INTRATUMORAL DNA PLOID HETEROGENEITY IN ESOPHAGEAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA

In order to investigate the intratumoral DNA ploid heterogeneity (PH) in esophageal squamous cell carcinoma and its clinical-pathological significance, nuclear DNA ploidy of 80 cases of squamous cell carcinoma of the esophagus were determined with multiple samples removed from the same tumor, using a flow cytometry (FCM) technique. 240 samples for flow cytimetric DNA analysis were taken from 3 different parts if each tumor of 80 cases of specimens. DNA measurement was were present in a tumor or the variation in DI value among 3 peaks in each tumor was greater than 10%. Further more at last, comparison or clinical-pathological characteristics was performed between PHTs and N-PHT which has a similar ploid pattern in 3 sampling spots of each tumor (non PHT). DNA indices ranged from 0.77～1.74, and the incidence of DNA AN was 88. 8% (71/80) in this series. Of 80 cases, 38 cases (47. 5%, 38/80) showed intratumoral heterogeneity in DNA ploidy. The heterogeneity in DNA ploidy was related to the extent of wall penetration by the tumor,the incidence of lymph node metastasis and the patients's prognosis, not to histological grades and size of the tumor. There is PH phenomena in esophageal squmous cell carcinoma, and DNA PH may be a more exact indicator in reflecting the biological chatacteristics of the tumor and patient's prognosis.

ULTRASTRUCTURAL CHARACTERISTICS OF NEPHROBLASTOMAS AND THEIR RELATION TO DNA PLOID

Fifty-one cases of nephroblastoma were pathologically studied by light and electron microscopy as well as microspectrophotometry. Under light and electron microscope, the tumor appeared to be carcinosarcoma structurally, consisting of epithelial, sarcomatous and undlfferentiated tumor cells. Their ultrastructural feature was similar to that of renal tubular epithelial cells and tibroblast. It could differentially be diagnosed from renal metoblastic tumors by electron microscopy when the tumor was mainly composed of sarcomatous cells. Microspectrophotometer measurement showed an Increased mean nuclear DNA content (DI>1. 04), belonging to aneuplold tumor, which together with polyploid cells, serving as one of the Important characteristics of malignant tumors. In addition, the poorer the tumor differentiation the higher was the DNA content of the tumor cells, suggesting that the measurement of nuclear DNA of tumor cells might also serve as one of signs to acertain the degree of differentiation and malignant of nephroblastomas with more preciseneas than general morphological examinations.

Value of DNA ploid detection for the evaluation of cancer cell proliferation and invasion activity in cervical cancer

Objective: To study the value of DNA ploid detection for the evaluation of cancer cell proliferation and invasion activity in cervical cancer. Methods: Patients with cervical cancer who underwent surgical resection in Yan'an University Affiliated Hospital between March 2015 and May 2017 were selected as cervical cancer group of the research, and patients with benign lesions who underwent hysterectomy in Yan'an University Affiliated Hospital during the same period were selected as the control group of the research. Before operation, cervical exfoliated cytology was taken for DNA ploid detection;before operation, the cervical tissue was taken to determine the expression of proliferation genes and invasion genes. Results: The number of exfoliated cells with abnormal DNA ploid in cervical cancer group was significantly higher than that in control group;Id-1, Ki-67, TET1, S6K1, CatL and ILK mRNA expression in cervical cancer tissue of cervical cancer group were significantly higher than those of control group whereas HSG, MCPH1, p16, TIMP1 and TIMP2 mRNA expression were significantly lower than those of control group;Id-1, Ki-67, TET1, S6K1, CatL and ILK mRNA expression in cervical cancer tissue with 3 exfoliated cells with abnormal DNA ploid were significantly higher than those in cervical cancer tissue with 1-2 exfoliated cells with abnormal DNA ploid whereas HSG, MCPH1, p16, TIMP1 and TIMP2 mRNA expression were significantly lower than those in cervical cancer tissue with 1-2 exfoliated cells with abnormal DNA ploid. Conclusion: DNA ploid detection can be used to evaluate the proliferation and invasion of cancer cells in cervical cancer.

