嘌呤核苷磷酸化酶-黄嘌呤氧化酶-尿酸酶-过氧化物酶偶联双试剂匀相速率法测定血清5′-核苷酸酶

目的:建立快速、灵敏的血清5′-核苷酸酶(5′-NT)匀相速率法检测新技术。方法:通过酶催化反应动力学体系选择、表面活性剂选择、液体酶稳定条件等关键技术研究,建立了嘌呤核苷磷酸化酶-黄嘌呤氧化酶-尿酸酶-过氧化物酶(PNP-XTO-UAO-POD)偶联可见光匀相速率法测定血清5′-NT体系。结果:该法的线性范围为0.08 U/L^200.0 U/L,平均回收率为100.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为1.1%~2.8%和1.8%~4.3%,与全国临床检验操作规程(第3版)推荐的方法(参考法)比较,其线性回归方程和相关系数分别为Y=0.9892X+0.210,r=0.9980。结论:用PNP-XTO-UAO-POD偶联可见光匀相速率法测定血清血清5′-NT,方法简便、快速,灵敏可靠,适合临床推广应用。

微孔板化学发光分析法测定血清5'-核苷酸酶

目的:建立微孔板化学发光法检测5'-核苷酸酶(5'-NT)新技术。方法:5'-核苷酸酶经嘌呤核苷磷酸化酶-黄嘌呤氧化酶-尿酸酶-过氧化物酶(PNP-XTO-UAO-POD)偶联途径反应产生过氧化氢H2O2,H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与鲁米诺体系反应发光,与标准品比较后,计算出5'-NT的活性。结果:该法线性范围为0.02 U/L～120.8 U/L,平均回收率为98.8%,批内相对标准差(RSD)和批间相对标准差分别为2.2%～3.9%和3.5%～4.9%,与参考方法的线性回归方程和相关系数分别为Y=0.978X+0.084,r=0.9962。结论:用PNP-XTO-UAO-POD偶联化学发光分析法测定血清血清5'-NT,方法简便、快速,灵敏可靠,适合临床推广应用。