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重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
1
作者
李伟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期1-5,共5页
PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结...
PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码ATG后插入到表达载体PET-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌内并用IPTG诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有SDS变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用DNA结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的DNA结合活性,这为进一步研究PLZF蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。
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关键词
plzf蛋白
锌指结构域
包涵体
凝胶迁移分析
原文传递
PLZF与哺乳动物雄性生殖干细胞的发育分化
被引量:
3
2
作者
宋文聪
华进联
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期825-832,共8页
早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类P...
早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类PLZF的是由673个氨基酸残基组成的转录抑制因子,属于蛋白质超家族.该超家族以N端的BTB/POZ(bric-à-brac,tramtrack,brad complex(BTB)/poxvirus zinc finger(POZ)domain)结构为特征.PLZF蛋白的BTB/POZ结构与个体发育、胚胎发生、染色体的重构等事件相关.近年发现,PLZF在哺乳动物雄性生殖干细胞(male germline stem cells,mGSCs)发育分化过程中也发挥重要作用.探讨PLZF的生物学功能和作用机制,将有助于理解其在mGSCs发育过程中的重要作用.本文就PLZF在维持mGSCs自我更新和在发育分化调控中的作用给予综述.
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关键词
早幼粒细胞白血病锌指
蛋白
(
plzf
)
雄性生殖干细胞
自我更新
发育
分化
哺乳动物
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职称材料
精原干细胞中Pten基因敲除小鼠模型的建立及初步的表型分析
3
作者
周炜
张迪
+2 位作者
于卓
查巍巍
冯立新
《实验动物与比较医学》
CAS
2014年第1期1-5,共5页
目的 建立稳定的精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,对表型进行初步观察,为研究Pten在精原干细胞中的作用及相关的机制奠定基础.方法 采用Cre/Loxp系统建立Pten在精原干细胞中条件性敲除的小鼠模型,以同窝正常雄鼠作为对照,通过解剖...
目的 建立稳定的精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,对表型进行初步观察,为研究Pten在精原干细胞中的作用及相关的机制奠定基础.方法 采用Cre/Loxp系统建立Pten在精原干细胞中条件性敲除的小鼠模型,以同窝正常雄鼠作为对照,通过解剖、HE染色等方法对小鼠的表型进行观察,并通过免疫荧光检测精原干细胞标记分子早幼粒细胞白血病锌指蛋白(Plzf)的表达并对免疫荧光染色中的阳性细胞进行统计.结果 与对照组相比,Pten敲除鼠在出生后出现发育迟缓现象,13d左右个体死亡,睾丸大小未受影响,但进一步的细胞计数统计发现Pten敲除后Plzf阳性细胞数目和对照组相比明显减少(P<0.01).结论 成功建立精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,并且Pten可能通过下调Plzf的表达影响精原干细胞的发育,这为进一步探讨精原干细胞复杂的调控网络提供了一定的实验依据和思路.
