PNU-282987对颞叶癫痫模型大鼠认知功能的影响及机制

目的研究特异性α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂PNU-282987对颞叶癫痫(TLE)模型大鼠认知功能的影响及机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、PNU-282987组(3 mg/kg)和甲基牛扁亭(MLA)+PNU-282987组(6 mg/kg MLA+3mg/kgPNU-282987),每组15只。除对照组之外,其余各组大鼠均制备TLE模型。造模成功后,各组大鼠腹腔注射相应药物或生理盐水,每天1次,连续2周。观察大鼠癫痫发作行为并进行评分,记录发作持续时间;检测大鼠认知功能;观察海马组织CA1区神经元病理学形态;检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β水平;检测海马组织中离子钙接头蛋白1(IBA-1)阳性表达和α7nAChR、核因子κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平。结果与模型组比较,PNU-282987组大鼠癫痫评分和发作持续时间,海马组织中IBA-1阳性细胞数量和TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著减少/降低(P<0.05);逃避潜伏期时间显著缩短(P<0.05),原平台象限停留时间及穿越平台次数均显著增加(P<0.05);海马组织CA1区神经元损伤明显减轻;海马组织中α7nAChR蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与PNU-282987组比较,MLA+PNU-282987组大鼠上述指标均显著逆转(P<0.05)。结论PNU-282987可改善TLE模型大鼠的认知功能障碍,其机制可能是通过激活α7nAChR/NF-κB信号通路,抑制小胶质细胞介导的炎症反应,进而减轻海马神经元损伤。

PNU-282987对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡和学习记忆能力的影响

研究PNU-282987对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用和可能机制。建立体内大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)损伤模型,SD大鼠44只随机分为4组:假手术组、模型对照组、PNU-282987低剂量(1.2 mg/kg)和PNU-282987高剂量(2.4 mg/kg)治疗组。Y-型电迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,并检测大鼠脑梗死面积、脑含水量和神经功能评分,苏木精-伊红(H&E)染色观察脑组织病理学改变,TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果显示,治疗组较模型对照组学习记忆能力明显改善,且治疗组可显著降低缺血再灌注后大鼠脑梗死面积、脑含水量和神经行为学评分,同时发现PNU-282987高剂量(2.4 mg/kg)能够改善缺血脑组织病理学损伤,抑制神经元凋亡。本研究提示PNU-282987可提高脑缺血再灌注损伤后大鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制神经元凋亡有关。

PNU282987对异丙肾上腺素所致小鼠心脏重塑的保护作用

目的通过建立异丙肾上腺素所致小鼠心脏重塑模型,观察PNU282987保护心脏的作用。方法连续7 d皮下注射异丙肾上腺素(ISO),诱导小鼠心脏重塑模型,同时腹腔给予PNU282987,检测小鼠心脏重量指数、血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性,观察心肌病理形态学的改变;检测心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,通过Western blot测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果与正常对照组相比,异丙肾上腺素组心脏重量指数增加,血清LDH和CK水平显著升高,心肌SOD活性下降,MDA含量增加,心肌组织中iNOS蛋白表达增加;与模型组比较,PNU282987可显著降低心脏重量指数、血清LDH和CK水平,增加心肌SOD活性,降低心肌MDA含量,下调iNOS表达。结论 PNU282987可能通过清除氧自由基,降低iNOS的表达,保护异丙肾上腺素导致的小鼠心脏重塑。

PNU282987对小鼠心脏重塑的改善作用及对JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂PNU282987对小鼠心脏重塑的改善作用及对Janus激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法:将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、普萘洛尔组(阳性对照,灌胃40 mg/kg)和PNU282987低、中、高剂量组(腹腔注射0.5、1.0、3.0 mg/kg),每组10只。除正常对照组外,其余各组小鼠皮下注射异丙肾上腺素(ISO,30 mg/kg)7天以复制心脏重塑模型;各给药组小鼠均于ISO注射30 min后给予相应药液,每天1次,连续7天。末次给药12 h后,检测各组小鼠左室射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS),计算全心质量指数(HMI),观察其心肌组织形态学特征,测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量和细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)蛋白表达水平,检测心肌组织中磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠EF、FS均显著降低,HMI,LDH、CK、TNF-α、IL-6含量,ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),心肌间质蓝色胶原沉积明显,纤维化程度较重。与模型组比较,PNU282987中、高剂量组和普萘洛尔组小鼠EF、FS均显著升高,HMI(PNU282987中剂量组除外),LDH(PNU282987中剂量组除外)、CK、TNF-α、IL-6含量,ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著降低(P<0.05或P<0.01),心肌间质蓝色胶原沉积明显减少,心肌纤维化程度明显降低;而PNU282987低剂量组小鼠上述指标变比较差异无明显变化(P>0.05)。结论:PNU282987可改善小鼠的心脏重塑,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