用流式细胞仪检测活体鲍倍性

分别取皱纹盘鲍 (Haliotisdiscushannai)足肌和血液制样 ,经DAPI染色后 ,用PartecPAS -Ⅲ型流式细胞仪测定其倍性 ,试验证明三倍体鲍的DNA相对含量是二倍体的 1 5倍 ,切足法和抽取血液法两种制样方法均能得到满意结果 。

日本沼虾染色体倍性检测技术的研究

用流式细胞仪分别对日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)正常二倍体的体细胞和四倍阶段体胚胎的DNA相对含量和细胞频率进行了测定,以研究日本沼虾染色体倍性检测技术。以日本沼虾正常二倍体的体细胞液进样所得直方图为标准,用对细胞松弛素B人工诱导的日本沼虾四倍体胚胎进行DNA相对含量和细胞频率的测定,测试结果以直方图表示,并用染色体涂片镜检结果进行倍性核对。结果表明,日本沼虾二倍体和四倍体的DNA相对含量有显著差异,四倍体日本沼虾的DNA相对含量是二倍体的2倍。用流式细胞仪法检测日本沼虾倍性,方法简单、测试速度快、结果可靠。

甜叶菊同源四倍体离体诱导及鉴定

用不同浓度秋水仙素溶液处理甜叶菊不定芽,诱导同源四倍体,并进行解剖学、染色体鉴定和流式细胞仪鉴定倍性。结果表明:(1)用0.20%的秋水仙素溶液浸泡甜叶菊不定芽12h,同源四倍体诱导率最高,可达32.14%。(2)同源四倍体植株与二倍体(对照)相比,其气孔、叶片等均表现巨大性,且叶片变厚、叶色浓绿、叶片皱缩。(3)对照植株染色体2n=2x=22,四倍体植株染色体2n=4x=44;流式细胞仪倍性鉴定结果显示,对照DNA相对含量为100,四倍体DNA相对含量为200。(4)该研究共鉴定出48株甜叶菊同源四倍体植株,为进行倍性植株的诱导奠定了技术基础,为进一步开展甜叶菊同源四倍体新品种的选育提供了实验材料。

从叶片解剖结构探讨云南山茶不同倍性的耐旱潜力

以云南山茶二倍体、四倍体和六倍体植株的成熟叶片为材料,采用石蜡制片法和光学显微技术测定了叶片角质层厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、叶片厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度、栅海比、叶片结构紧密度和叶片结构疏松度等耐旱相关的解剖结构特征参数,并进行统计分析。结果表明,所研究的9个指标在3个倍性间均表现出显著或极显著的差异,通过多重比较和主成分分析,最终选出最具代表性的5项指标进行隶属函数值计算及耐旱性综合评价,得出不同倍性间的耐旱潜力的大小顺序为四倍体>二倍体>六倍体,所得结果可为云南山茶的定向育种提供依据。

硬粒小麦-节节麦人工合成小麦的穗发芽抗性研究

为了发掘来自节节麦的抗穗发芽基因资源,利用具有染色体自然加倍特性的硬粒小麦栽培种(Triticum durumL cv.Langdon,2n=4x=28,AABB)与节节麦(Aegilops tauschiiCosson.,2n=2x=14,DD)杂交,经染色体天然加倍合成了4份新六倍体小麦SHW-Z1、SHW-Z2、SHW-Z3和SHW-Z4(TriticumaestivumL.,2n=6x=42,AABBDD)。通过对这4份材料不同灌浆期的不同发芽处理研究表明,节节麦抗穗发芽特性得到表达,4份材料平均穗发芽率分别仅为1.75%,0.31%,1.09%和0.17%。与穗发芽抗性极强的合成六倍体小麦RSP相比,亲本为节节麦As65的合成小麦SHW-Z2和SHW-Z4具有更强的穗发芽抗性。4份合成六倍体小麦抗穗发芽的因素主要来自穗部与种子的抑制,颖壳内含物的化学抑制作用较弱。

