天麻钩藤饮对SHR血管平滑肌细胞CaL-α1C及PMCA1 mRNA表达的影响

目的:观察天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞膜L-型电压依赖性钙通道α1C亚单位(CaL-α1C)和质膜Ca2+-ATP酶(PMCA)mRNA表达的影响。方法:选用12周龄自发性高血压♂性大鼠45只,随机分为5组:天麻钩藤饮组(A组)、天麻钩藤饮去石决明组(B组)、硝苯地平组(C组)、石决明组(D组)、生理盐水组(E组),分别予以天麻钩藤饮水煎液、天麻钩藤饮去石决明水煎液、硝苯地平水溶液、石决明水煎液、生理盐水灌胃给药,每日1次,连续4周。以RT-PCR半定量法检测血管平滑肌细胞CaL-α1C、PMCA1 mRNA的表达水平。结果:用药4周后,天麻钩藤饮、天麻钩藤饮去石决明、硝苯地平对血管平滑肌细胞CaL-α1C mRNA表达均有显著的抑制作用,对PMCA1 mRNA表达均有显著上调作用,石决明未见显著的调控作用。结论:天麻钩藤饮可有效的抑制CaL-α1C的表达,同时促进PMCA1的表达,改善高血压时平滑肌细胞的钙超载状态。

高钙和缺钙环境对花鳗鲡血液生理指标及其NCXs和PMCAs基因表达的影响

为探究花鳗鲡(Anguilla marmorata)应对极性钙浓度环境下体内的应激机制,检测了花鳗鲡成鳗从对照组(2 mM Ca^(2+))转移到高钙组(10 mM Ca^(2+))和缺钙组(0 mM Ca^(2+))时第1、4和7天的血清钙浓度、血清渗透压和5项血液指标(白细胞数目、红细胞数目、葡萄糖浓度、血红蛋白浓度和血小板数目),采用qRT-PCR技术对NCXs和PMCAs基因在花鳗鲡不同组织中的表达进行分析,并研究了花鳗鲡应对极性钙浓度下NCXs和PMCAs基因在鳃组织中表达变化规律。结果表明:血清钙浓度和血清渗透压与周围钙离子浓度成正相关,第1、4天处理组较对照组有显著性差异(P<0.05),第7天不同组之间无显著差异(P>0.05);随时间延长高钙环境下各项指标由高到低,低钙环境下各项指标由低到高,至第7天达到稳态;5项血液指标,第1、4天各处理组数值均比对照组高,第7天达到稳态。对于组织表达,NCX2和NCX3在皮肤中表达最高,而NCX1、PMCA2和PMCA4在肾脏中表达最高。对于各亚型的mRNA时序表达,NCX1和PMCA4在极性钙处理情况下相较对照组有显著性差异(P<0.05);其中,NCX1在高钙条件下随着时间增长表达量逐渐升高,在低钙环境下随着时间增长表达量逐渐降低,即NCX1的表达对于极性钙环境具有指示作用;PMCA4在高钙条件下随着时间延长表达量逐渐降低,在低钙环境下随着时间延长表达量逐渐升高,在第7天达到稳态,即PMCA4的表达对于钙环境的稳态具有指示作用;其它亚型随着时间的延长均无显著性差异。可见NCX1和PMCA4在花鳗鲡洄游过程机体内钙稳态的调节中扮演了重要角色。

利用PMCA技术实验不同剂量MCT联合DTT对PrP^(sc)转化的抑制效应

蛋白质错误折叠循环扩增(protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术,是一种具有感染性的朊蛋白(PrPsc)体外扩增的技术,可用于抑制细胞型朊蛋白(PrPc)向PrPsc转化药物的筛选.本研究在Saborio等提供的方法基础上,成功优化了最佳扩增时间,利用优化的PMCA技术实验了不同剂量氮芥(mechlorethamine,MCT)联合二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)对PrPsc转化的抑制效应.结果发现,MCT联合DTT能体外抑制PrPc向PrPsc的转化,抑制作用具有明显的量效关系.利用针对人PrPc不同结构域的抗体发现,MCT联用DTT可使抗体6H4的抗原表位隐蔽,该表位位于PrPc第1个α螺旋区内,是构象转化的主要部位.对其机制的深入探讨,将有助于新一类可传播性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathy,TSE)治疗药物的研发.

