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理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性 被引量:1
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作者 郭静 饶志明 +4 位作者 杨套伟 满在伟 张显 徐美娟 李星 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期906-911,共6页
利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能... 利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能变化(ΔΔG)来辅助设计提高酪氨酸酶的稳定性,利用定点突变构建突变体,并且在大肠杆菌中对野生型酪氨酸酶及突变体进行表达,最终获得了两个热稳定性提高的突变体R95Y、G123W。在此基础上进行复合突变,获得了一个热稳定性显著提高的突变体R95Y/G123W。该突变体在60℃的半衰期提高了2.43倍,最适反应温度由45℃提高到50℃,本研究所用的基于蛋白质结构的理性设计提高稳定性的策略也可以应用于其他工业酶类,显示了良好的应用前景。 展开更多
关键词 酪氨酸酶 氢键 定点突变 热稳定性 理性设计 popmusic
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C-端设计定点突变提高 Streptomyces Avermitilis壳聚糖酶稳定性及催化活性 被引量:3
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作者 郭静 高文君 +6 位作者 朱小梅 赵晗 张欣 王怡 王芯楺 赵希岳 蔡志强 《常州大学学报(自然科学版)》 CAS 2022年第5期82-92,共11页
为提高阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)SaCsn46A壳聚糖酶的温度稳定性,利用SWISS-MODEL在线服务器,以链霉菌SirexAA-E壳聚糖酶(PDB登录号:4ily.1A)为模板对SaCsn46A的蛋白结构进行同源模拟,将预测获得的SaCsn46A蛋白结构提交至在... 为提高阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)SaCsn46A壳聚糖酶的温度稳定性,利用SWISS-MODEL在线服务器,以链霉菌SirexAA-E壳聚糖酶(PDB登录号:4ily.1A)为模板对SaCsn46A的蛋白结构进行同源模拟,将预测获得的SaCsn46A蛋白结构提交至在线预测软件PoPMuSiC-2.1,寻找对SaCsn46A稳定性有显著影响的氨基酸残基,通过定点突变构建突变体,在大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta中异源表达野生型壳聚糖酶及突变体。经Ni-NTA亲和层析获得电泳纯重组酶蛋白,测定野生型壳聚糖酶及突变体G237A的酶学性质,发现突变体最适温度提高5℃,并且温度稳定性及pH稳定性显著提升。为进一步提高突变体的表达效率,对突变体表达菌株进行诱导条件优化,确定最优条件为IPTG浓度0.7 mmol/L,诱导温度20℃,诱导时间8 h。 展开更多
关键词 壳聚糖酶 定点突变 理性设计 popmusic 表达优化
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定点突变对低温脂肪酶活性和热稳定性的影响 被引量:2
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作者 陈海清 于凡 +4 位作者 王红静 张先舟 亢春雨 马雯 檀建新 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期96-102,共7页
使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1对粘质沙雷氏菌菌株L1的脂肪酶(lipA)每个氨基酸突变后的去折叠自由能变化(ΔΔG)进行预测、筛选,用重叠延伸PCR法构建了2个脂肪酶突变体lipA-Asn86Glu、lipAAsn132Lys。经大肠杆菌表达和酶蛋白纯化后,对... 使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1对粘质沙雷氏菌菌株L1的脂肪酶(lipA)每个氨基酸突变后的去折叠自由能变化(ΔΔG)进行预测、筛选,用重叠延伸PCR法构建了2个脂肪酶突变体lipA-Asn86Glu、lipAAsn132Lys。经大肠杆菌表达和酶蛋白纯化后,对其酶学特性进行了表征。2个突变体和野生型的脂肪酶最适温度为30℃、最适pH值为8。与野生型相比,lipA-Asn86Glu的比酶活提高了8%,lipA-Asn132Lys的比酶活比野生型降低了19%;lipA-Asn86Glu在50℃下酶的半衰期与野生型相似,Km和Kcat值有所下降,而lipAAsn132Lys的50℃时半衰期、Km和Kcat都明显降低。上述结果为通过理性设计突变位点对酶进行分子改造,以提高酶活力或热稳定性,提供了借鉴和途径。 展开更多
关键词 脂肪酶 定点突变 重叠延伸PCR popmusic 酶活力
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理性设计提高酯合成催化反应脂肪酶的热稳定性 被引量:4
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作者 温露文 徐岩 喻晓蔚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期2106-2118,共13页
【背景】南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)具有优异的酯合成活性,是在非水相催化中应用极为广泛的工业用酶。【目的】在保留CALB优秀催化性能的基础上,提高CALB的热稳定性。【方法】采用预测软件PoPMuSiC和FoldX... 【背景】南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)具有优异的酯合成活性,是在非水相催化中应用极为广泛的工业用酶。【目的】在保留CALB优秀催化性能的基础上,提高CALB的热稳定性。【方法】采用预测软件PoPMuSiC和FoldX计算CALB潜在热稳定性突变位点,并根据氨基酸残基的空间位置进一步筛选。利用重叠延伸PCR技术在基因calb中引入10个单点突变,于毕赤酵母GS115中表达。【结果】点突变A146G、A151P、L278M均能有效提高CALB的热稳定性。在单点突变的基础上,组合突变体A146G-L278M和A146G-L278M-A151P的热稳定性得到进一步提高。与野生型相比,突变体A146G-L278M和A146G-L278M-A151P的最适反应温度均提高了5°C,Tm值分别提高了3.3°C和4.2°C。此外,合成己酸乙酯的酶促反应动力学分析表明,相比于野生型,突变体A146G-L278M和A146G-L278M-A151P对己酸和乙醇均具有更高的亲和力,且对己酸的催化效率kcatA/Km A是野生型的4.1倍。通过分子动力学模拟,从分子水平阐明了突变体A146G-L278M和A146G-L278M-A151P热稳定性提高的机制。【结论】本研究采用的理性设计策略对提高CALB的热稳定性是行之有效的,该策略可作为其他工业用酶提高热稳定性的参考。 展开更多
关键词 南极假丝酵母脂肪酶B 热稳定性 popmusic FoldX
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German Popular Music Studies as Part of (International) Media Cultural Studies
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作者 Christoph Jacke 《Frontiers of Literary Studies in China-Selected Publications from Chinese Universities》 2013年第2期271-286,共16页
This paper begins by explaining current developments in popular music research, mainly in connection with approaches used in international media and Cultural Studies. It then provides an overview of German-language re... This paper begins by explaining current developments in popular music research, mainly in connection with approaches used in international media and Cultural Studies. It then provides an overview of German-language research methods and discourses on popular music. In addition to the traditional reflections from musicology and music education, nine perspectives will be described, primarily from the media, communications, culture and social sciences. These nine contemporary perspectives are distributed along lines of thematic focus, moving beyond disciplines or fields per se. This paper will close with a list of suggestions for popular music research and education in the German cultural sphere, insisting above all on a clear connection/link, in the sense of a mixing/incorporation/integration, with (current) international discourses. Finally, the paper synthesizes German research, not only to systematize it but also to illustrate its diversity and multiperspectivity. 展开更多
关键词 popular culture popular music media studies Cultural Studies popmusic research trends and perspectives transdisciplinarity
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