PMA-LAMP法对克氏螯虾样品中沙门氏菌的快速检测

采用环介导等温扩增技术(PMA-LAMP)对克氏螯虾(Cambarus Clarkii)样品中沙门氏菌进行快速检测,旨在建立一种快速简便、灵敏度高、特异性强的检验方法。分别采用PMA-LAMP、PCR检测方法对沙门氏菌进行检测。结果表明,PMA-LAMP法检测限为2×10 CFU/mL,PCR法和GB/T 4789.4-2008检测限为2×103CFU/mL。采集湖北省省内60份市售的克氏螯虾样品,分别采用PMA-LAMP检测方法、PCR检测方法及国家标准方法(GB/T 4789.4-2008)对样品进行检测,PMA-LAMP方法检出6例沙门氏菌,阳性率为10%;PCR检测方法检出4例沙门氏菌,阳性率为6.7%;国家标准方法检出4例沙门氏菌,阳性率为6.7%。

PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌的研究

近年来,金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件频发,这就需要建立一种快速准确地检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。传统方法检测食品中金黄色葡萄球菌活菌存在很多缺点。由于细胞死亡后其DNA依然能够存活许久,所以传统方法不能有效区分DNA来自死菌还是活菌。通过荧光染料PMA与快速检测技术LAMP相结合的方法快速、灵敏的检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌,并对死/活菌进行区分。根据金黄色葡萄球菌nuc基因设计引物,并对LAMP反应体系及PMA-LAMP方法进行优化,同时优化了灭菌乳中提取DNA的方法。在纯培养的金黄色葡萄球菌中,PMA-LAMP方法检测灵敏度为3.2CFU/mL,PMA-PCR方法的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL;对人工污染灭菌乳中的金黄色葡萄球,PMA-LAMP方法检测灵敏度为5×101CFU/mL,而PMA-PCR方法检测灵敏度为5×103CFU/mL。整个反应需要大约6h,说明PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌活菌的新方法。

PMA-LAMP检测单增李斯特活菌方法的建立

建立一种将荧光染料Propidium Monoazide(PMA)与环介导等温扩增(LAMP)相结合的检测方法,用于高效检测活的单核细胞增多性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)。利用PMA抑制单增李斯特死菌后进行LAMP扩增实验、并研究了PMA-LAMP方法检测单增李斯特活菌的灵敏度,同时与PMA-PCR方法灵敏度进行比较。结果表明,50μmol/L的PMA处理浓度为5×108cfu/mL单增李斯特死菌,能够完全抑制LAMP扩增。PMA-LAMP方法检测单增李斯特活菌的检出限为4.9×101cfu/mL,其灵敏度是PMA-PCR方法的10倍。该方法可以作为一种快速检测单增李斯特活菌的新技术。

基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌

建立一种将荧光染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide,PMA）与环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术相结合的方法,用于快速高效检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。同时,采用人工污染金黄色葡萄球菌的速冻水饺和奶粉作为食品样品,研究PMA-LAMP方法的检测灵敏度。结果表明,PMA溶液质量浓度3μg/mL,650 W卤素灯下曝光5 min,PMA能够完全抑制1.2×10^7 copies/mL金黄色葡萄球菌死菌核酸扩增。PMA-LAMP方法能够在恒温65℃、60 min内完成对亚致死型金黄色葡萄球菌特异性nuc基因的特异性检测,其对亚致死状态金黄色葡萄球菌的检出限为34 CFU/mL,对食物样品速冻水饺和奶粉的检出限分别为17 CFU/m L和1.70×10^2 CFU/mL。建立的PMA-LAMP方法可以有效检测亚致死态金黄色葡萄球菌,提供了一种新的检测技术和解决方案。