产蛋循环过程中TRPV6、CaBP-D_(28K)和PMCA 1b在蛋壳腺的动态表达

将40羽220日龄ISA蛋鸡分为5组,于产蛋后0、2、4.5、8、16h断头处死,采集蛋壳腺组织,运用Real-time PCR和Western-blot方法检测产蛋循环过程中瞬时性受体单位香草精受体6（Transient receptor potential vanilloid receptor 6,TRPV6）、钙结合蛋白（calbindin D28K,CaBP-D28K）、质膜钙离子ATP酶1b（plasma membrane Ca2＋-ATPase 1b,PMCA 1b）mRNA和蛋白浓度的动态变化。结果显示,卵子未进入蛋壳腺前（产蛋后0~4.5h）,蛋壳腺内TRPV6、CaBP-D28K和PMCA 1bmRNA表达水平较低,随后表达量逐渐升高,在蛋壳钙化过程中达到最大值（产蛋后16h）,与0h相比,TRPV6和CaBP-D28KmRNA表达差异均极显著（P〈0.01）;另外,产蛋循环过程中,TRPV6、CaBP-D28K和PMCA 1b蛋白浓度变化与mRNA变化一致,产蛋后16h到达最大值,其中CaBP-D28K蛋白浓度与0h相比,差异显著（P〈0.05）。结果表明,产蛋循环可调控蛋壳腺内TRPV6、CaBP-D28K和PMCA 1b的表达,并提示钙离子跨细胞转运途径在钙离子进入蛋壳腺形成蛋壳过程中发挥重要作用。

PMCA2基因多态性与噪声性听力损失易感性研究

目的探讨质膜钙离子-三磷酸腺苷酶2异构体(PMCA2)基因多态性与噪声性听力损失(NIHL)易感性的关系。方法采用单纯随机抽样方法,选择228名NIHL工人为病例组,以230名年龄、噪声作业工龄、噪声接触水平等均相近的听力正常工人为对照组。采集2组人群周围血提取DNA,采用MassArray系统进行PMCA2单核苷酸多态性(SNP)位点基因分型。结果PMCA2基因rs1719571和rs14154位点在对照组人群等位基因频率分布均符合遗传学Hardy-Weinberg平衡定律(P值均>0.05)。2组人群rs1719571、rs14154位点不同基因型分布和等位基因频率分布分别比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。在排除年龄、噪声接触工龄、个体噪声接触强度、吸烟和饮酒的影响后,携带rs1719571位点GA基因型的个体罹患NIHL的风险低于携带GG基因型者(比值比=0.53,95%置信区间=0.31~0.90,P<0.05);rs14154位点多态性与NIHL发病风险无关联(P>0.05)。结论PMCA2 rs1719571位点SNP与NIHL易感性相关;GA基因型可能是NIHL发生的潜在保护因素。

SMB-S15细胞中朊病毒PMCA方法的建立及对白藜芦醇抗朊病毒作用的评价

朊病毒是一类能引起人或动物神经退行性疾病的感染因子。蛋白质错误折叠循环扩增(Protein misfolding cy-clic amplification,PMCA)是一种常见的朊病毒体外扩增技术。白藜芦醇是一种具有较高研究价值的植物抗菌素。为了建立SMB-S15细胞中朊病毒的PMCA体系,并探索PMCA技术在评价白藜芦醇抗朊病毒作用的意义,本研究以朊病毒感染细胞系SMB-S15细胞匀浆为种子,健康小鼠脑组织匀浆为底物,建立PMCA技术平台。将不同浓度的白藜芦醇导入PMCA体系,通过Western Blot方法检测PMCA产物中异常朊蛋白(PrPSc)的生成和变化。结果显示:SMB-S15细胞中PrPSc可以在建立的PMCA体系有效地复制。新生成的PrPSc分子的糖基化特征与原始细胞中的PrPSc不同,其双糖基化分子比例明显增加。同时也有别于羊瘙痒因子139A和ME7感染小鼠脑组织中的PrPSc分子。加入白藜芦醇后,PrPSc在PMCA体系中的复制明显被抑制,呈现出剂量依赖效应,其EC50约为4.616μM。这些结果表明:SMB-S15细胞中的PrPSc可以通过PMCA大量扩增,建立的PMCA技术可有效地反映白藜芦醇对PrPSc在体外复制的抑制作用。

