PNPLA3和FABP1基因甲基化与代谢相关脂肪性肝病相关性分析

目的 了解乌鲁木齐市代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)患病率情况及PNPLA3与FABP1基因甲基化对其发病的影响。方法 回顾性分析2022年1月—3月新疆医科大学第一附属医院进行体检人群的相关临床资料;从中招募15例MAFLD患者,匹配同期体检15名无肝病既往史健康人群采用甲基化特异PCR方法(MSP法)进行PNPLA3、FABP1基因甲基化检测。采用Point-biserial相关对临床资料及基因表达之间的相关性进行分析。结果 共纳入3 194名体检人群中1081例(33.84%)诊断为MAFLD,其中男性698例(64.57%)、女性383例(35.43%),40~50年龄段人数最多有424例(39.22%),差异均有统计学意义(P<0.001)。病例组PNPLA3基因高甲基化状态2例(13.33%),对照组10例(66.67%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.806,P=0.009);FABP1基因高甲基化状态5例(33.33%);对照组12例(80.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=4.887,P=0.027)。PNPLA3基因甲基化状态与空腹血糖(FPG)(r=-0.385,P<0.05)、甘油三酯(TG)(r=-0.584,P<0.05)呈负相关,高密度脂蛋白(HDL-C)(r=0.651,P<0.001)呈正相关;FABP1基因甲基化状态与尿素(UA)(r=-0.407,P<0.05)、FPG(r=-0.416,P<0.05)、TG(r=-0.565,P<0.05)、总胆固醇(TC)(r=-0.515,P<0.05)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)(r=-0.416,P<0.05)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)(r=-0.473,P<0.05)呈负相关,与HDL-C(r=0.487,P<0.05)呈正相关。结论 乌鲁木齐市MAFLD患病率处于全国高位。MAFLD患者血浆中PNPLA3、FABP1基因启动子区甲基化状态均明显降低,且与FPG、TG、TC、UA、AST、ALT和HDL-C相关,是MAFLD发生、发展的重要机制之一。

PNPLA3rs738409基因多态性与成人非酒精性脂肪性肝病肝纤维化的相关性分析

目的探讨PNPLA3 rs738409基因多态性与成人非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肝纤维化程度的相关性。方法回顾性收集2016年1月至2018年6月于首都医科大学附属北京友谊医院经肝活检诊断为非酒精性脂肪性肝病的成人患者42例,应用Taqman探针分型法测定患者PNPLA3 rs738409的单核苷酸多态性。同时收集患者的一般资料、血液学检查、生化检查、影像学及病理资料。分析PNPLA3 rs738409基因型与NAFLD进展期纤维化的关系。结果PNPLA3 rs738409三种基因型占比CC、CG、GG分别为10例(23.8%)、19例(45.2%)和13例(31.0%)。三种不同等位基因型NAFLD患者的年龄、性别构成比、体重指数、合并症、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酸转肽酶、空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯等比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。GG型患者的血小板计数[(161.4±67.7)×10^9/L vs.(209.0±52.1)×10^9/L,P=0.046]、凝血酶原活动度[(84.9±11.6)%vs.(97.9±18.8)%,P=0.012]均显著低于CC型患者,而肝脏硬度测定值显著高于CC型(17.5±7.8 kPa vs.10.9±6.5 kPa,P=0.043)。组织学方面,GG型患者脂肪变性程度和肝纤维化程度均高于GC型和CC型(P=0.028、0.015)。二元Logistic回归分析显示,在控制性别、年龄、糖尿病后,PNPLA3 rs738409 GG型是进展期纤维化的危险因素(OR=12.83,95%CI:1.69~97.19,P=0.013)。结论PNPLA3 rs738409基因多态性与NAFLD患者肝纤维化程度相关,GG型是进展期纤维化的危险因素。

