大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pBI121,并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘,通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中,转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％(质量分数)NaCl的培养基比较,转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量,结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照(转化pBI121载体)植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见,PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的．

大豆PM2蛋白(LEA3)表达可提高酵母重组子的耐盐性

大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenesis abundant group3)蛋白。本实验以含大豆PM2基因的重组载体pET28a/PM2为模板,PCR法构建酵母表达载体pYES2/PM2,并转化酵母细胞得到重组菌INV/PM2。SDS-PAGE电泳结果表明,INV/PM2重组菌可被诱导表达分子量约为50 kDa的蛋白条带,与目的蛋白的理论分子量(50 kDa)接近。利用液相色谱-电喷雾质谱对酵母重组子表达的重组蛋白进行分析鉴定。分别测定未转基因重组菌INV/pYES2和转PM2基因的重组菌INV/PM2在无胁迫、和含1.8 mol/LNaCl2、mol/L山梨糖培养基中的生长曲线。结果表明大豆PM2蛋白的表达对酵母正常生长没有影响。在含高盐的培养基里,转PM2基因酵母INV/PM2的延滞期短于对照菌。这表明PM2蛋白的表达可以提高酵母细胞的耐盐能力。但是在含山梨糖的高渗培养基里,两种菌的生长情况无明显差异。

大豆PM2蛋白11氨基酸结构域的耐盐功能鉴定

大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenes is abundant group3)蛋白.以含大豆PM2基因的重组载体为模板,PCR法扩增出可编码6拷贝11-氨基酸重复序列的基因片段PM2D.构建pET28a/PM2D重组载体,并转化大肠杆菌得到重组菌BL21/PM2D.SDS-PAGE电泳结果表明,BL21/PM2D重组菌可被诱导表达相对分子质量约为15000的蛋白条带,与目的蛋白的理论相对分子质量(13600)接近.利用DNASIS软件分析,PM2D缺失短肽的亲水指数为1.12.将重组菌BL21/PM2和BL21/PM2D分别涂布在含500mmol/LNaCl和1200mmol/L山梨糖的固体培养基上,计算重组菌的存活率.结果显示,两种重组菌在含500mmol/LNaCl培养基上的存活率分别为30.8%和26.0%,均高于对照菌(BL21/pET28a)的存活率;在含1200mmol/L山梨糖培养基上的存活率分别为59.7%和59.3%,与对照BL21/pET28a菌株的存活率相比无明显差异.PM2D短肽长度为PM2蛋白全长的1/4,但BL21/PM2D重组菌的耐盐能力为BL21/PM2重组菌的80%左右.表明11-氨基酸重复序列区是PM2蛋白序列的一个耐盐结构域.

胃癌组织中MLH1,MSH2,MSH6和PMS2表达及与临床病理特征和预后的相关性分析

目的探讨胃癌组织中错配修复蛋白MutL homologue 1(MLH1),MutS homologue 2(MSH2),MutS homologue 6(MSH6)和减数分裂后分离为2(postmeiotic segregation increased 2,PMS2)的表达及与临床病理特征和预后的相关关系。方法选取承德医学院附属医院病理科2018年11月~2021年11月确诊的474例胃癌组织为研究对象,采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中MLH1,MSH2,MSH6和PMS2蛋白表达水平,根据此四种蛋白表达情况将胃癌组织分为高频微卫星不稳定(microsatellite instability-high,MSI-H)组和低频微卫星不稳定或微卫星稳定(microsatellite instability-low/microsatellite stability,MSI-L/MSS)组,比较两组的临床病理特点。采用Kaplan-Meier生存分析法比较两组患者的预后情况。结果474例胃癌中,MSI-L/MSS型胃癌为403例(85.02%),MSI-H型胃癌共71例(14.98%)。其中4种错配修复蛋白MLH1,MSH2,MSH6和PMS2任一表达缺失共42例,占8.86%(42/474);两种及以上蛋白表达缺失共29例,占6.12%(29/474);MLH1,MSH2和PMS2同时表达缺失率0.84%(4/474);MLH1,MSH2,MSH6和PMS2全部表达缺失率0.21%(1/474)。MSI-H型胃癌患者淋巴结转移率和脉管侵犯率低于MSI-L/MSS型胃癌,差异具有统计学意义(χ^(2)=21.65,8.93,均P<0.05)。而两组患者在性别、年龄、Borramn分型、Lauren分型、分化程度、浸润深度和远处转移等方面比较,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.03~2.79,均P>0.05)。MSI-H型与MSI-L/MSS型胃癌患者相比,三年总生存率(overall survival,OS)为87.52%和62.68%,差异无统计学意义(χ^(2)=3.64,P>0.05),三年无进展生存率(progression-free survival,PFS)为75.00%和57.84%,差异无统计学意义(χ^(2)=3.21,P>0.05)。结论与MSI-L/MSS型胃癌相比,MSI-H型胃癌患者淋巴结的转移率低和脉管的侵犯率低,三年OS和PFS偏高,提示MSI-H型胃癌患者有较好的预后。

