白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2介导的CaM/CaMK Ⅱ/BDNF信号通路的影响

目的:本文主要探讨白芍提取物对PMS肝气郁证大鼠下丘脑Cav1.2钙通道关键蛋白CACNA1C及其下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和对CaMKⅡ磷酸化的影响,从而明确白芍提取物治疗肝气郁结证的分子作用靶点。方法:利用慢性束缚应激法制备PMS肝气郁证大鼠模型,使用白芍提取物进行药物干预。模型制备成功后检测下丘脑CACNA1C蛋白表达,以及下游信号通路中CaM、BDNF蛋白表达和CaMKⅡ的磷酸化水平。离体培养海马原代神经元,通过KCl激活L型钙通道,检测白芍提取物中的有效成分单体芍药苷对细胞内钙超载的影响。结果:PMS肝气郁证大鼠下丘脑CACNA1C蛋白表达增加,CaMKⅡ磷酸化水平提高,BDNF表达减少,说明白芍提取物可显著改善上述蛋白表达异常的现象,抑制KCl激活的L型钙通道引起的细胞内钙离子浓度的增加。结论:白芍提取物可能是通过调控细胞内Cav1.2,抑制其下游CaM/CaMKⅡ信号通路的活化发挥治疗PMS肝气郁证的作用。

经前舒颗粒对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB表达水平的影响

目的通过研究PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑MAOA和MAOB基因的表达,探讨PMS肝气郁证的微观发病机制及中药经前舒颗粒的作用靶点。方法束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠,用经前舒颗粒干预治疗,运用半定量RT-PCR和Western Blotting方法检测正常组、模型组、给药组大鼠下丘脑区MAOA、MAOB mRNA及其蛋白表达水平;通过单因素方差分析及LSD法统计数据。结果与正常组相比,PMS肝气郁证模型组大鼠MAOA mRNA在下丘脑表达显著升高(P<0.05),蛋白表达极显著升高(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与模型组相比,MAOA mRNA在下丘脑表达降低(P<0.05),蛋白表达显著降低(P<0.01);MAOB mRNA及蛋白在下丘脑表达均无统计学差异(P>0.05);给药组与正常组相比,MAOA、MAOB mRNA及蛋白在大鼠下丘脑中表达均无统计学差异(P>0.05)。结论模型组大鼠与正常组大鼠相比,下丘脑MAOA基因表达升高,通过经前舒颗粒干预后,恢复正常。说明MAOA基因与PMS肝气郁证相关,并且可能是经前舒颗粒治疗该证的作用机制之一。

舒郁胶囊对PMS肝气郁证模型大鼠下丘脑μ-阿片受体的影响

目的:通过观察经前期综合征(PMS)肝气郁证模型大鼠下丘脑中μ-阿片受体(MOR)的蛋白表达,探讨舒郁胶囊治疗PMS肝气郁证的机制。方法:Wistar大鼠56只,随机分为正常组、模型组、舒郁胶囊组(0.408 g·kg-1)和纳洛酮组(0.4mg·kg-1),每组14只,旷场实验和阴道涂片筛选动情周期规律非接受期大鼠进入实验,除正常组,其余各组采用慢性束缚应激法复制PMS肝气郁证模型,旷场实验对模型进行行为学评价,各组大鼠下丘脑采用免疫荧光化学技术(IF)和Western blot分别观察MOR分布及蛋白表达变化。结果:宏观行为学表明,与正常组比较,模型组大鼠旷场总分显著降低(P<0.01);免疫荧光结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑细胞分布排列杂乱且增多,与模型组比较,舒郁胶囊、纳洛酮给药组均得到显著改善;蛋白免疫印迹结果显示,与正常组比较,模型组下丘脑中MOR表达水平显著升高(P<0.01),与模型组比较,舒郁胶囊、纳洛酮给药组MOR表达水平均显著下降(P<0.01)。结论:舒郁胶囊可通过对下丘脑中MOR的拮抗作用而改善PMS肝气郁证的症状,另外,下丘脑中MOR上调可能是PMS肝气郁证的发病机制之一。