瘤背石磺低频听力基因PMCA2的克隆、相对表达及神经组织原位杂交分析

低频听力基因PMCA2在生物听力方面占据着重要位置,基因突变或缺失后会引发神经性耳聋和平衡功能障碍。为探究基因PMCA2在瘤背石磺潮汐感知中的作用,本研究通过RACE技术克隆得到瘤背石磺PMCA2基因的全长cDNA,并进行系统进化分析。利用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术和原位杂交技术分析两组(暂养无处理组和潮汐干扰刺激组)瘤背石磺PMCA2基因在各组织中相对表达量和在神经组织各神经节中的相对表达部位。实验结果表明,瘤背石磺PMCA2基因cDNA全长5 091 bp,包含492 bp的5’非编码区(UTR)以及972 bp的3’UTR,3 627 bp的开放阅读框,共编码1 208个氨基酸,基因序列较为保守。序列分析结果显示,瘤背石磺与加州海兔、绿色海蜗牛和福寿螺PMCA2氨基酸序列同源性分别为81.79%,78.25%和72.91%。通过系统进化树分析研究得出,瘤背石磺与加州海兔进化关系相对较近。RT-qPCR结果显示,两组石磺神经组织PMCA2基因表达量皆高于其他组织的,且潮汐干扰刺激组神经组织表达量明显高于暂养无处理组,有显著性差异。两组瘤背石磺神经组织原位杂交实验结果显示,相较于暂养无处理组,潮汐干扰刺激组石磺神经组织杂交信号明显增强,该结果与荧光定量PCR结果相符。实验初步表述了瘤背石磺PMCA2基因的生物信息学特征,在瘤背石磺各组织中的表达情况及在神经组织中的分布部位,为研究滩涂生物感知潮汐能力提供原创性成果。

质膜Ca^(2+)-ATP酶异构体2基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的 探讨质膜Ca2 + - ATP酶异构体 2 (PMCA2 )基因多态性与噪声性听力损失的关系。方法 采用横断面流行病学研究方法 ,对 194名噪声暴露作业工人进行调查和听力测试 ,按听力学评价的结果将其分为听力损失组和听力正常组 ;用多聚酶链反应 限制性片断长度多态性 (PCR -RFLP)方法和等位基因特异扩增法 (ASA)检测其PMCA2基因上rs2 2 892 74和rs6790 64 0两个单核苷酸位点的多态性。结果 在 93名噪声性听力损失的工人中 ,rs2 2 892 74位点AA、AG和GG基因型的频率分别为16. 1%、40. 9%和 43. 0 % ,等位基因A和G的频率为 3 6 6%和 63 . 4% ;在 10 1名听力正常的工人中 ,其基因型频率分别为 15 8%(AA)、3 2 7% (AG)和 5 .1 5 % (GG) ,等位基因频率为 3 2. 2 % (A)和 67. 8% (G)。rs6790 64 0位点在噪声性听力损失组CC、CT和TT基因型的频率分别为 0、 82 8%和 17. 2 % ,等位基因C和T的频率为 41. 4%和 5 8 .6% ;在听力正常组的基因型频率分别为 1 0 %(CC)、 76. 2 % (CT)和 2 2 . 8% (TT) ;等位基因频率为 3 9. 1% (C)和 60. 9% (T)。两位点的基因型分布及其等位基因频率在噪声性听力损失组与听力正常组之间差异均无显著性 (P >0 . 0 5 )。采用多元Logistic回归对两组间年龄、性别、吸烟状况。

质膜Ca^2＋-ATPase的结构与功能

质膜Ca2+-ATPase(PMCA)是P型ATPase家族的一员,在真核细胞中主要负责信号刺激后胞内高浓度Ca2+的清除扫尾工作,并对维持静息状态下较低Ca2+浓度起着重要的调节作用.PMCA的一级结构已被确定,拓扑学结构显示,它有10个跨膜区和3个胞浆功能区.它的4个编码基因可产生4种亚型(PMCA 1~4),这些亚型在功能与分布上存在差异.PMCA的活性可被钙调蛋白等多种因素调节,这与其结构特征息息相关.近年来,PMCA已被证实与脂筏结构有一定关联,它在信号传导和细胞凋亡中的作用也成为目前科学研究的焦点.本文主要对PMCA的结构、亚型和功能的研究现状进行综述.

