一种CD3^＋ T细胞细胞内CD69分子的检测方法

目的建立一种人外周血CD3^+ T细胞细胞内CD69的检测方法。方法分离获取健康人PBMC,用PMA^+ IM(佛波醇酯^+ 离子霉素)刺激PBMC,用蛋白转运抑制剂(Brefeldin A,BFA)阻断细胞内因子的分泌,用皂角素(Saponin)破膜,流式细胞术检测CD3^+ T细胞胞内CD69阳性率,以确定最佳的破膜时间。结果最佳的破膜时间为15 min,CD3^+ T细胞胞内CD69表达的阳性率较高,可达87.82%。结论流式细胞术是一种检测CD3^+ T细胞内CD69的较好方法,这一方法也为CD3^+ T细胞内其他分子的检测分析奠定了方法学基础。

三种方式活化T细胞CD69分子表达观察

目的观察CD3单克隆抗体（CD3mAb）、佛波醇酯＋离子霉素（PMA＋IM）、结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）活化CD3＋T细胞CD69分子的表达情况。方法分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC），用CD3mAb（A组）、PMA＋IM（B组）、Mtb．Ag（C组）刺激PBMC，采用流式细胞术检测。CD3＋T细胞和∞T细胞0、6、12、24、48和72hCD69分子的动态表达情况。结果CD3＋T细胞CD69分子的动态表达情况：CD3mAb刺激组24h达高峰，为56．2％；PMA＋IM刺激组6h达高峰，为99．5％；Mtb-Ag刺激组24h达高峰，为16％。各组比较F=322．528，P〈0．001；两两比较，均P〈0．001。γδT细胞CD69分子的动态表达情况：CD3mAb刺激组24h达高峰，为55．1％；PMA＋IM刺激组6h达高峰，为99．3％；Mtb-Ag刺激组24h达高峰，为75．2％。各组比较F=21．170，P〈0．001；两两比较：CD3mAb与PMA＋IM组比较，PMA＋IM组与Mtb—Ag组比较，均P〈0．001；Mtb-Ag与CD3mAb比较P=0．646。结论PMA＋IM的刺激，CD3＋T细胞和γδT细胞活化达高峰的用时比CD3mAb、Mtb-Ag的刺激要短，CD69的表达率也比CD3mAb、Mtb-Ag的刺激要高，应作为三种方法中CD3＋T细胞活化的首选方法。