子宫内膜癌患者POLQ样蛋白解旋酶的表达及临床意义

目的探讨子宫内膜癌(EC)患者POLQ样蛋白解旋酶(HELQ)的表达及临床意义。方法选取EC患者、子宫内膜不典型增生患者及正常子宫内膜女性分别作为EC组(n=37)、增生组(n=43)及正常组(n=30),取3组研究对象的子宫内膜组织制成石蜡切片,采用苏木精-伊红染色法(HE)、免疫组织化学法(IHC)分别检测3组研究对象子宫内膜组织的病理学特征、HELQ蛋白表达,采用Envision法检测EC组患者子宫内膜组织的增殖抗原指数(Ki67)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达;比较HELQ阳性表达和HELQ阴性表达的EC患者肿瘤分化程度、国际妇产科协会(FIGP)分期、肌层浸润深度、淋巴结转移及脉管浸润差异;通过门诊复诊或电话随访EC组患者术后生存情况,采用Cox回归模型和受试者工作特征曲线分析HELQ表达对EC患者术后死亡的影响及预测效能,采用Kaplan-Meier法比较HELQ阳性和阴性的EC患者的生存曲线。结果EC组患者HELQ阳性率较正常组、增生组低(P<0.05);HELQ阴性组EC患者肌层浸润深度>1/2肌层、脉管侵袭比率、Ki67阳性率较HELQ阳性组高(P<0.05),PR阳性率较HELQ阳性组低(P<0.05);校正协变量后,HELQ表达不是EC患者死亡预后发生的独立影响因素(P>0.05);HELQ、HELQ×Ki67、HELQ×PR及HELQ×Ki67×PR预测EC患者死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.642、0.711、0.676及0.725,但P>0.05。结论HELQ表达可能与EC的发生、发展及死亡有关。

染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因致瘤机制研究进展

染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新近被证实与在许多实体瘤中表达增多的致癌基因,它定位于第1号染色体q21区。CHD1L在肝细胞癌和其他肿瘤中的功能性研究提示,该基因在肿瘤形成过程中可以引起细胞增殖、调节G1/S过渡期并且可以抑制细胞凋亡。CHD1L活化的潜在机制可能是通过结合凋亡蛋白Nur77,或通过上调CHD1L调控的靶基因(如ARHGEF9、SPOCK1或TCTP)受体以激活蛋白激酶B通路,从而干扰细胞死亡程序。CHD1L目前已经被认为是一种新的可独立评价一些实体性肿瘤进展、预后以及生存率的生物标志物。现有的对CHD1L的认识在将来也许可以激励大家进行对一些特定肿瘤的靶向治疗研究。

人源解旋酶样转录因子的表达、纯化和功能研究

目的:解旋酶样转录因子(HLTF)在人体细胞的DNA复制压力应对中发挥重要作用,对其结构和功能的研究需要大量、高纯度且折叠正确的蛋白质。方法:通过优化HLTF基因的密码子偏好,构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统;通过亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法纯化HLTF;采用体外实验研究HLTF的生化活性。结果:成功构建HLTF蛋白的大肠杆菌表达系统,通过一个4步的纯化,获得高纯度的HLTF蛋白质,体外功能实验表明大肠杆菌表达的HLTF具有完整的生化活性,提示蛋白折叠正确。本研究发现HLTF的泛素连接酶活性对底物与泛素的连接方式有较大的容忍度。结论:建立了一种高效制备大量、高纯度且折叠正确的HLTF的方法,为深入理解其泛素连接酶活性提供线索,为其结构和功能研究奠定基础。