PNPLA3基因多态性与原发性肝癌遗传易感性的相关性研究

目的:评估PNPLA3 I148M基因多态性与原发性肝细胞癌(HCC)相关性,并探讨其机制。方法:本研究纳入HCC患者67例和健康对照组69例,对照组无肝癌家族史及肝病病史。通过聚合酶链反应(PCR)及基因测序法检测PNPLA3 rs738409基因表型,通过Hardy-weinbeurg遗传平衡定律分析HCC组与对照组各基因型是否具有群体代表。通过字2检验分析HCC组rs738409各基因型的频率分布有无差异。结果:对HCC组及对照组经吻合度检验,各组基因多态性分布均符合Hardy-Weinberg(H-W)平衡法则(P>0.05)。HCC组与对照组148 GG、148 CG、148 CC基因型频率分布差异均有统计学意义(字2=6.30,P<0.05)。结论:rs738409基因表型与原发性肝癌发病风险具有相关性。

人PNPLA3基因启动子转录调控的初步分析

目的构建人PNPLA3基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因裁体,在LO2细胞中比较不同长度启动子片段的活性,为研究PNPLA3基因的转录调控机制提供初步依据。方法对PNPLA3基因5'侧翼区约1 400个碱基进行生物信息学分析,预测其转录调控区域;利用PCR及酶切方法,以人外周血中全基因组DNA为模版扩增不同长度的PNPLA3基因上游启动子区序列,分别构建荧光素酶基因报告载体。瞬时转染LO2细胞,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测各启动子的转录活性。利用在线分析软件预测PNPLA3基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果成功构建5段不同长度的PNPLA3基因上游启动子区的报告载体;在LO2细胞内启动子活性随片段长度变化,表现为当PNPLA3启动子片段从-1015截短到-647,从-647截短至-553,从-553截短至-333时活性变化不大,而从-333截短至-8时活性显著下降(P<0.05);Match分析显示-333～-8片段具有多个转录因子结合位点。结论初步判断-333～-8区是PNPLA3基因的主要转录调控区。

ChREBP及其靶基因PNPLA3在大鼠非酒精性脂肪性肝病发病中的作用

目的:研究碳水化合物反应元件结合蛋白转录因子(carbohydrate responsive element binding protein,ChREBP)及其靶基因含patatin样磷脂酶域3(patatin-like phospholipase domain containing family member A3,PNPLA3)在非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用以及NAFLD的发病机制.方法:将48只200 g±20 g体质量的成年♂SD大鼠,随机分为对照组24只(普通饲料喂养)和模型组24只(高脂饲料喂养),分别于第4周末,第8周末和第12周末处死各组大鼠8只,并进行血清生化的测定;在光镜下观察肝组织病理变化;用免疫组织化学方法检测ChREBP蛋白的表达水平;用RT-PCR技术检测肝脏ChREBP以及PNPLA3基因的mRNA的表达.结果:(1)成功构建NAFLD大鼠模型,光镜下观察可见对照组大鼠肝脏组织结构正常,各项生化指标均在正常范围,肝组织内表达少量ChREBP蛋白;(2)模型组大鼠较肥胖,肝脏明显增大,肝细胞内可见脂滴沉积,血清生化天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)水平升高(P<0.05),空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)及空腹血胰岛素(fasting serum insulin,FINS)水平升高(P<0.05),并随着喂养时间的增加而逐渐增加(P<0.05),而胰岛素敏感指数(insulin sensitive index,ISI)明显下降(P<0.05);(3)模型组大鼠肝组织ChREBP蛋白和ChREBP、PNPLA3 mRNA的表达水平升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0.05),且随造模时间的延长其表达量也增加(P<0.05);(4)相关分析显示,在模型组中,ChREBP mRNA的相对表达量与PNPLA3、血清AST、ALT水平、肝脏炎症活动度计分呈正相关(r=0.409,P<0.05;r=0.498,P<0.05;r=0.677,P<0.01;r=0.729,P<0.01;r=0.566,P<0.01),与ISI呈负相关(r=-0.611,P<0.01).结论:高脂饮食引起ChREBP的表达增强,其可能激活了脂质合成相关基因PNPLA3的表达,并可能通过参与胰岛素抵抗的调控促进脂肪肝的形成.

