蜜环菌多糖的分离纯化及PMP衍生化HPLC分析

目的:对蜜环菌发酵液进行多糖的提取、分离纯化,得到均一多糖,对其进行单糖组分分析。方法:分离纯化采用分步醇沉和葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)色谱法;纯度鉴定及分子量测定采用高效液相色谱法;单糖组成采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生HPLC法测定。结果:获得两种均一多糖(AMFP-Ⅰ、AMFP-Ⅱ),峰位分子量分别为812 939D、596217D,重均分子量(MW)分别为995 098D、872 640D,分布宽度(Mw/Mn)分别为1.268 93、1.235 20;测定单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖。结论:两种多糖分子量分布及单糖组成均不同,AMFP-Ⅰ主要由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成,AMFP-Ⅱ主要由半乳糖醛酸、半乳糖、木糖组成。

单糖柱前PMP衍生HPLC测定方法探讨

从PMP萃取酸度、萃取次数探讨了柱前PMP衍生方法对单糖-PMP衍生物的影响,并从流动相比例、缓冲液pH值、缓冲盐浓度三个方面对单糖柱前衍生HPLC的分离效果进行了优化研究.结果表明:单糖进行PMP衍生后,用HCl中和至pH为7.0,能最大限度避免单糖-PMP衍生产物的损失;使用三氯甲烷萃取PMP三次时,能在除去PMP的情况下避免单糖-PMP衍生产物的损失;降低流动相中有机相的比例或提高缓冲液的pH值,有利于色谱峰分离度的提高;提高缓冲盐浓度,有利于保持色谱峰的对称性.

PMP衍生测定低聚木糖含量

目的:采用高效液相-紫外检测器色谱法测定低聚木糖含量。方法:利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生,采用高效液相-紫外检测器色谱仪测定低聚木糖含量。结果:色谱柱:ACE C18(4.6mm×250mm);流动相:乙腈-0.02mol/L乙酸铵溶液(17∶83);柱温:30℃;波长:250nm;流速:1.0mL/min;进样量:5μL。低聚木糖在0.02～0.2mg·mL^(-1)浓度范围内与峰面积积分呈良好的线性关系,回归方程为y=1.1281x+0.0123,R^2=0.9996。结论:建立的方法准确可靠,重复性好,分离度高,灵敏度强且操作简单,可用于测定低聚木糖的含量。

PMP柱前衍生化反应结合多元化学计量法和一测多评法的羊栖菜质量研究

目的:建立区分羊栖菜饮片和配方颗粒的HPLC指纹图谱及一测多评方法,筛选关键差异标志化合物,为提升羊栖菜的质量控制标准提供参考。方法:依据糖类化合物的PMP柱前衍生化反应原理,利用HPLC测定羊栖菜饮片和配方颗粒的指纹图谱;采用系统聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法筛选差异标志成分;以岩藻糖为参照物,建立一测多评法测定羊栖菜饮片和配方颗粒的主要单糖含量。结果:建立的指纹图谱及一测多评方法能有效区分羊栖菜饮片和配方颗粒,以岩藻糖、D-半乳糖、D-葡萄糖以及2个未知化合物(5、10号峰)为差异标志化合物。但配方颗粒中仅D-甘露糖和岩藻糖含量与饮片相比有显著性差异。结论:该研究建立的羊栖菜饮片、配方颗粒指纹图谱和4个单糖成分含量测定方法稳定可靠,可用于羊栖菜饮片和配方颗粒的质量控制。

HPLC检测肠灌流模型中PMP衍生化葡寡糖含量的方法学建立

目的:建立肠灌流模型中1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化葡寡糖含量的检测方法,并进行方法学考察。方法:采用HPLC法测定,色谱条件为,色谱柱:phenomenexC18(250×4.60mm,5μm);流动相:100mMNaAc/乙腈(梯度洗脱);流速:1.0mL·min-1;紫外检测波长245nm;进样量:20μL;柱温:40℃。结果:PMP衍生化葡寡糖在此色谱条件下获得良好分离,肠灌流液、血浆样品及酚红对10种化合物的检测均无影响。结论:该方法准确可靠,重复性良好,为寡糖的吸收研究提供了技术支持。