隔药饼灸调节大鼠免疫抑制机制的转录组测序分析

背景:免疫抑制会导致机体免疫功能受损,加重病情。隔药饼灸能有效调节机体免疫功能,提高机体免疫力,但其调节机制目前仍不清楚。目的:基于转录组学的生物信息学技术对隔药饼灸干预的免疫抑制模型大鼠进行测序,探究隔药饼灸调控免疫的机制。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组和隔药饼灸组,每组8只,模型组与隔药饼灸组采用腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制模型,35 mg/kg,连续3 d,造模结束后空白组与模型组不做干预,隔药饼灸组在大鼠中脘、神阙、关元及足三里穴位进行艾炷与药饼结合的隔药饼灸干预,连续10 d,1次/d,干预结束后次日取材。取各组大鼠外周血进行白细胞数量检测;采用Illumina测序平台进行RNA-seq,筛选差异基因,结合GO与KEGG数据库,对差异基因进行生物信息学相关分析。结果与结论:①与空白组比较,模型组白细胞数量显著减少(P<0.001)。②RNA-seq共筛选出模型组与空白组间差异基因3026个,其中1565个上调、1461个下调,隔药饼灸组与模型组间差异基因535个,其中280个上调、255个下调。③韦恩图分析获得模型组与空白组159个下调基因经隔药饼灸干预后上调,蛋白互作网络分析获得Oasl,Oas2,Isg15,Herc6,Mx2,Helz2,Mx1,Syk,Hspa1a及Ret等10个核心靶点;④GO与KEGG分析隔药饼灸调节机体的机制有免疫应答途径、病毒相关、血管新生和自身免疫系统等通路。⑤上述结果证实,实验筛选出隔药饼灸干预免疫抑制与Oasl,Oas2,Isg15,Herc6,Mx2,Helz2及Mx1靶点有明显关联,并且在免疫应答、病毒相关及血管新生等通路中发挥调控作用。

染色质解旋酶DNA结合蛋白1样调控三阴性乳腺癌细胞对铂敏感性的作用及机制

目的观察染色质解旋酶DNA结合蛋白1样(CHD1L)调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞对铂(DDP)敏感性的作用并探索相关机制。方法收集212例乳腺癌患者和53例晚期TNBC患者组织标本,免疫组织化学法检测CHD1L表达水平,分析CHD1L表达与患者临床病理特征及对铂化疗疗效的相关性;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3试剂盒和蛋白质印迹法(Western blot)探究相关机制。组间比较采用t检验或χ^(2)检验。结果CHD1L在乳腺癌组织中表达高于癌旁组织(54.25%比18.40%,χ^(2)=58.90,P<0.01)且与高组织学分级(67.88%比29.33%,χ^(2)=29.02,P<0.01)和高细胞核增殖抗原(Ki-67)指数(64.17%比41.30%,χ^(2)=10.97,P<0.01)相关,其在TNBC亚型表达最高(68.18%);CHD1L阴性的TNBC晚期患者接受铂化疗的临床获益高于阳性患者(77.78%比42.86%,χ^(2)=4.52,P<0.05);CHD1L敲低后TNBC细胞存活和凋亡水平差异无统计学意义,但在DDP作用下敲低细胞存活率低于敲低前(97.00±2.00比43.67±2.52,t=28.74,P<0.05)且凋亡增加(0.87±0.21比4.33±0.60,t=-9.42,P<0.05),且磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白在DDP作用下表达下调。结论CHD1L可能通过PI3K/Akt/NF-κB通路调控TNBC细胞对DDP的疗效。

CHD1L在恶性肿瘤中的作用与机制研究进展

恶性肿瘤的发生发展与细胞增殖、凋亡或其他生物学过程中关键的癌症相关基因密切相关。染色质结构域解旋酶/ATP酶DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新发现位于Chr1q21的致癌基因。CHD1L在许多人类正常组织中均有表达,且在肝癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌和神经胶质瘤等多种人类恶性肿瘤组织中高表达。CHD1L作为恶性肿瘤发生发展的促进因子,影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡和自噬等生物学过程,且其高表达与恶性肿瘤的不良预后密切相关。CHD1L在转录调控、维持染色体完整性和DNA修复中也发挥着重要作用。本文就CHD1L在恶性肿瘤中的作用及其机制研究进展进行综述,以期为CHD1L成为恶性肿瘤潜在标志物和临床治疗的新靶点提供参考。