日龄对肉鸡骨骼生长和小肠钙吸收关键基因表达的影响

为研究不同日龄对肉鸡体重、骨骼生长及十二指肠钙结合蛋白(CaBP-D28k)、钙离子转运ATP酶B1(PMCAlb)、细胞核维生素D受体(nVDR)、细胞膜维生素D受体(mVDR)等钙吸收关键基因表达的影响,将1日龄罗斯308肉鸡公雏96只随机分为8个重复,每个重复12只鸡。给肉鸡饲喂常规营养水平饲粮。在14、21、28、35、42日龄时,分别从每个重复中随机取出1只鸡,合计8只,空腹12小时后屠宰。刮取十二指肠黏膜,利用荧光定量qRT-PCR技术,分析钙吸收关键基因的表达水平。结果显示:①14~42日龄时,肉鸡体重随日龄增加而线性提高(P<0.001);②14~42日龄时,肉鸡股骨重量、长度、直径、灰分重量随日龄增加线性增加(P<0.001),但股骨灰分含量、钙含量、磷含量随日龄增加而线性降低(P<0.001);胫骨生长呈现类似趋势;③14~42日龄肉鸡小肠钙吸收关键基因CaBP-D28k、PMCA1b、nVDR、mVDR mRNA表达水平随日龄增加呈现先升高后降低的趋势,在28日龄达到最高峰;但CaBP-D28k mRNA表达水平在各日龄间差异不显著。结果表明:尽管14~42日龄肉鸡体重、股骨与胫骨重量、灰分重量线性增加;但股骨与胫骨灰分含量线性降低;而CaBP-D28k、PMCA1b、n VDR、mVDR等钙吸收关键基因表达水平呈现先升高后降低的趋势,在28日龄达到最高峰。研究提示:肉鸡小肠钙吸收能力随日龄而改变。

不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的验证应用

目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性。方法 :采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)、探针熔解曲线法(probe melting curve assay,PMCA)检测常见α-地贫和β-地贫基因突变。两种方法所得结果不一致或少见类型地贫突变时,采用DNA测序分析法确诊。所有产前诊断结果均进行验证或随访。结果 :经STMP+RDB、PMCA检测突变谱不同,α-地贫和β-地贫各有1例结果不同。另STMP+RDB检测灵敏度高于PMCA,其差异性在标本受母血污染时有提示作用。结论:两种不同技术原理的PCR方法进行地贫产前诊断,是必要和可行的,两者具有互补性,可确保结果的可靠性和减少单一技术的缺陷。

以Caco-2细胞模型研究远志皂苷水解物的肠吸收特性

目的通过研究远志皂苷水解物主要活性成分3,4,5-三甲氧基肉桂酸(TMCA)、对甲氧基肉桂酸(PM-CA)和细叶远志皂苷(TF)的肠转运特性,预测其口服生物利用度。方法利用Caco-2细胞模型,以及所建立的LC-MS/MS分析方法,研究上述3个成分在不同浓度下从顶侧(AP)到基底侧(BL)以及从BL到AP2个方向的转运特性。结果 TMCA和PMCA 2个酚酸化合物具有较好的膜通透性,在不同浓度下从AP到BL的表观渗透系数(Papp)均>10×10-6cm.s-1,而三萜皂苷TF的通透性较差,Papp值均<1×10-6cm.s-1。3个化合物的转运量均随浓度的增加而增加,但Papp值保持基本一致,且各自2个方向的Papp值无明显差异。结论 TMCA和PMCA具有良好的肠通透性,属吸收较好的化合物,而TF则通透性较差,口服吸收可能很有限;3个化合物均以被动扩散形式转运,且无外排转运机制。

