLK1的结合方式及结合位点。组间比较采用t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果·冬凌草甲素通过上调PLK1蛋白含量并促进其激酶活性,从而诱导Jurkat细胞发生G2/M期阻滞;冬凌草甲素可与PLK1蛋白直接结合抑制其通过泛素蛋白酶体途径降解;如PLK1蛋白的Cys67或Cys133氨基酸残基发生突变则抑制冬凌草甲素与其直接结合,且抑制冬凌草甲素对PLK1蛋白的稳定作用。结论·冬凌草甲素通过直接结合PLK1蛋白抑制其泛素化修饰及降解,促进其活性,诱导Jurkat细胞发生G2/M期阻滞;PLK1蛋白的Cys67和Cys133位点是蛋白与冬凌草甲素结合的关键位点。

辽东楤木叶总皂苷对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用及机制研究

目的研究辽东楤木叶总皂苷(ETS)对HT-29细胞生长的抑制作用及作用机制。方法采用MTT法检测ETS对HT-29细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测ETS对HT-29细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测ETS对HT-29细胞PLK1蛋白表达的影响。结果 ETS对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,IC50值为39.62 mg·L-1。在10～40 mg·L-1剂量作用下,可剂量依赖性诱导HT-29细胞凋亡。ETS主要将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而可剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖。ETS可明显抑制HT-29细胞PLK1蛋白的表达。结论 ETS体外可明显抑制HT-29细胞的生长,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞、细胞凋亡及抑制PLK1蛋白表达有关。

BI2536抑制肺癌A549细胞生长及其对Plkl蛋白表达影响的体外研究

目的研究BI2536对肺癌细胞株A549体外生长的影响，探讨BI2536抑制肺癌细胞的机制。方法体外培养肺癌A549细胞，不同浓度BI2536作用下，MTI＂检测肺癌细胞增殖抑制，倒置显微镜观察肺癌细胞生长，westerllblot检测肺癌细胞中Plkl蛋白表达，流式细胞仪检测肺癌细胞的周期分布和凋亡情况。结果不同浓度（5-60μg/L）的BI2536作用48h，细胞增殖抑制率最高可达（46．0±1．9）％。光镜下可见细胞形态改变，生长受抑，有丝分裂受阻。药物浓度达到40μg/L时，Plkl蛋白表达受到完全抑制，G2／M期细胞达到55．6％，凋亡率达23．26％。结论BI2536通过抑制肺癌细胞株A549中Plkl蛋白表达，使肺癌细胞发生G2／M期阻滞，引起细胞凋亡，起到抑制肺癌细胞增殖的作用。