PMP柱前衍生化-HPLC法分析玛咖多糖的单糖组成

应用水提醇沉法获得玛咖多糖,苯酚-硫酸法测定玛咖多糖含量,PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生法对酸水解的玛咖多糖衍生化,HPLC法分析其单糖组成。结果表明,PMP柱前衍生化-HPLC法精密度、稳定性和重现性实验的相对标准偏差均小于3%,线性实验结果显示在1.50~650.00μg/m L浓度范围内各单糖的相关系数均大于0.999 1,加样回收实验各单糖的回收率均在98.83%~102.82%之间,确定玛咖多糖的单糖组成及摩尔比为m(D-甘露糖):m(葡萄糖):m(D-半乳糖):m(阿拉伯糖)=1:196:6:6。该方法分析玛咖多糖单糖组成简单易行,结果稳定可靠。

啤酒中单糖的衍生化HPLC-ESI-MS测定方法研究

单糖类样品在溶液中非常稳定,难于离子化,不适合于进行ESI MS检测。采用1 苯基 3 甲基 5 吡唑啉酮(PMP)将糖类物质衍生化,HPLC ESI MS在线联用,选择性离子扫描方式对几种啤酒样品中的5种单糖进行了分离检测。检出限可达到80pg。

柱前衍生化HPLC法分析牛奶中乳糖动态水解研究

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)对牛奶中的糖类进行衍生化处理,将其转化成紫外光下具有强吸收的物质,从而能利用高效液相法快速准确地监测牛奶中乳糖酶的动态水解趋势。结果表明,乳糖酶水解牛奶乳糖的最佳时间为3～4 h,并且发现该方法可以直接用于乳糖含量的分析,为低乳糖奶制品的研究开发和检测分析提供参考。

柱前衍生-HPLC法分析酸奶中的还原糖

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化HPLC法，分离检测酸奶发酵过程中乳糖、葡萄糖和半乳糖质量分数的变化。结果表明，利用该法进行色谱分析，三种还原糖均能达到很好的分离，相关系数为0．9997-0．9999；样品回收率为96．52％-98．84％：精密度实验各组分峰面积RSD值在0．55％-1．77％之间；重现性实验各组分峰面积RSD值为1．08％-1．55％；样品于4℃冰箱保存稳定性实验峰面积RsD值可达到0．02％-0．87％。该方法快速、准确、可靠，能够用于酸奶发酵过程中还原糖的定量检测。

柱前衍生高效液相色谱法测定酵母培养物中甘露聚糖的含量

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生化试剂,建立了反相高效液相色谱测定酵母培养物中甘露聚糖的含量方法。样品酵母培养物经均质处理,其中的多糖在酸性条件下水解为单糖,PMP衍生后,以0.1 mol/l pH值5.5乙酸铵缓冲液乙腈(V/V,7030)为流动相,反相色谱柱分离,流速1.0 ml/min,紫外波长250 nm检测。结果表明,甘露糖浓度在1.0~100 mg/l范围内与对应峰面积呈线性关系(R2=0.99)。甘露聚糖添加回收率为96.3%~102.6%,相对标准偏差2.5%,甘露聚糖最低检出限为0.11 mg/l。该方法适用于酵母培养物中甘露聚糖含量的分析检测。

柱前衍生化HPLC法测定黄河滩枣多糖的单糖组成

目的建立PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化HPLC法测定黄河滩枣多糖的单糖组成。方法采用水提醇沉法提取黄河滩枣多糖,多糖水解后进行PMP衍生化,HPLC法测定黄河滩枣多糖的单糖组成及摩尔比,并对等度和梯度洗脱两种模式的测定结果进行分析比较。结果黄河滩枣多糖由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖等六种单糖组成,它们的摩尔比约为0.54∶0.50∶0.27∶2.03∶5.40∶1.00,等度和梯度洗脱测定结果基本一致。结论本实验改进的等度洗脱方式更加简便易行,快速准确,适用于黄河滩枣多糖的单糖组成分析。

