大鼠发育不同时期脊髓中PNP-43的表达

目的 :研究大鼠生后发育不同时期脊髓中PNP -4 3 (周围神经 43kD蛋白 )的表达。方法 :分别取生后一天、三天、一周、两周、一月、三月的SD大鼠脊髓 ,提取总蛋白 ,通过SDS -PAGE和WesternBlot方法检测大鼠生后发育不同时期PNP -4 3的表达。结果 :WesternBlot结果显示 ,发育不同时期大鼠脊髓组织在 43kD处均有阳性反应产物 ,且随鼠龄的增加阳性产物着色加深 ,至一月龄最深 ,三月龄变浅。结论 :PNP -4 3在发育不同时期大鼠脊髓中均有表达 ,且随着鼠龄的增加 ,其表达逐渐增加 ,至一月龄表达量最高 。

大鼠周围神经43kDa蛋白的生化初步分析

目的:提取大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的43kDa蛋白(PNP-43),并对PNP-43进行生化初步分析。方法:纯化抗PNP-43单克隆抗体,将纯化的抗PNP-43单克隆抗体与CNBr-activatedSepharose4B交联,用亲和层析的方法,提取PNP-43,并将提取的PNP-43进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦凝胶电泳(IEF)分析,考马斯亮蓝染色,取SDS-PAGE后染色的43kDa蛋白区带胶条,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱检测(MALDI-TOF-MS),测定肽质量指纹图谱,在相应的蛋白质谱数据库(MS-Fit)中检索。结果:⑴、经层析系统紫外检测,亲和层析后洗脱,在280nm波长处显示一个的紫外吸收峰。⑵、亲和层析获得的蛋白,经SDS-PAGE分析,在43.0kDa标准蛋白位置出现单一蛋白条带。⑶、经IEF分析,PNP-43的等电点(pI)为5.8。⑷、经MALDI-TOF-MS检测,测定肽质量指纹图谱,通过MS-Fit检索未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。结论:用亲和层析的方法,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中表达增强的PNP-43,通过质谱分析和MS-Fit检索提示未发现有与该蛋白完全相同的质谱数据。为进一步深入研究PNP-43的结构与功能提供了科学依据。