低钾胁迫对玉米自交系苗期部分信号分子的影响

研究在低钾胁迫下玉米苗期胞间和胞内部分信号分子的改变。玉米自交系A(不耐低钾)和B(耐低钾),以1/2Hoagland溶液培养12d后,转入3个不同钾离子浓度(5μmol/L,100μmol/L,1000μmol/L)连续培养50d,测定其胞间ABA,IAA,GA,ZR激素水平及胞内CaM含量、PMCa2+-ATPase和NADK激酶活性。结果表明:低钾条件下,ABA/GA、ABA/IAA、ABA/ZR比值上升;同时,耐性品种CaM含量增加;低钾诱导了PMCa2+-ATPase和NADK响应,耐性品种的PMCa2+-ATPase和NADK活性高于非耐性品种。低钾条件下,(耐低钾自交系B通过胞间ABA/GA、A-BA/IAA、ABA/ZR比值变化,促进胞内CaM含量升高,导致下游PMCa2+-ATPase和NADK激酶活性升高),通过改变胞内Ca2+和NADP/NAD水平,适应低钾胁迫。

糖皮质激素调节创伤后神经元胞膜钙泵研究现状

交通事故伤所造成的创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）已经成为青年人致残和死亡的主要原因。脑损伤的预防和伤后救治成为一个亟待解决的问题。TBI的病理机制是一个复杂的、多重因素相互重叠、共同作用的过程。膜通透性增加、自由基损伤、兴奋性氨基酸中毒、缺血及再灌注损伤等都参与其中,而神经元胞内钙超载是上述所有致伤因素的共同通路。

Deformation Potential Approach to the Calculation of Mobilities of Carriers and Conductivity of trans-Polymonocyanoacetylene

The deformation potential theory for one-dimensional organic polymer is studied. This approximation is then used to calculate the mobilities of carriers and the conductivity of trans-polymonocyanoacetylene (PMCA). The results of calculations are in fairly good agreement with experimental data.

朊蛋白体外扩增技术对不同种属朊病毒检测敏感性分析

朊蛋白体外扩增技术包括实时震动诱导蛋白扩增(Real-time quaking-induced conversion,RT-QuIC)技术及蛋白错误折叠循环扩增(Protein misfolding cyclic amplification,PMCA)技术。为了分析朊蛋白体外扩增技术与传统的蛋白免疫印迹技术对于朊病毒毒株检测敏感性的差异,应用此三种方法对朊病毒小鼠适应株139A、ME7和S15以及仓鼠适应株263K毒株进行了检测及对比分析。结果显示,应用RT-QuIC方法以及三轮PMCA扩增方法,均可检测到10-9稀释度139A小鼠脑匀浆中的朊病毒,比Western blot方法敏感度提高了106倍;应用RT-QuIC方法以及三轮PMCA扩增方法,分别可检测到10-7稀释度及10-8稀释度ME7小鼠脑匀浆中的朊病毒,分别比Western blot方法敏感度提高了104倍及105倍;应用RT-QuIC方法以及三轮PMCA扩增方法,分别可检测到10-8稀释度及10-9稀释度S15小鼠脑匀浆中的朊病毒,分别比Western blot方法敏感度提高了105倍及106倍;应用RT-QuIC方法可检测到10-9稀释度263K仓鼠脑匀浆中的朊病毒,比Western Blot方法敏感度提高了106倍,但三轮PMCA扩增方法可检测到10-3稀释度的263K小鼠脑匀浆中的朊病毒,与Western Blot方法比较敏感度没有明显提高。本实验为优化朊蛋白体外扩增技术的检测条件、检测敏感性及该技术的临床应用提供了实验数据参考。