柱前衍生化HPLC法测定酵母细胞壁中的甘露聚糖与β-葡聚糖

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立了同时测定酵母细胞壁中甘露聚糖和β-葡聚糖的方法。样品中的多聚糖经盐酸高温水解得到甘露糖和葡萄糖,经PMP衍生后,以0.02 mol/L乙酸铵-乙腈（80.5∶19.5）为流动相等度洗脱,反相C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）分离,紫外检测器（波长250 nm）检测,所测2种单糖的含量通过换算后得到甘露聚糖和β-葡聚糖的含量。结果表明,甘露糖和葡萄糖在10.0-1 000 mg/L质量浓度范围内与对应峰面积呈良好的线性关系,相关系数（r^2）大于0.999。样品在28.0-80.0 mg范围内加标水平的平均回收率为88.1%-91.0%,相对标准偏差（RSD）小于3%,甘露糖和葡萄糖的检出限（LOD）分别为0.10 mg/L和0.08 mg/L。该方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适用于酵母细胞壁样品中甘露聚糖和β-葡聚糖含量的分析测定。

高效液相色谱法测定亚麻纤维果胶单糖衍生条件的优化

采用柱前衍生高效液相色谱法(HPLC),利用紫外检测器对亚麻纤维果胶单糖组成进行测定分析。亚麻纤维果胶经三氟乙酸(TFA)水解,以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作为衍生化试剂进行柱前衍生。亚麻纤维果胶混合单糖衍生的最佳条件为:衍生时间30 min,衍生温度70℃,PMP与单糖物质的量比为5∶1,NaOH与单糖物质的量比为3∶1。在此条件下测定出亚麻纤维果胶由6种单糖组成,其物质的量比为甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=2.95∶4.18∶24.72∶3.87∶10.84∶6.48。

柱前衍生化HPLC法测定香椿子多糖的单糖组成

建立PMP(1-苯基3-甲基-5吡唑啉酮)柱前衍生化HPLC法测定香椿子多糖的单糖组成。先用三氟乙酸水解香椿子多糖,再用PMP柱前衍生,KH2PO4-Na OH缓冲液(p H值6.8)-乙腈(81∶19)等度洗脱,HPLC法测定香椿子多糖中单糖组成以及物质的量比。香椿子多糖主要由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D(+)无水葡萄糖、D-(+)-木糖、L-阿拉伯糖等组成,它们的物质的量比约为0.18∶0.15∶0.08∶0.09∶1.03∶0.83∶1.59。本实验摸索的方法条件适用于研究香椿子多糖中单糖组成。

柱前衍生高效液相色谱法测定多糖类兽药中单糖组分的方法研究

采用柱前衍生高效液相色谱法对酸性、碱性、中性等多种单糖进行1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生优化,得到混合单糖PMP衍生的最佳条件为:反应时间60 min,反应温度70℃,衍生试剂PMP与单糖的最适摩尔比为12∶1,加入的碱与单糖最适摩尔比为6∶1。并在此条件下对水解盐藻多糖进行衍生分析,得到盐藻多糖组分PDS3的单糖组成。

香菇多糖的PMP-HPLC指纹图谱分析与免疫活性的谱效关系研究

研究建立一种柱前1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化液相色谱测定香菇多糖单糖组成的方法,色谱条件为ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色谱柱;流动相为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液-乙睛(体积比80∶20);柱温30℃;检测器为紫外检测器(245 nm);流速为0.8 mL/min。方法学研究表明:方法准确度高,重现性、稳定性好,各单糖组分在一定的浓度范围内具有良好的线性关系(R2≥0.9985),平均加样回收率在80.6%~91.4%(RSD≤5%),可应用于香菇多糖样品的单糖组成分析。通过对81批次香菇多糖样品的分析,构建了基于多糖单糖组成信息的液相色谱指纹图谱,确定了7个共有特征峰,分别为甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖,相似度在0.94以上。此外,运用偏最小二乘回归分析(PLS)关联香菇多糖单糖组成与小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)存活率。结果显示,氨基葡萄糖、核糖和葡萄糖与细胞存活率呈正相关,其中前两种单糖的贡献较大。