白花香莲解毒颗粒对HBV全基因组1.3倍体细胞模型病毒复制与表达的影响

目的:观察白花香莲解毒颗粒对HBV全基因组1. 3倍体Hep G2细胞模型(HBV 1. 3P)病毒复制与表达的影响。方法:按照白花香莲解毒颗粒最优提取工艺制备稠膏,并使用无菌纯水配制为0. 1g稠膏/ml母液,滤纸及0. 45μM、0. 22μM孔径PVDF超滤膜依次过滤后,应用MEM完全培养基稀释为8个浓度梯度的细胞干预液。CCK-8法测定细胞干预液对HBV 1. 3P增殖的抑制率; q PCR法检测干预24h、48h后细胞上清液中HBV DNA水平;化学发光法检测细胞上清液中HBs Ag、HBeAg表达量;免疫荧光法测定细胞内HBs Ag表达强度。结果:(1)白花香莲解毒颗粒的去乙酰车叶草酸甲酯含量为1. 23mg/g。(2)CCK-8法的最佳检测时间是加入试剂后2h,适宜细胞数范围是2×103～1. 2×104个。在0. 04～0. 625mg/ml范围内白花香莲解毒颗粒对HBV 1. 3P增殖无明显抑制作用;在1. 25～5mg/ml范围内则会显著抑制HBV 1. 3P增殖。(3)0. 625mg/ml是白花香莲解毒颗粒的最佳药物浓度,其干预48h HBV DNA的抑制率达(41. 86±5. 35)%,并能显著降低细胞上清液及细胞内HBs Ag、HBeAg的表达。结论:白花香莲解毒颗粒体外具能较强地抑制HBV复制及HBs Ag、HBeAg表达的生物活性。

樱桃矮化砧木‘吉塞拉6号’四倍体新种质Y1的培育

【目的】培育樱桃砧木新品种。【方法】以樱桃矮化砧木‘吉塞拉6号’为试材,采用自然授粉手段育成四倍体新种质Y1,采用流式细胞仪分析杂种后代的倍性,并对它的生物学性状、与甜樱桃品种嫁接亲合力进行了目测观察。【结果】吉塞拉5、6、7号在育性方面有差别,‘吉塞拉6号’为高度不育,结实率极低。随机抽取的33株‘吉塞拉6号’实生后代中,绝大多数为四倍体;Y1与甜樱桃品种的嫁接亲合性好,基本无小脚现象。【结论】采用自然授粉的三倍体‘吉塞拉6号’种子成功培育出300多个株系的新砧木类型,通过对随机选取的33个株系进行染色体倍性鉴定、性状观察,筛选出1个综合表现性状较好的四倍体种质Y1。

痰细胞学联合支气管镜DNA倍体检测对肺癌的诊断意义

目的探讨痰细胞学联合支气管镜DNA倍体检测对肺癌的诊断价值。方法 80例患者行痰细胞学、支气管镜DNA倍体检测。结果 54例确诊为肺癌,痰细胞学检测阳性率29.92%,支气管镜DNA倍体检测阳性率69.87%,两者联合检测阳性率为95.18%;DNA倍体分析与细胞学联合检测灵敏度为98.38%,明显高于DNA倍体分析91.85%及细胞学78.58%(P<0.05)。结论痰细胞学联合支气管镜DNA倍体检测能有效的提高肺癌检测的灵敏度。

二倍体鸭茅染色体加倍的研究

研究了秋水仙碱不同浓度(0.05%、0.2%、0.3%)、不同处理时间(1d、2d、3d)、种子不同萌芽阶段(芽长<0.5cm、1～2cm、>3cm)对二倍体鸭茅染色体加倍效果及生长发育的影响.结果表明,三个因素对诱变效果均有一定程度的影响,所有染色体加倍植株均为混倍体,即同一根尖细胞中二倍体和四倍体细胞共存;混倍体早期生长弱于二倍体,以后的生长发育及开花期形态特征二者几乎无差异.

c-erbB-2表达及DNA含量与乳腺癌组织学类型的相关性研究

目的：了解乳腺癌组织学类型与ｃ－ｅｒｂＢ－２表达和ＤＮＡ异倍体的关系。方法：用免疫组化法（ＬＳＡＢ），经典的Ｆｅｕｌｇｅｎ染色法及图像分析技术对８４例乳腺癌，２２例乳腺良性病变进行ｃ－ｅｒｂＢ－２免疫组化及ＤＮＡ含量检测。结果：（１）乳腺良性病变全部为整倍体，ｃ－ｅｒｂＢ－２表达阴性。乳腺癌异倍体７０．２％，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达率为３３％。（２）浸润性导管癌ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达率（４１．６％）、异倍体比例（７７％）均高于特殊类型浸润癌（９．６％和５４．８％）。而Ｐａｇｅｔ病阳性表达率和异倍体比例最高（分别为１００％和８０％）。（３）浸润性导管癌ｃ－ｅｒｂＢ－２表达率随合并导管原位癌成分或合并明显坏死而增高（Ｐ＜０．０５）。粉刺型占优势，其表达率高于非粉刺型（Ｐ＜０．０５）。（４）ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性肿瘤异倍体高于ｃ－ｅｒｂＢ－２阴性肿瘤异倍体（Ｐ＜０．０５）。结论：ｃ－ｅｒｂＢ－２激活和异倍体的出现主要与导管上皮细胞异型增生有关。