MSH6与PMS2蛋白在前列腺癌中的表达及与发生发展相关性分析

目的:探讨前列腺癌组织中DNA错配修复基因MDH6、PMS2蛋白的表达变化及其与前列腺癌发生发展的相关性。方法:选取2014年1月至2016年8月我院病理科收集的120例前列腺癌组织标本(前列腺癌组织)及其癌旁组织标本(癌旁组织),采用免疫组化染色观察两组标本中MDH6、PMS2蛋白表达情况,并分析其与前列腺癌发生发展的相关性。结果:前列腺癌组织中的MSH6、PMS2蛋白阳性表达率分别为76.67%、70.83%,均高于癌旁组织的30.00%、36.67%,差异具有统计学意义(P<0.05);前列腺癌组织中的MSH6阳性表达与患者的年龄、TNM分期、PSA水平、Gleasom评分、远处转移均无统计学相关性(P>0.05);PMS2蛋白阳性表达与患者的年龄、TNM分期、PSA水平、Gleasom评分、远处转移具有统计学相关性(P<0.05)。结论:前列腺癌组织中DNA错配修复基因MDH6、PMS2蛋白表达水平上调,PMS2蛋白与前列腺癌的发生发展关系密切。

植物抗逆蛋白(LEA3)22-氨基酸耐盐结构域在酵母细胞中的鉴定

大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenesis abundant3)蛋白。本文构建了编码PM2全长及含22-氨基酸结构域多肽(PM2、PM2A、PM2B和PM2C)的酵母表达载体。转化酵母得到四种重组菌。SDS-PAGE电泳和ESI-MS/MS或MALDI-TOF/TOF质谱结果表明,重组菌可表达目标多肽。测定对照菌及重组菌在无胁迫、高盐(1.5mol.L-1NaCl)和高渗透(2mol.L-1山梨糖)下的生长曲线。结果表明,在高盐胁迫下,四种重组菌胁迫后的恢复明显好于对照菌。多肽对高盐耐受能力的大小为:PM2C>PM2B≈PM2A≈PM2。证明大豆PM2蛋白的表达可提高酵母耐盐性,且22-氨基酸基序为PM2蛋白的耐盐结构域。结合前文在大肠杆菌中的结果,为"LEA蛋白可以类似机制参与原核和真核生物耐盐保护作用"的假说提供实验支持。然而,在高山梨糖胁迫下,对照菌和酵母重组菌的生长情况无明显差异。

癌组织标本PMS2蛋白表达与前列腺癌患者Gleasom分级关联性分析

目的:研究癌组织标本PMS2蛋白表达与前列腺癌患者Gleasom分级的相关性。方法:选取我院2018-04~2019-04前列腺癌患者104例,取其前列腺癌组织及其癌旁组织,制作标本,观察两个标本中PMS2蛋白表达情况,并分析前列腺癌组织PMS2蛋白阳性表达与Gleasom分级的关联性。结果:前列腺癌组织中PMS2蛋白阳性表达71.15%,阴性表达28.85%;前列腺癌组织PMS2蛋白阳性表达率71.15%高于癌旁组织36.54%(P<0.05);前列腺癌组织中PMS2蛋白阳性表达与年龄、Gleasom分级、血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、TNM分期、远处转移有关(P<0.05)。结论:前列腺癌组织PMS2蛋白阳性表达率较癌旁组织高,且与年龄、Gleasom分级、PSA水平、TNM分期、远处转移均有关,可指导临床治疗方案的确定。

结直肠癌肿瘤组织PMS2蛋白表达状态与其临床病理特征的关系

目的:探索结直肠癌肿瘤组织PMS2蛋白的表达与各临床病理参数及血清肿瘤标记物水平的关系。方法:选取2017年5月-2018年7月行结直肠癌切除手术的1023例肿瘤组织标本,通过免疫组化法检测PMS2蛋白表达状态;并收集相应患者的血清检测CEA、CA19-9、CA125,分析结直肠癌患者肿瘤组织PMS2蛋白表达状态及其相关因素。结果:结肠癌和直肠癌肿瘤组织的PMS2蛋白阴性表达比例分别为14.0%(73/520)、2.9%(13/503),前者PMS2蛋白阴性表达明显高于后者(P<0.0001)。结肠癌肿瘤组织PMS2蛋白阴性表达的周围神经侵犯阳性率明显低于PMS2蛋白阳性表达者(P<0.001),但前者的肿瘤最大径≥5cm的比例和肿瘤细胞低分化腺癌比例明显高于后者(P<0.001)。直肠癌肿瘤组织PMS2蛋白的阴性表达患者的T3+T4分期比率明显高于阳性表达者(P<0.05)。PMS2蛋白表达状态和血清CA19-9水平呈负相关(r=-0.1623,P<0.01)。结论:结肠癌肿瘤组织中PMS2蛋白阴性表达者在神经侵犯阳性率、肿瘤最大径≥5cm的比例及肿瘤细胞低分化比例均较PMS2蛋白阳性表达者明显增高;直肠癌肿瘤组织中PMS2蛋白阴性表达者T3+T4期比例较阳性表达者亦明显增高。