青岛地区汉族人群PNPLA3 rs738409单核苷酸多态性与冠心病的相关性

目的探讨在青岛地区汉族人群中,PNPLA3 rs738409位点多态性与冠心病的相关性。方法纳入2018年7-12月青岛市市立医院收入院的冠心病患者199例和健康对照组160例。收集受试者血液标本并提取DNA,应用聚合酶链反应(PCR)及飞行时间质谱方法检测rs738409位点的基因型。同时收集受试者的临床资料及生化指标。应用t检验、Wilcoxon秩和检验、χ^2检验及非条件Logistic回归等方法进行统计学分析。结果 PNPLA3 rs738409位点的基因型及等位基因频率在冠心病组和对照组中差异均无统计学意义(χ^2=0.182,P=0.913;χ^2=0.109,P=0.741)。经混杂因素校正后,Logistic回归模型分析显示,与CC基因型携带者相比,携带CG+GG基因型未增加冠心病的发生风险(P> 0.05)。结论在青岛地区汉族人群中,PNPLA3 rs738409位点多态性与冠心病的发病风险无明显相关性。

ChREBP及其靶基因PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是肝细胞内大量甘油三酯聚集而引起的临床病理综合征,肝的组织学改变与酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)相似,但无过量饮酒史.NAFLD包括非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)、NASH相关肝纤维化和肝硬化.目前其详细发病机制尚不清楚,但国内外已有较多关于ChREBP及其靶基因PNPLA3与NAFLD发病关系的研究,证实了ChREBP和PNPLA3与肝内脂肪含量及炎症相关.本文主要综述了ChREBP及其靶基因PNPLA3在NAFLD发病过程中的作用,为脂肪肝的发生和治疗提供更多的理论基础.

山羊PNPLA3基因克隆及序列分析

PNPLA3蛋白属于patatin样磷脂酶家族,能够参与脂肪积累和脂肪动员,且该蛋白与肝脏炎症、肝纤维化密切相关。本研究旨在克隆PNPLA3基因序列并进行生物信息学分析,以简州大耳羊为实验对象,屠宰后,采集皮下脂肪组织,Trizol法提取组织总RNA,利用RT-PCR法克隆山羊PNPLA3基因序列,对所获得的序列进行生物信息学分析。结果显示:克隆得到山羊PNPLA3基因序列1564 bq(GenBank登陆号:MN643056),其中CDS区1344bp,5'UTR234bp,3'UTR49bp,编码447个氨基酸残基;山羊PNPLA3氨基酸序列与绵羊(Ovis aries)、牛(Bos taurus)、大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)的氨基酸序列相似性分别达到83.89%、81.21%、56.38%、56.15%、58.42%;山羊PNPLA3蛋白与绵羊亲缘关系最近,而与原鸡(Gallus gallus)的亲缘关系较远;山羊PNPLA3蛋白为疏水性酸性蛋白,大部分由α螺旋和无规则卷曲构成,分别占比44.07%、39.6%,有18个丝氨酸、3个苏氨酸、3个酪氨酸磷酸化位点,无信号肽剪切位点,有2个跨膜结构域,具有1个PNPLA家族同源结构域,STRING数据库检索到PNLIP、PNPLA2、LIPC、PNLIPRP3等蛋白可能与PNPLA3蛋白存在相互作用关系。本实验成功克隆出山羊PNPLA3基因,为进一步阐明PNPLA3基因在调控山羊脂质代谢中的作用及分子机制提供基础资料。

PNPLA3、Sort1基因多态性与酒精性肝病易感性的关系

目的探讨PNPLA3、Sort1基因多态性与酒精性肝病易感性的关系。方法选取2017年1月至2018年3月于我院治疗的已确诊酒精性肝病患者110例为病例组,同时选取长期大量饮酒但未被诊断酒精性肝病患者100例为无肝病嗜酒组、健康自愿者200例为对照组,检测各组PNPLA3、Sort1基因多态性。结果 PNPLA3基因rs738409位点检测出CC、CG、GG三种基因型,Sort1基因rs646776位点检测出CC、TC、TT三种基因型;病例组PNPLA3基因GG型和等位基因G的比例分布为23.64%和45.45%,明显高于无肝病嗜酒组和对照组(P<0.05);各组Sort1基因多态性分布差异比较无统计学意义(P>0.05);病例组不同PNPLA3基因型患者甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(High density liptein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Chesterol,LDL-C)比较差异无统计学意义(P>0.05);病例组Sort1基因TT型患者TG为1.61±0.30mmol/L,高于CC+CT型患者,而HDL-C为1.80±0.65mmol/L,低于CC+CT型患者(P<0.05)。结论 PNPLA3基因多态性与酒精性肝病易感性有一定关系,Sort1基因多态性与酒精性肝病易感性无明显关系,但与患者的血脂水平具有一定的相关性。