十六倍体三叶半夏品种特性的分析

利用三叶半夏悬浮细胞为材料,通过秋水仙素诱导后获得稳定的半夏多倍体株系。通过染色体鉴定、生理分析以及药典规定项目的测定,综合考察半夏多倍体株系的品种特性,评价其作为新品种的潜力。结果表明:优良半夏株系为八倍体三叶半夏,加倍后的半夏为染色体加倍的十六倍体半夏。与八倍体半夏相比,十六倍体半夏在形态学方面表现出植株矮壮,叶片变圆变厚,块茎增大的特点,细胞学方面表现出气孔密度降低,保卫细胞增大,叶绿体个数增多的现象。经过种植实验得出结论:十六倍体半夏生长期延长,抗逆性增强,夏季基本不倒苗,并且块茎个体均一,品质较好,总体产量增加。对十六倍体半夏块茎进行测定比较后发现,十六倍体半夏符合药典中规定的各项定性和定量指标规定。由此可见,通过半夏的单细胞进行多倍体的诱导是一种可行的方案,并且诱导得到的十六倍体为抗性增强、产量提高,且符合药典规定的半夏新品系。

流式细胞术检测免疫表型和分析DNA倍体对非霍奇金淋巴瘤患者的临床价值

目的:探讨流式细胞术免疫表型检测及DNA倍体分析对于非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者的临床价值。方法:收集2007年8月至2015年3月我院收治的NHL患者80例为研究对象,作为观察组。选取同时期收治的20例反应性淋巴结增生患者为对照组。应用流式细胞术检测免疫表型和分析DNA倍体。结果:观察组患者DNA异倍体检出率、DAN指数(DI)值和SPF均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NHL-Ⅰ、NHL-Ⅱ患者SPF、DI值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);NHL-Ⅲ和NHL-Ⅳ患者的SPF、DI值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。低度恶性组、中高恶性组患者SPF和DI值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);中高恶性组患者SPF和DI值与低度恶性组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:流式细胞术免疫表型检测并进行DNA倍体分析,通过DI和SPF水平,能够反映肿瘤增殖情况和患者病情的恶化程度、指导预后。

恶性肿瘤组织DNA倍体分类与细胞动力学的关系

目的 探讨恶性肿瘤患者肿瘤组织细胞DNA倍体类型与细胞动力学参数之间的关系。方法 采用流式细胞术对2 5 0 4例恶性肿瘤组织DNA含量进行了检测 ,对DNA倍体进行了分类 ,并分析了DNA倍体类型与细胞凋亡 (Apo)检出率及S期细胞比率 (SPF)的关系。结果 恶性肿瘤组织DNA倍体分型 :二倍体 (D ,473例 )、近二倍体 (ND ,49例 )、四倍体 (T ,3 0 7例 )、非整倍体 (AN ,10 40例 )和多异倍体 (M ,63 5例 )。后 4种统称为DNA异倍体 (H )共 2 0 3 1例。恶性肿瘤组织Apo检出率显著低于正常对照组 (P <0 .0 1) ,而SPF比率却显著高于正常对照组 (P <0 .0 1)。二倍体肿瘤组织Apo检出率显著高于异倍体肿瘤组织 (P <0 .0 1) ,SPF比率显著低于异倍体组织 (P <0 .0 1)。在恶性肿瘤组织中 ,含有不同数量异倍体克隆者、不同DNA倍体异质性者的Apo检出率和SPF比率均有显著性差异 (P <0 .0 1)。不同DI值的肿瘤组织其Apo检出率和SPF比率有明显不同。 结论 恶性肿瘤能导致肿瘤组织Apo水平显著降低 ,细胞增殖活性显著增加。而且这些变化与肿瘤组织倍体类型、DI值、DNA异倍体克隆数以及DNA倍体异质性等均有十分密切的关系。