左归丸对去势大鼠钙转运通路相关蛋白的影响

目的:探讨左归丸对去势大鼠骨密度和骨组织中钙转运通路相关蛋白的影响。方法:选取48只雌性SD大鼠,随机分为正常组,假手术组,模型组,尼尔雌醇组(0.167 mg·kg^-1),左归丸低、高剂量组(9.6,38.4 g·kg^-1)。除假手术组和正常组,其余组切除大鼠卵巢,造模成功后3个月进行各组干预。3个月后处死大鼠,检测大鼠骨密度(BMD)和骨代谢标志物;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测钙转运通路(骨组织)瞬时受体电位通道V5(TRPV5),钙结合蛋白-D28K(CaBP-D28K),钠钙交换器1(NCX1)和细胞膜钙汞(PMCA1b)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血钙降低(P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组和尼尔雌醇组大鼠血钙显著升高(P<0.01);与正常组比较,模型组BMD显著降低(P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组与尼尔雌醇组大鼠BMD均有改善(P<0.05);与假手术组和正常组比较,模型组各蛋白表达均有不同程度上调(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,左归丸高剂量组中TRPV5蛋白表达有显著下调(P<0.01),各干预组中的CaBP-D28K与NCX1蛋白表达均有不同程度的下调(P<0.05,P<0.01),PMCA1b蛋白表达在左归丸低剂量组和尼尔雌醇组内表达均有不同程度下调(P<0.05,P<0.01)。结论:左归丸可不同程度的降低大鼠破骨细胞中TRPV5,CAPB-D28K,PMCA1b,NCX1等介导破骨细胞吸收钙离子的重要通道蛋白的表达,左归丸的抗骨质疏松机理有可能是通过抑制TRPV5介导的破骨细胞的骨吸收而起作用。

蛋白质错误折叠循环扩增及其在朊病毒蛋白检测中的应用研究进展

朊病毒蛋白(prion protein,PrP)是传染性海绵状脑病的病原体,其检测是该病诊断的重要依据。该文从原理、方法、影响因素和检测应用方面对蛋白质错误折叠循环扩增(protein mis-folding cyclic amplification,PMCA)这种朊病毒蛋白新型检测技术做了介绍,旨在为朊病毒蛋白的检测和发病机制研究提供理论参考。

附睾小体：将生育力调节蛋白运输至精子表面的搬运工

在精子成熟的过程中，精子从附睾管腔液（ELE）中获得了多种糖基磷脂酰肌醇（GPI）-连接蛋白。这些蛋白在免疫保护与诸如精子获能、顶体胞吐以及精卵相互作用等重要过程中起作用。精子通过最初被报道锚定于精子表面的膜性囊泡（附睾小体，EP）以及促进附睾管腔液中与非膜性组分相结合的蛋白转运的脂质载体获得这些蛋白。这两条途径都依赖于精子表面的GPI-锚接结构与外部脂质层之间的疏水相互作用，而非囊泡组分效率更高。最近，蛋白质组学与假设推动的研究发现来自于多种哺乳动物的附睾小体携带包括质膜钙离子依赖性ATP酶4（PMCA4）在内的跨膜（TM）蛋白。PMCA4在睾丸中合成，是小鼠精子的必需蛋白以及主要的钙离子外排泵。在附睾成熟与体外实验过程中，PMCA4从牛与小鼠附睾小体到精子的传递过程提示附睾小体在精子表面发生融合前先锚定在精子表面，并且实验证据支持跨膜蛋白的融合机制。融合过程由CD9促进，CD9在膜表面生成融合决定值点。基于对PMCA4发生互相作用的蛋白的认识，许多跨膜蛋白与膜结合蛋白在附睾小体向精子运送的物质中得到了鉴定或被预测存在于这些物质中。这些没有能够在蛋白质组学研究中发现的钙离子依赖性蛋白在精子的运动与受精能力中起到了不可或缺的作用，它们的发现彰显了假设推动的研究手段的实用性。

朊病毒“类PCR”高灵敏度检测方法的研究进展

朊病毒是传染性海绵状脑病的感染因子,主要由错误折叠的朊蛋白(PrPS)c组成。朊病毒的复制就是在痕量PrPSc的催化下,正常朊蛋白(PrPC)向其错误折叠形式的转化。本文介绍的是朊病毒的新型检测方法,即蛋白质错误折叠循环扩增技术(类"PCR"高灵敏度检测方法),这种技术的概念是根据朊病毒的复制原理形成的,其方法类似于DNA通过PCR扩增的方法。本文针对朊病毒"类PCR"高灵敏度检测方法中几个具有代表性意义的技术作一综述。