HELQ对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨POLQ样蛋白解旋酶(HELQ)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的影响及作用机制。方法将体外培养的人源骨肉瘤细胞系U2-OS、143B随机分为Lv-HELQ组、NC组、Lv-sh HELQ组,分别转染Lv-HELQ、Lv-Negative、Lv-sh HELQ慢病毒载体。转染48 h时,采用Western blotting法检测HELQ蛋白表达,结果显示两种细胞Lv-HELQ组HELQ蛋白相对表达量均高于NC组,Lv-sh HELQ组均低于NC组,组间比较P均<0.05,提示HELQ转染成功。三组(两种细胞)转染48 h时,采用CCK8法检测细胞增殖情况(光密度值),采用Wound healing法检测细胞迁移率,采用Transwell invasion法检测细胞穿膜细胞数(侵袭能力),采用彗星实验检测彗星尾部DNA百分比。结果两种细胞Lv-HELQ组光密度值均高于NC组,Lv-sh HELQ组光密度值均低于NC组,组间比较P<0.05或<0.01。两种细胞Lv-HELQ组细胞迁移率、穿膜细胞数及均彗星尾部DNA百分比均低于NC组,Lv-sh HELQ组均高于NC组,组间比较P均<0.05。结论 HELQ可抑制人骨肉瘤细胞增殖、侵袭、转移,修复DNA损伤可能是其作用机制。

胃癌组织中CHD1L表达及其临床意义

目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)在胃癌发生发展中的作用。方法采用实时定量RT-PCR和Western blot法观察3株人胃癌细胞系(AGS、N87、HGC-27)及正常胃黏膜上皮细胞中CHD1L mRNA和蛋白表达的差异;采用免疫组化法检测71例人胃癌组织及其配对癌旁组织中CHD1L蛋白表达,分析CHD1L与胃癌临床病理特征的关系。结果与正常胃黏膜上皮细胞比较,3株胃癌细胞系CHD1L mRNA和蛋白表达水平均明显上调(P<0.05);71例胃癌组织中CHD1L蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织(P<0.05),CHD1L蛋白阳性表达与胃癌TNM分期、分化程度及淋巴结转移显著相关(P<0.05),与患者性别、年龄及肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论 CHD1L在胃癌的发生发展中起促进作用;CHD1L表达有助于判定胃癌恶性表型。

沉默CHD1L对前列腺癌PC3细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)对前列腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测前列腺癌细胞株LNCAP、PC3、DU145以及前列腺上皮细胞株RWPE-1中CHD1L mRNA表达水平;转染siRNA干扰前列腺癌PC3细胞CHD1L的表达,并用Transwell侵袭实验和划痕实验分析沉默CHD1L对前列腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blotting检测PC3细胞MMP-9、N-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达水平。结果:CHD1L mRNA在前列腺癌细胞中的表达水平明显高于前列腺上皮细胞(P<0.01),其中以前列腺癌PC3细胞的表达水平最高。侵袭实验中,干扰组的穿膜细胞数明显低于阴性对照组和空白对照组[(49.67±6.67)vs(113.67±5.69)和(112.00±12.49)个,P<0.05)。划痕实验中,干扰组48 h伤口愈合率也低于阴性对照组和空白对照组[(21.27±3.27)%vs(48.47±5.72)%和(49.93±3.35)%,P<0.05]。干扰组细胞MMP-9和N-钙黏蛋白表达下调,E-钙黏蛋白表达上调。结论:沉默CHD1L可降低前列腺癌PC3细胞的侵袭迁移能力,该作用可能是通过调控MMP-9和EMT相关蛋白表达实现的。