5-HTR1A基因在经前期综合征肝气郁证模型大鼠下丘脑区的表达

目的通过研究5-羟色胺受体1A（5．HTRlA）基因在经前期综合征（PMs）肝气郁证模型大鼠下丘脑区的表达，探讨该证的发病机制及药物作用靶点。方法束缚法制备PMS肝气郁证模型大鼠，经前舒颗粒干预，获得正常组、造模组、给药组；运用RT—PCR和WesternBlotting方法检测大鼠下丘脑区5-HTRlAmRNA及其蛋白表达；应用软件SPSS16．0，通过单因素方差分析及LSD法统计数据。结果PMS肝气郁证模型组大鼠与正常组相比，下丘脑5-HTRlAmRNA及蛋白表达均显著降低；经前舒颗粒给药后与造模组相比，表达均显著升高；给药组与正常组相比，表达均无显著差异。结论肝气郁证模型大鼠与正常大鼠相比，下丘脑5-HTRIA基因表达下降，通过经前舒颗粒干预后，恢复正常；说明5-HTRIA基因可能与PMS肝气郁证相关，并且可以作为经前舒颗粒治疗该证的作用靶点。

舒郁胶囊对经前期综合征肝气郁证模型大鼠不同脑区μ-阿片受体基因分布与表达的影响

目的分析大鼠额叶、海马、下丘脑和杏仁核脑区μ-阿片受体(MOR)基因的分布与表达变化,探讨舒郁胶囊的中枢作用机制。方法复制经前期综合征(PMS)肝气郁证大鼠模型并用舒郁胶囊和纳洛酮进行药物干预,利用原位杂交技术和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术分别对大鼠不同脑区MOR基因进行定性和定量检测。结果与正常组大鼠比较,PMS肝气郁证模型组大鼠海马、额叶、下丘脑、杏仁核组织MOR基因过量表达,差异有统计学意义(P<0.05);与PMS肝气郁证模型组大鼠比较,纳洛酮组额叶组织MOR基因表达无改变,差异无统计学意义(P>0.05),舒郁胶囊及纳洛酮药物干预组其他各相应脑区MOR基因表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马、额叶、下丘脑和杏仁核MOR基因表达异常升高可能是PMS肝气郁证的中枢发病机制之一,舒郁胶囊可通过拮抗该受体基因表达而具有抗抑郁样作用。

经前期综合征肝气逆、郁两证大鼠模型血清及不同脑区单胺类神经递质含量分析

目的借助前期研制成功PMS肝气逆、郁两证大鼠模型检测其血清与不同脑区单胺类神经递质含量,探索"肝失疏泄"微观机制并对模型与中医证型关系进行初步分析。方法挑出动情周期非接受期大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、PMS肝气逆证造模组、PMS肝气郁证造模组、PMS肝气逆证造模给药组、PMS肝气郁证造模给药组,肝气逆证大鼠模型以情志刺激为主多因素复合造模法制备,肝气郁证大鼠模型以慢性束缚应激法制备,模型复制成功后肝气逆大鼠模型用经前平颗粒干预,肝气郁证大鼠模型用经前舒颗粒干预。HPLC测定血清及中枢NE、DA、5-HT含量,比较各组差异并进行分析。结果旷场实验中,相较正常对照组大鼠造模后逆模组水平得分、垂直得分及可旷场实验总分均显著增加(P<0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P<0.05),用药后这一趋势得到明显纠正(P<0.05)。肝气逆证模型大鼠不同脑区NE、DA、5-HT含量均有上升趋势;肝气郁证模型大鼠不同脑区DA含量呈下降趋势,5-HT含量显著上升。外周单胺类神经介质变化趋势多与中枢相反。结论肝疏泄太过所致烦躁易怒等表现可能与边缘叶DA水平上升,下丘脑DA、边缘叶5-HT水平下降密切相关;肝气疏泄不及呈现抑郁萎靡等症状可能与下丘脑NE水平上升,下丘脑、边缘叶DA水平下降,5-HT水平上升有密切关系。据此推测,肝主疏泄可能通过调节机体该类活性物质含量而呈现作用;其功能定位为脑中枢,尤其是下丘脑。