α7nAChR激动剂和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织IL-1β、IL-6和TNF-α作用的比较

目的:比较α7nAChR激动剂(PNU-282987)和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织IL-1β、IL-6和TNF-α的影响。方法:32只健康清洁级SD大鼠(200～250g)随机分为4组(n=8):S组(假手术组)、M组(缺血/再灌注组)、PM组(模型+PNU-282987组)、UM组(模型+乌司他丁组)。建立肠缺血75min再灌注2h损伤模型。所有大鼠均于肠系膜上动脉开放后2h处死,取标本进行肺组织的病理学检查;采用ELISA法测定肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的浓度。结果:与S组比较,M组肺组织损伤明显加重,IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度均升高,且有统计学意义(P<0.05);与M组比较,PM组和UM组肺组织损伤明显减轻,IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度均下降,且有统计学意义(P<0.05);PM组和UM组之间无明显差异。结论:α7nAChR激动剂(PNU-282987)和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的产生具有相似的抑制作用。

α7nAChR激动剂对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨α7n ACh R激动剂对同种异体大鼠左肺移植后缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及其机制。方法采用改良三袖套法技术复制同种异体大鼠左肺移植模型,将雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、生理盐水处理的I/R组(B组)和α7n ACh R激动剂处理组(C组)。受体移植肺再灌注4 h后阻断右肺门5 min,测量动脉血氧分压(Pa O_2)及动脉血二氧化碳分压(Pa CO_2);测量移植肺肺组织湿/干重量比率(W/D);采用ELISA法测移植肺中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量。结果与A组比较,B组Pa O_2下降、Pa CO_2升高,肺组织W/D值升高,TNF-α及IL-6含量升高(P<0.05),差异有统计学意义。与B组比较,C组Pa O_2上升、肺组织W/D下降,TNF-α及IL-6含量降低(P<0.05),差异有统计学意义;Pa CO_2测定结果两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论α7n ACh R激动剂对大鼠肺移植缺血再灌注损伤具有保护作用,能够改善移植肺的功能,其作用机制可能与抗炎作用有关。

PNU介导Seipin调控BV2细胞降解Aβ寡聚体的机制研究

目的探索在β-淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体处理的BV2小胶质细胞模型中α7烟碱型乙酰胆碱受体的激动剂PNU282987(PNU)对Seipin蛋白表达及其介导自噬的影响。方法采用CCK8法检测不同浓度Aβ处理的BV2细胞的存活率筛选Aβ浓度;设置正常组(未做任何处理)和Aβ组(Aβ孵育24 h),采用Western blot法检测细胞经Aβ处理后Seipin蛋白的表达水平;设置Aβ组(Aβ孵育24 h)、Aβ+PNU组(先加入PNU处理18 h、再加入Aβ孵育24 h),采用Western blot法检测Aβ的表达水平;设置正常组(未做任何处理)、PNU组(PNU处理18 h),采用Western blot检测Seipin、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1的表达;将合成的RNAi慢病毒感染BV2细胞,设置阴性对照组(Negative control,NC)、靶向Seipin小干扰RNA(Small interfering RNA;si-Seipin)组,观察Seipin被干扰情况;设置NC+Aβ组(加入NC和Aβ共同孵育)、NC+Aβ+PNU组(加入NC、Aβ和PNU共同孵育)及si-Seipin+Aβ+PNU组(加入si-Seipin、Aβ和PNU共同孵育),采用Western blot检测Aβ和LC3的表达。结果CCK8结果显示随着Aβ浓度的增加,BV2细胞存活率逐渐降低,浓度为10μmol/L时、细胞存活率为70%,故选择该Aβ浓度为造模浓度;Western blot结果显示,与正常组相比,Aβ处理的BV2细胞Seipin蛋白表达水平下降(P<0.05);与Aβ组相比,Aβ+PNU组BV2细胞中Aβ蛋白表达水平明显减少(P<0.05);与正常组相比,PNU组BV2细胞中Seipin、LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平升高(P<0.05);与NC组相比,si-Seipin组BV2细胞中Seipin蛋白水平下降(P<0.05);与NC+Aβ组相比较,NC+Aβ+PNU组BV2细胞中Aβ表达水平明显降低、LC3-Ⅱ表达水平明显升高(P<0.01);与NC+Aβ+PNU组比较,si-Seipin+Aβ+PNU组BV2细胞中Aβ表达水平明显升高、LC3-Ⅱ表达水平明显降低(P<0.01)。结论Aβ处理BV2细胞后Seipin降低,PNU能够抑制Aβ的表达,其机制可能与PNU上调Seipin增强BV2细胞的自噬、降解Aβ有关。