宫颈癌组织CHD1L ECRG4蛋白表达及其与HR-HPV感染的临床关系研究

目的探讨宫颈癌组织染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)、食管癌相关基因4(ECRG4)蛋白表达,并分析其与高危-人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的临床关系。方法选取98例宫颈癌患者癌组织、癌旁正常组织采用免疫组化法检测CHD1L、ECRG4蛋白表达并对比,对比不同临床病理特征患者宫颈癌组织CHD1L、ECRG4蛋白表达;分析宫颈癌组织CHD1L、ECRG4蛋白表达与HR-HPV感染的临床关系。结果宫颈癌组织CHD1L蛋白表达阳性率高于癌旁正常组织,ECRG4蛋白表达阳性率低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期、腺癌、未/低分化患者宫颈癌组织CHD1L蛋白表达阳性率均高于Ⅰ~Ⅱ期、鳞癌/其他、中/高分化患者,宫颈癌组织ECRG4蛋白表达阳性率均低于Ⅰ~Ⅱ期、鳞癌/其他、中/高分化患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。HR-HPV感染占比为77.55%,HR-HPV感染患者宫颈癌组织CHD1L蛋白表达阳性率高于无HR-HPV感染患者,ECRG4蛋白表达阳性率低于无HR-HPV感染患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织CHD1L与HR-HPV感染呈正相关(r=0.702,P=0.026),ECRG4蛋白表达与HR-HPV感染呈负相关(r=-0.792,P=0.010)。结论宫颈癌组织CHD1L蛋白表达阳性率高,ECRG4蛋白表达阳性率低,与临床分期、病理类型、分化程度均有关,且前者与HR-HPV感染呈正相关,后者于HR-HPV感染呈负相关。

新型冠状病毒PLpro负调控DDX3诱导的β干扰素抗病毒免疫通路

目的发现严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)的宿主互作分子,探索其生物学意义。方法邻近蛋白标记结合质谱分析筛选宿主互作分子DEAD-box解旋酶3(DDX3);免疫荧光法分析PLpro与DDX3的胞内共定位;免疫共沉淀法分析PLpro与DDX3的相互作用,以及PLpro对DDX3与IκB激酶ε(IKKε)和TANK结合激酶1(TBK1)、DDX3与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)互作的影响;荧光素酶报告基因法检测PLpro对β干扰素(IFN-β)通路的影响和对底物的酶切效率。结果DDX3能够与PLpro发生细胞内共定位和相互作用;PLpro可能抑制DDX3-MAVS复合体形成,抑制DDX3-IKKε-TBK1之间的相互作用,负调控Ⅰ型干扰素通路;DDX3过表达情况下,PLpro/PLP-TM对底物位点的切割效率显著升高,而DDX3表达降低时,切割效率则显著降低。结论DDX3可能是PLpro的宿主相互作用分子之一;PLpro负调控DDX3活化的IFN-β表达,为病毒复制提供有利的免疫环境,提升蛋白酶切割活性,共同促进病毒复制。

过表达CHD1L基因对结肠癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的初步探索人CHD1L基因在结肠癌细胞中的生物学功能。方法取肝癌患者手术切除肝癌标本并提取总RNA逆转录为c DNA,扩增CHD1L基因CDS序列,插入p LVX-puro慢病毒质粒,脂质体感染人SW480结肠癌细胞。Puro筛选建立稳定转染细胞株。免疫印迹证实CHD1L基因在SW480结肠癌细胞高效表达。CCK-8方法检测SW480结肠癌细胞增殖,Transwell方法检测SW480结肠癌细胞侵袭和迁移。结果 Western blot证实成功构建p LVX-CHD1Lpuro重组质粒及CHD1L基因成功在SW480结肠癌细胞中高效稳定表达,且CHD1L基因能够促进SW480结肠癌细胞过度增殖、侵袭和迁移。结论过度表达CHD1L基因显著促进SW480结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移。