经前期综合征肝气逆、郁病证结合模型大鼠外周血和不同脑区性激素及其调节激素含量变化的实验研究

目的:借助前期研制成功的PMS肝气逆、郁两证大鼠模型检测其血清与不同脑区中E2、P、PRL含量,探索"肝失疏泄"的微观机制。方法:挑出动情周期非接受期大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、PMS肝气逆证造模组、PMS肝气郁证造模组、PMS肝气逆证造模给药组、PMS肝气郁证造模给药组。肝气逆证大鼠模型以情志刺激为主多因素复合造模法制备,肝气郁证大鼠模型以慢性束缚应激法制备,模型复制成功后肝气逆大鼠模型用经前平颗粒干预,肝气郁证大鼠模型用经前舒颗粒干预。放射免疫法测定血清及中枢中E2、P、PRL含量,比较各组差异并进行分析。结果:旷场实验中,与正常对照组比较,大鼠造模后逆模组水平得分、垂直得分及可旷场实验总分均显著增加(P<0.05),而郁模组大鼠则显著减少(P<0.05),用药后这一趋势得到明显纠正(P<0.05)。肝气逆证模型大鼠症状呈现其血清中E2和P含量均呈下降趋势,肝气郁证模型大鼠血清中E2和P含量亦较正常对照组明显降低。中枢内激素变化与血清中相反。结论:PMS两证症状产生可能与体内性激素及其调节激素异常波动有关,经前平、经前舒颗粒可分别对外周血及中枢上述指标的异常变化起到调节作用。

经前舒对大鼠海马神经元细胞ERβ蛋白和基因表达的影响

目的观察经前舒颗粒对大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达的影响,探讨经前舒颗粒治疗经前期综合征(PMS)肝气郁证的作用机制。方法以束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,取各处理组血清,对体外培养大鼠海马神经元细胞进行干预;采用蛋白质印迹技术(Westernblot,WB)和半定量RT-PCR技术分别对各组细胞ERβ蛋白和基因表达变化进行检测。结果模型组血清能显著升高大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达水平,westernblot和RT-PCR检测结果均显示经前舒颗粒含药血清能显著改善PMS肝气郁证模型血清干预的大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达水平异常升高的状况。结论大鼠海马神经元中的ERβ是调肝方药经前舒颗粒的作用靶点之一,经前舒颗粒可能通过降低ERβ蛋白和基因的表达水平而发挥治疗作用。

经前期综合征模型大鼠下丘脑和外周血内吗啡肽含量变化的实验研究

目的:检测经前期综合征(PMS)肝气逆、肝气郁证模型大鼠下丘脑及外周血内啡肽(EM)含量变化,观察经前平、经前舒颗粒对PMS肝气逆、肝气郁证的干预作用。方法:以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆、郁证大鼠模型,以经前平、经前舒颗粒干预治疗,采用放射免疫法检测模型大鼠下丘脑及血清EM-1、EM-2的含量。结果:与正常组相比,PMS肝气逆证组下丘脑EM-1含量无显著性变化,血清EM-1含量显著上升(P<0.01);PMS肝气郁证组下丘脑EM-1含量亦无显著性变化,血清EM-1、EM-2含量显著下降;与模型组相比,经前平组血清EM-1、EM-2含量显著性下降(P<0.01),经前舒组血清EM-1、EM-2显著上升。结论:两种病证模型下丘脑EM-1、EM-2的含量变化不明显;PMS肝气逆证大鼠血清EM-1显著性升高,EM-2有上升趋势;PMS肝气郁证大鼠血清EM-1、EM-2含量显著性下降。经前平、经前舒颗粒可分别对外周血中指标的异常变化起到调节作用。