PMX205抗炎作用的体外研究

目的:探讨补体C5a受体拮抗剂PMX205的体外抗炎作用。方法:MTT法检测PMX205对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的毒性。RAW264.7与牙龈蛋白酶(gingipain,G)体外共培养模拟炎症环境,观察PMX205的抗炎效果。实验分为6组:阴性对照组、G组、G+PMX205(0.1、1、5、10mg/L)组,24h后qRT-PCR、ELISA法检测M1型巨噬细胞标志性细胞因子IL-6及TNF-α,M2型标志性细胞因子IL-10和TGF-β1;流式细胞术检测M1型标志性分子CD86及M2型标志性分子CD206。结果:MTT结果显示,PMX205对RAW264.7活力影响较小。qRT-PCR及ELISA结果显示,G组IL-6和TNF-α表达水平较阴性对照组增加;G+PMX205各浓度组的IL-6和TNF-α的表达水平较G组减少,TGF-β1和IL-10表达水平均较G组增加(P<0.01或P<0.05)。流式细胞术结果显示,G组CD86阳性率增加,CD206阳性率下降,G+PMX205组较G组CD86下降,而CD206增加。结论:在体外细胞模型实验中PMX205具有良好的抗炎作用。

PMX205对致敏毒素C5a诱导RAW264.7向破骨细胞分化的影响

目的:探讨PMX205作用下,致敏毒素C5a对RAW264.7破骨细胞分化的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度PMX205对RAW264.7细胞增殖水平的影响;在含核因子受体活化因子配体(RANKL)的破骨细胞诱导液条件下,实验分为3组:阴性对照组、C5a组和C5a+PMX205组,按上述条件培养5 d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法检测各组破骨细胞分化水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组破骨细胞相关基因的表达水平。结果:MTT结果显示,PMX205对RAW264.7细胞的增殖水平无明显抑制作用。TRAP染色和qRT-PCR结果显示:10 ng/mL RANKL可成功诱导破骨细胞形成;与阴性对照组相比,1μmol/L C5a组TRAP阳性多核细胞数目及破骨相关基因:c-fos、NFATc1和TRAF6均显著增多(P<0.01);而与C5a组相比,C5a+1μg/mL PMX205组TRAP阳性多核细胞数目及破骨相关基因的表达明显下调(P<0.01),但仍高于阴性对照组(P<0.01)。结论:PMX205可通过C5a-C5aR轴抑制C5a诱导的RAW264.7破骨细胞分化。