DNA倍体检测对宫颈癌病灶中癌细胞增殖、侵袭活性的评估价值研究

目的:研究DNA倍体检测对宫颈癌病灶中癌细胞增殖、侵袭活性的评估价值。方法:选择在本院接受手术切除的宫颈癌患者作为研究的宫颈癌组,选择同期接受子宫切除术的良性病变患者作为研究的对照组。手术前,取宫颈脱落细胞并进行DNA倍体检测;手术前,取宫颈组织并测定增殖基因、侵袭基因的表达量。结果:宫颈癌组患者脱落细胞中DNA倍体异常的细胞数目显著高于对照组;宫颈癌组患者宫颈癌组织中Id-1、Ki-67、TET1、S6K1、CatL、ILK的mRNA表达量显著高于对照组,HSG、MCPH1、p16、TIMP1、TIMP2的mRNA表达量显著低于对照组;DNA倍体异常细胞数目≥3个的宫颈癌组织中Id-1、Ki-67、TET1、S6K1、CatL、ILK的mRNA表达量显著高于DNA倍体异常细胞数目1~2个的宫颈癌组织,HSG、MCPH1、p16、TIMP1、TIMP2的mRNA表达量显著低于DNA倍体异常细胞数目1~2个的宫颈癌组织。结论:DNA倍体检测对宫颈癌病灶中癌细胞增殖、侵袭的活性具有评估价值。

头颈部鳞癌抑癌基因nm23-H_1的表达、DNA倍体与淋巴结转移的关系

目的 :研究头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC)nm2 3 H1基因的表达、DNA含量与淋巴结转移的关系。方法 :选择 3 0例未经治疗的HNSCC患者术后新鲜肿瘤标本 ,应用免疫组化ABC技术和流式细胞术 (FCM )检测瘤细胞nm 2 3 -H1基因表达、异倍体 (aneuploid)和S期细胞比例 (S phasefraction ,SPF) ,探索这 3个参数与淋巴结转移之间的关系。结果 :nm 2 3 H1的阳性率为 60 % ,异倍体检出率为 66.7%。nm 2 3 H1表达、DNA倍体和SPF与淋巴结转移有关 (均为P <0 .0 1)。nm 2 3 H1表达与DNA倍体无关 (P >0 .0 5 ) ,nm 2 3 H1表达与SPF有关 (P <0 .0 5 )。结论 :对nm2 3 H1表达、DNA倍体和SPF的检测可预测HNSCC淋巴结转移趋势和预后 。

不同倍性苹果叶片叶绿素荧光参数分析

对不同倍性苹果嘎拉(二倍体)、4-9(四倍体)、富士(二倍体)、天星(四倍体)叶片的叶绿素荧光参数进行了测定分析。结果表明:四倍体苹果叶片的荧光参数(Fv,Fv/Fm,Fv/F0,Fm/F0)显著高于二倍体,因此四倍体苹果叶片相对于二倍体苹果叶片而言,具有更强的光系统活性、光能转化效率和电子传递效率,能将所吸收的光能更有效地转化为化学能。

连作对不同倍性芦笋植株生长和抗氧化酶活性的影响

以二倍体芦笋品种‘井冈701’和四倍体芦笋品种‘井冈红’为试材,在连作条件下研究芦笋植株株高、鲜质量和抗氧化酶活性及其在品种间的差异,分析连作对其植株生长和抗氧化酶活性的影响。结果表明:连作处理降低了‘井冈701’和‘井冈红’植株株高及地上部和根系鲜质量。与第一次连作相比,第二次连作显著降低了‘井冈701’植株株高、地上部和根系鲜质量。与首茬(CK)相比,连作处理使2个不同倍性芦笋品种叶片的PPO、SOD和POD活性增强,且‘井冈红’高于‘井冈701’。连作处理后,‘井冈红’根系的PAL、PPO和SOD活性高于‘井冈701’,仅POD活性低于‘井冈701’。可见,四倍体芦笋品种‘井冈红’对连作的耐受性强于二倍体芦笋品种‘井冈701’。该结果可为芦笋品种选育及生产上品种的选择提供科学依据。