HPLC法同时测定人血浆中利奈唑胺及其代谢物PNU-142300和PNU-142586的血药浓度

目的建立高效液相色谱法同时测定人血浆中利奈唑胺及其主要代谢物PNU-142300和PNU-142586浓度,用于危重症患者血药浓度监测。方法以氯霉素为内标,酸化乙腈(含体积分数0.1%甲酸)为蛋白沉淀剂,双溶剂流动相为A乙腈、B枸橼酸(0.1 mol·L^(-1))-磷酸氢二钠(0.2 mol·L^(-1))缓冲溶液(pH 3.0),色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速0.5 mL·min^(-1),梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量20μL。结果利奈唑胺在0.5~40μg·mL^(-1)的浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),定量下限为0.5μg·mL^(-1),检测限为0.1μg·mL^(-1);PNU-142300和PNU-142586在0.5~20μg·mL^(-1)的浓度范围内线性关系良好(r=0.9998和r=0.9996),定量下限为0.5μg·mL^(-1),检测限为0.2μg·mL^(-1)。10例重症患者中肾功能不全患者血浆利奈唑胺及代其谢物PNU-142300和PNU-142586暴露量分别为肾功能正常患者的3.62、1.88和2.30倍,且利奈唑胺及其代谢物暴露量与血小板减少和贫血间具有较强的相关性。结论该方法操作简便,灵敏、准确度高,可用于重症患者利奈唑胺及其代谢物PNU-142300和PNU-142586临床血药浓度监测和不良反应相关性研究。

PNU-282987对颞叶癫痫模型大鼠认知功能的影响及机制

目的研究特异性α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂PNU-282987对颞叶癫痫(TLE)模型大鼠认知功能的影响及机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、PNU-282987组(3 mg/kg)和甲基牛扁亭(MLA)+PNU-282987组(6 mg/kg MLA+3mg/kgPNU-282987),每组15只。除对照组之外,其余各组大鼠均制备TLE模型。造模成功后,各组大鼠腹腔注射相应药物或生理盐水,每天1次,连续2周。观察大鼠癫痫发作行为并进行评分,记录发作持续时间;检测大鼠认知功能;观察海马组织CA1区神经元病理学形态;检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β水平;检测海马组织中离子钙接头蛋白1(IBA-1)阳性表达和α7nAChR、核因子κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平。结果与模型组比较,PNU-282987组大鼠癫痫评分和发作持续时间,海马组织中IBA-1阳性细胞数量和TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著减少/降低(P<0.05);逃避潜伏期时间显著缩短(P<0.05),原平台象限停留时间及穿越平台次数均显著增加(P<0.05);海马组织CA1区神经元损伤明显减轻;海马组织中α7nAChR蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与PNU-282987组比较,MLA+PNU-282987组大鼠上述指标均显著逆转(P<0.05)。结论PNU-282987可改善TLE模型大鼠的认知功能障碍,其机制可能是通过激活α7nAChR/NF-κB信号通路,抑制小胶质细胞介导的炎症反应,进而减轻海马神经元损伤。

PNU-282987对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡和学习记忆能力的影响

研究PNU-282987对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用和可能机制。建立体内大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)损伤模型,SD大鼠44只随机分为4组:假手术组、模型对照组、PNU-282987低剂量(1.2 mg/kg)和PNU-282987高剂量(2.4 mg/kg)治疗组。Y-型电迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,并检测大鼠脑梗死面积、脑含水量和神经功能评分,苏木精-伊红(H&E)染色观察脑组织病理学改变,TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果显示,治疗组较模型对照组学习记忆能力明显改善,且治疗组可显著降低缺血再灌注后大鼠脑梗死面积、脑含水量和神经行为学评分,同时发现PNU-282987高剂量(2.4 mg/kg)能够改善缺血脑组织病理学损伤,抑制神经元凋亡。本研究提示PNU-282987可提高脑缺血再灌注损伤后大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制神经元凋亡有关。

α7nAChR激动剂和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织IL-1β、IL-6和TNF-α作用的比较

目的:比较α7nAChR激动剂(PNU-282987)和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织IL-1β、IL-6和TNF-α的影响。方法:32只健康清洁级SD大鼠(200～250g)随机分为4组(n=8):S组(假手术组)、M组(缺血/再灌注组)、PM组(模型+PNU-282987组)、UM组(模型+乌司他丁组)。建立肠缺血75min再灌注2h损伤模型。所有大鼠均于肠系膜上动脉开放后2h处死,取标本进行肺组织的病理学检查;采用ELISA法测定肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度。结果:与S组比较,M组肺组织损伤明显加重,IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度均升高,且有统计学意义(P<0.05);与M组比较,PM组和UM组肺组织损伤明显减轻,IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度均下降,且有统计学意义(P<0.05);PM组和UM组之间无明显差异。结论:α7nAChR激动剂(PNU-282987)和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的产生具有相似的抑制作用。

超高效液相色谱串联质谱法同时测定人血清中利奈唑胺及其代谢产物PNU-142300的浓度

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定血清中利奈唑胺及羟乙基甘氨酸代谢产物(PNU-142300)的浓度,并用于重症肺炎患者血药浓度监测。方法以d3-利奈唑胺为内标,血清样品采用乙腈沉淀蛋白,色谱柱Acquity UPLC BEH C18 column色谱柱(50.0 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相:0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速:0.4 mL·min^(-1),柱温:40℃;进样量:5μL。采用电喷雾电离源,正离子多反应方式监测。考察该方法的专属性、标准曲线、精密度、准确度、提取回收率、基质效应和稳定性。将该分析方法应用于不同肾功能状态的重症肺炎患者利奈唑胺及PNU-142300含量测定。结果利奈唑胺及PNU-142300均在0.1~40.0μg·mL^(-1)的浓度范围内线性关系良好,准确度相对误差(RE)范围为-8.05%~8.33%,日内、日间精密度相对标准差(RSD)分别≤4.33%和≤7.73%。利奈唑胺、PNU-142300的提取回收率在94.37%~102.92%范围,不受基质效应的影响,稳定性良好。肾功能不全组利奈唑胺及PNU-142300的中位谷浓度分布是肾功能正常组的2.15和3.89倍。结论本方法快速、简单、准确,适用于不同肾功能状态患者血清中利奈唑胺及其代谢产物PNU-142300浓度的测定。