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关键词
CRE
loxp系统
Pten基因敲除
精原干细胞
表型分析
锌指
蛋白
(
plzf
)
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职称材料
题名
重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
1
作者
李伟
机构
上海交通大学系统生物医学研究院教育部系统生物医学重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第11期1-5,共5页
基金
上海市自然科学基金资助项目(11ZR1416800)
文摘
PLZF(promyelocytic leukaemia zinc finger protein)是一种重要的转录抑制因子,它由位于N端的BTB结构域和C端的锌指结构域构成。鉴于目前对于锌指结构域的立体结构还不是十分清楚,对其进行了高效表达和提纯。为了表达PLZF蛋白的锌指结构域,在其编码序列的5'端加上起始密码ATG后插入到表达载体PET-11a的多克隆位点。构建好的表达质粒转化到BL21(DE3)大肠杆菌内并用IPTG诱导表达,发现重组蛋白主要以不溶性的包涵体形式在胞内表达。用含有SDS变性剂的缓冲液溶解包涵体后,采用凝胶过滤方法将重组蛋白纯化到纯度达96%以上。对纯化后的蛋白质用反透析的方法进行复性,然后用DNA结合实验进行活性分析,发现复性后的蛋白质具有特异的DNA结合活性,这为进一步研究PLZF蛋白锌指结构域的立体结构打下了重要基础。
关键词
plzf蛋白
锌指结构域
包涵体
凝胶迁移分析
Keywords
plzf
protein Zinc finger domain Inclusion body EMSA
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
PLZF与哺乳动物雄性生殖干细胞的发育分化
被引量:
3
2
作者
宋文聪
华进联
机构
西北农林科技大学动物医学院、陕西省干细胞工程技术研究中心、农业部动物生物技术重点开放性实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期825-832,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(No.31272518)
教育部博士点基金(No.RFDP,20120204110030)~~
文摘
早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类PLZF的是由673个氨基酸残基组成的转录抑制因子,属于蛋白质超家族.该超家族以N端的BTB/POZ(bric-à-brac,tramtrack,brad complex(BTB)/poxvirus zinc finger(POZ)domain)结构为特征.PLZF蛋白的BTB/POZ结构与个体发育、胚胎发生、染色体的重构等事件相关.近年发现,PLZF在哺乳动物雄性生殖干细胞(male germline stem cells,mGSCs)发育分化过程中也发挥重要作用.探讨PLZF的生物学功能和作用机制,将有助于理解其在mGSCs发育过程中的重要作用.本文就PLZF在维持mGSCs自我更新和在发育分化调控中的作用给予综述.
关键词
早幼粒细胞白血病锌指
蛋白
(
plzf
)
雄性生殖干细胞
自我更新
发育
分化
哺乳动物
Keywords
promyelocytic leukemia zinc finger (
plzf
)
male germline stem cells (mGSCs)
self-renewal
development
differentiation
mammals
分类号
Q2 [生物学—细胞生物学]
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
精原干细胞中Pten基因敲除小鼠模型的建立及初步的表型分析
3
作者
周炜
张迪
于卓
查巍巍
冯立新
机构
上海交通大学医学院
中国林业科学研究院
出处
《实验动物与比较医学》
CAS
2014年第1期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金(31171409)
文摘
目的 建立稳定的精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,对表型进行初步观察,为研究Pten在精原干细胞中的作用及相关的机制奠定基础.方法 采用Cre/Loxp系统建立Pten在精原干细胞中条件性敲除的小鼠模型,以同窝正常雄鼠作为对照,通过解剖、HE染色等方法对小鼠的表型进行观察,并通过免疫荧光检测精原干细胞标记分子早幼粒细胞白血病锌指蛋白(Plzf)的表达并对免疫荧光染色中的阳性细胞进行统计.结果 与对照组相比,Pten敲除鼠在出生后出现发育迟缓现象,13d左右个体死亡,睾丸大小未受影响,但进一步的细胞计数统计发现Pten敲除后Plzf阳性细胞数目和对照组相比明显减少(P<0.01).结论 成功建立精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,并且Pten可能通过下调Plzf的表达影响精原干细胞的发育,这为进一步探讨精原干细胞复杂的调控网络提供了一定的实验依据和思路.
关键词
CRE
loxp系统
Pten基因敲除
精原干细胞
表型分析
锌指
蛋白
(
plzf
)
Keywords
Cre/Loxp system
Pten conditional knockout
Spermatogonia stem cells
Phenotypic analysis
plzf
分类号
Q95-33 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组PLZF蛋白锌指结构域的表达、提纯和活性分析
李伟
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
原文传递
2
PLZF与哺乳动物雄性生殖干细胞的发育分化
宋文聪
华进联
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
下载PDF
职称材料
3
精原干细胞中Pten基因敲除小鼠模型的建立及初步的表型分析
周炜
张迪
于卓
查巍巍
冯立新
《实验动物与比较医学》
CAS
2014
0
下载PDF
职称材料
已选择
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