HPLC法同时测定人血浆中利奈唑胺及其代谢物PNU-142300和PNU-142586的血药浓度

目的建立高效液相色谱法同时测定人血浆中利奈唑胺及其主要代谢物PNU-142300和PNU-142586浓度,用于危重症患者血药浓度监测。方法以氯霉素为内标,酸化乙腈(含体积分数0.1%甲酸)为蛋白沉淀剂,双溶剂流动相为A乙腈、B枸橼酸(0.1 mol·L^(-1))-磷酸氢二钠(0.2 mol·L^(-1))缓冲溶液(pH 3.0),色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速0.5 mL·min^(-1),梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量20μL。结果利奈唑胺在0.5~40μg·mL^(-1)的浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),定量下限为0.5μg·mL^(-1),检测限为0.1μg·mL^(-1);PNU-142300和PNU-142586在0.5~20μg·mL^(-1)的浓度范围内线性关系良好(r=0.9998和r=0.9996),定量下限为0.5μg·mL^(-1),检测限为0.2μg·mL^(-1)。10例重症患者中肾功能不全患者血浆利奈唑胺及代其谢物PNU-142300和PNU-142586暴露量分别为肾功能正常患者的3.62、1.88和2.30倍,且利奈唑胺及其代谢物暴露量与血小板减少和贫血间具有较强的相关性。结论该方法操作简便,灵敏、准确度高,可用于重症患者利奈唑胺及其代谢物PNU-142300和PNU-142586临床血药浓度监测和不良反应相关性研究。

超高效液相色谱串联质谱法同时测定人血清中利奈唑胺及其代谢产物PNU-142300的浓度

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定血清中利奈唑胺及羟乙基甘氨酸代谢产物(PNU-142300)的浓度,并用于重症肺炎患者血药浓度监测。方法以d3-利奈唑胺为内标,血清样品采用乙腈沉淀蛋白,色谱柱Acquity UPLC BEH C18 column色谱柱(50.0 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相:0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速:0.4 mL·min^(-1),柱温:40℃;进样量:5μL。采用电喷雾电离源,正离子多反应方式监测。考察该方法的专属性、标准曲线、精密度、准确度、提取回收率、基质效应和稳定性。将该分析方法应用于不同肾功能状态的重症肺炎患者利奈唑胺及PNU-142300含量测定。结果利奈唑胺及PNU-142300均在0.1~40.0μg·mL^(-1)的浓度范围内线性关系良好,准确度相对误差(RE)范围为-8.05%~8.33%,日内、日间精密度相对标准差(RSD)分别≤4.33%和≤7.73%。利奈唑胺、PNU-142300的提取回收率在94.37%~102.92%范围,不受基质效应的影响,稳定性良好。肾功能不全组利奈唑胺及PNU-142300的中位谷浓度分布是肾功能正常组的2.15和3.89倍。结论本方法快速、简单、准确,适用于不同肾功能状态患者血清中利奈唑胺及其代谢产物PNU-142300浓度的测定。