柱前衍生法测定岩藻多糖中的岩藻糖含量

建立了岩藻多糖中岩藻糖的测定方法。采用PMP法和高效液相色谱法检测岩藻多糖中岩藻糖的含量。岩藻多糖经三氟乙酸水解后,用PMP进行衍生化,并采用配有二极管阵列检测器的反相高效液相色谱仪进行测定。结果表明,L-岩藻糖在质量浓度1~500μg/mL与色谱峰面积具有良好的线性关系,相关系数为0.999。用该方法进行了精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加标回收率等试验,其RSD分别为0.73%,0.58%,2.68%,5.27%,样品加标的平均回收率为94.7%。该方法测定岩藻糖的含量简便、快捷,结果的稳定性、重复性好,测定结果准确。

GC和HPLC分析北豆根多糖的单糖组成的方法比较

采用GC法和HPLC法对北豆根多糖的单糖组成进行分析比较。采用糖腈乙酸酯衍生化-GC法和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生-HPLC法分别对北豆根多糖的单糖组成进行测定,并评价两种方法的适用性。GC法检测出D-鼠李糖(D-Rha)、D-阿拉伯糖(D-Ara)、D-木糖(D-Xyl)、D-甘露糖(D-Man)、D-葡萄糖(D-Glc)和D-半乳糖(D-Gal);HPLC法检测出D-甘露糖(D-Man)、D-鼠李糖(D-Rha)、D-葡萄糖(D-Glc)、D-阿拉伯糖(D-Ara)、D-半乳糖(D-Gal)、D-木糖(D-Xyl),其中D-阿拉伯糖(D-Ara)和D-半乳糖(D-Gal)的色谱峰重叠。两种方法均检测出6种中性糖组分,对比北豆根多糖的单糖组成分析GC法和HPLC法联用较为适合。

决明子多糖定量分析方法研究

该文以决明子为原料,对决明子多糖的单糖组成进行了研究,同时比较了单一标品和混合标品对多糖测定结果的影响;考察了PVPP/醇沉处理对决明子粗多糖提取物中多酚、蛋白和多糖的影响,并从方法学上验证该方法。结果表明,决明子多糖组成中,单糖摩尔比为甘露糖∶葡萄糖醛酸∶氨基半乳糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖∶阿拉伯糖=43.3∶4.3∶1.2∶6.4∶21.3∶18.8∶4.8。混标标准曲线和葡萄糖标准曲线所校正获得的多糖含量与真实值的相对误差分别为–0.14%和37.75%,即混标标准曲线比葡萄糖标准曲线更适用于校正决明子多糖含量。同时,PVPP处理和醇沉处理对决明子多糖提取液中干扰物质(多酚和蛋白质)分别有吸附和沉降作用。本决明子多糖定量分析方法具有重现性好、精密度高、稳定性好和回收率高等特点(RSD<3%)。该方法可对决明子多糖进行更为准确、快捷的定量检测。

GC和HPLC分析石榴皮多糖的单糖组成方法比较

用GC法和HPLC法对石榴皮多糖的单糖组成进行分析比较。石榴皮多糖经2.0 mol/L的三氟乙酸水解后,用还原乙酰化-GC法和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生-HPLC法分别测定其单糖组成。结果表明,GC法操作步骤繁琐、试剂种类多、耗时长,不利于快速分析;而HPLC法操作简单、试剂种类少、耗时短,工作效率高;两种方法的分析结果在主要中性单糖组成方面基本一致,但对Gal A具有明显差异。总体认为两种方法对石榴皮多糖组成分析结果存在一定的差异。