PNPLA3基因 I148M多态性对肝癌细胞株Huh-7细胞周期的影响

目的 探讨PNPLA3基因I148M多态性对人肝癌细胞株Huh-7细胞周期的影响及其相关机制. 方法 利用构建成功的稳定表达PNPLA3基因野生型和PNPLA3基因I148M突变型的Huh-7细胞株,以空载体细胞为对照,流式细胞术检测转染的Huh-7细胞周期,Western blot方法检测细胞周期调节因子Cyclin D1、p53的蛋白表达情况.荧光定量PCR检测Cyclin D1、p53的mRNA表达情况.两组间比较用独立样本t检验. 结果 三组间各细胞周期细胞所占比例的两两比较显示野生型组细胞周期G1期（58.53％±0.35％）,G2/M期（24.87％±0.60％）,S期（16.60％±0.26％）参数与对照组对应各期（G1期59.27％±0.15％;G2/M期24.23％±0.31％;S期16.50％±0.26％）之间差异无统计学意义（P＞ 0.05）;突变型组与野生型组相比,G1期细胞比例减少（突变型G1期38.37％±0.21％,P＜0.05）,S期与G2/M期细胞比例相应增加（突变型S期27.47％±0.35％,G2/M期34.17％±0.15％,P＜0.05）.与对照组相比,突变型组的p53 mRNA相对表达量明显上调（对照组1.06±0.41,突变型组6.54±0.34;P＜0.05）;野生型组p53 mRNA相对表达量差异无统计学意义（1.66±0.30,P＞0.05）.Cyclin D1 mRNA各组中的相对表达量差异均无统计学意义（对照组1.00±0.10,野生型组1.06±0.03,突变型1.11±0.04;P＞0.05）.结论 PNPLA3基因I148M多态性通过上调p53的表达引起Huh-7细胞周期紊乱.

非酒精性脂肪肝相关基因多态性的研究进展

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是全球肝脏疾病最常见的原因之一,定义为在无显著饮酒史和其他肝脏疾病的患者中存在≥5%的肝细胞脂肪变性。目前,在全球范围内,NAFLD发病率正以惊人的速度在增长,但其具体的发病机制尚不完全清楚。NAFLD发病机理中,最引人注目的线索来自于人类遗传学。全基因组研究表明,Patatin样磷脂酶域3(PNPLA3)、跨膜6超家族成员2(TM6SF2)、载脂蛋白C3(APOC3)、跨溶血脂酰肌醇酰基转移酶1(MBOAT7)和葡萄糖激酶调节蛋白(GCKR)中不同的单核苷酸多态性(SNPs)对NAFLD的发生和预后有相当大的影响。本文就近年来NAFLD遗传易感性中的5种基因的多态性展开综述,以期对该疾病的发病机制提供新的见解以及对临床提供新的治疗方向。

基因多态性与非酒精性脂肪性肝病相关性研究

目的探讨PNPL43rs738409基因多态性与非酒精性脂肪性肝病（non—alcoholicfattyliverdiseas@，NAFLD）发生的关系。方法利用计算机在万方数据库、中国全文期刊数据库和维普数据库、Embase和Pubmed数据库中检索PNPLA3rs738409基因多态性与NAFLD发生的相关文献，并应用RevMan5．0软件对符合人选标准的文献进行异质性检验和效应值合并，同时进行敏感性分析和偏倚评估。结果纳入符合条件的相关文献11篇，共计NAFLD组1069例，对照组2127例。根据异质性检验结果，采用相应的效应模型进行合并分析。结果PNPLA3rs738409位点GC、CC、GC＋CC基因型与NAFLD的合并OR值（95％a）分别为0．63（0．36—1．12）、0．22（0．11～0．43）、0．50（0．15～1．66），Z=1．57、4．43、1．13，P〉0．05、〈0．05、〉0．05。各研究的敏感性分析较稳定且无发表偏倚。结论PNPLA3rs738409CC基因型与NAFLD的发生密切相关。