POSTN蛋白在胃黏膜癌变过程中的表达及意义

目的观察胃癌相关蛋白质POSTN在胃黏膜癌变过程中的表达与意义,为胃癌的早期诊断、病理分型与评估预后提供有价值的实验依据。方法收集正常胃黏膜、癌旁及胃癌组织标本8例,采用Western blotting检测POSTN蛋白在上述组织中的表达;其次利用免疫组化染色观察POSTN蛋白在正常胃黏膜、癌旁及胃癌组织中的表达,并分析其在胃黏膜癌变过程中表达的意义。结果 Western blotting结果显示,胃癌组织中POSTN蛋白表达明显高于正常胃黏膜和癌旁组织(P<0.01),同时癌旁组织中的表达高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。免疫组化结果显示,正常胃黏膜、癌旁和胃癌组织中POSTN蛋白表达的阳性率分别为14.71%、46.15%和77.48%,而胃高、中和低分化腺癌中表达的阳性率分别为60%、70.6%和81.4%。POSTN蛋白表达与胃癌组织的分化程度相关,即组织分化降低,其表达增强(P<0.01)。结论胃癌组织中POSTN蛋白表达高于正常胃黏膜和癌旁组织,癌旁组织中的表达高于正常胃黏膜组织,该蛋白表达与胃癌组织的发生和分化程度有关。

ASPN通过激活TGF-β通路促进瘢痕疙瘩发生发展的功能和机制研究

目的探讨无孢蛋白(ASPN)在瘢痕疙瘩发生发展中的作用机制。方法取瘢痕疙瘩患者皮肤组织,免疫荧光分析ASPN在瘢痕疙瘩中的表达情况,并与正常瘢痕中的表达情况进行比较。构建稳定表达ASPN的成纤维细胞,给予成纤维细胞ASPN刺激,敲低瘢痕疙瘩成纤维细胞的ASPN基因。通过WB和qRT-PCR检测稳定过表达ASPN的成纤维细胞、经ASPN上清刺激的成纤维细胞和敲低ASPN基因的肌成纤维细胞活化指标α-SMA的表达情况、TGF-β通路激活情况和α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ、COMP和POSTN的表达情况。取10只SPF级C57BL/6J小鼠构建伤口模型小鼠,随机分为溶剂组和ASPN组,每组5只。在第0、3、7和14天,观察伤口愈合情况;造模第14天,取小鼠背部伤口组织,通过免疫荧光检测TGF-β通路的激活情况和α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ的表达情况。结果ASPN在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达。稳定过表达ASPN和给予ASPN刺激的成纤维细胞中,TGF-β通路被激活,且α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ、COMP和POSTN的表达显著增加(均P<0.05)。敲低瘢痕疙瘩成纤维细胞的ASPN基因可以抑制成纤维细胞TGF-β通路的激活,且明显降低α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ、COMP和POSTN的表达水平(均P<0.05)。在小鼠伤口模型中,ASPN组小鼠伤口愈合情况与溶剂组相比无明显差异,而小鼠伤口床组织中p-SMAD2、α-SMA和CollagenⅠ的表达较溶剂组明显增加(均P<0.05)。结论ASPN通过激活TGF-β信号通路促进瘢痕疙瘩的发生发展。

shRNA沉默骨膜蛋白基因抑制人骨肉瘤的血管生成

背景:骨膜蛋白(periostin,POSTN)是一种细胞外基质蛋白,在多种肿瘤组织中表达上调,与肿瘤的迁移、增殖和血管生成能力有关。血管内皮生长因子受体2(vascularendothelialgrowthfactor2,VEGFR2/KDR)与其配体血管内皮生长因子结合后主要调控血管的发生和构建,但KDR与POSTN在骨肉瘤中的相互作用尚不清楚。目的:探讨POSTN在体内、外水平对人骨肉瘤增殖和体内血管生成能力影响及其作用机制。方法:①体外实验:qRT-PCR和Westernblot检测人骨肉瘤临床标本组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白表达水平;qRT-PCR检测3株不同人骨肉瘤细胞系内POSTN表达,筛选基因表达最高的细胞系进行转染实验;转染慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA进入Saos-2细胞,选出3个作用靶点中抑制率最高的序列进行后续实验;②体内实验:取裸鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)12只,实验组(n=6)将慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,对照组(n=6)将慢病毒包装pPLK-Scramble-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,接种5周后,测量瘤体体积与质量;接种3周后,应用小动物活体成像检测血管生成情况;接种5周后取瘤体组织,Westernblot检测POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT蛋白表达,病理切片免疫组织化学染色内皮细胞黏附分子蛋白表达。实验方案经山西医科大学第二医院伦理委员会批准(编号:2018002)。结果与结论:①体外实验:骨肉瘤组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白水平表达均高于正常骨组织(P<0.01);Saos-2细胞中的POSTN基因表达量较MG-63和U2-OS细胞高;②体内实验:实验组瘤体体积和质量均小于对照组(P<0.05);实验组瘤体内血管生成量少于对照组(P<0.05);实验组POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT及内皮细胞黏附分子蛋白表达均低于对照组(P<0.05);③结果表明:沉默POSTN基因可抑制骨肉瘤血管生成,其机制可能与KDR/PI3K/AKT通路活化有关。

POSTN蛋白对老年大鼠膝胫骨平台软骨细胞增殖的影响

目的探讨POSTN蛋白对老年大鼠膝胫骨平台软骨细胞增殖的影响。方法体外分离培养20月龄SD雌性大鼠膝胫骨平台软骨细胞至第3代,分为3组:培养液注射POSTN蛋白组、注射PBS组、注射抗POSTN蛋白组,使用EDU检测软骨细胞增殖率。分别于24、48、72 h观测各组软骨细胞增殖情况,同时使用免疫组织化学技术观测软骨细胞中Notch1蛋白表达情况;20月龄SD大鼠30只,随机分为3组:注射POSTN蛋白组、注射PBS组、注射抗POSTN蛋白组。分别于1、3、5 d连续向一侧膝关节腔注射3次相关试剂,并在1 d时关节腔注射EDU,2周后处死大鼠取膝胫骨平台,观测软骨细胞增殖情况。组间比较使用单因素方差分析。结果24 h时体外培养细胞增殖率3组间差异有统计学意义(F=27.32,P=0.017),注射POSTN蛋白组[(23±8)%]和PBS组[(21±10)%]细胞增殖率较抗POSTN蛋白组[(16±5)%]高(P=0.003,P=0.011);48 h时体外培养细胞增殖率3组间差异有统计学意义(F=35.34,P<0.01),注射POSTN蛋白组细胞[(36±11)%]增殖率较其他2组[(22±6)%、(18±6)%]高(P=0.021,P<0.01);72 h体外培养细胞增殖率3组间差异有统计学意义(F=52.62,P<0.01),注射POSTN蛋白组细胞增殖率[(56±17)%]较注射PBS组[(31±8)%]、抗POSTN蛋白组[(26±7)%]高(P=0.007,P<0.01),注射PBS组较注射抗POSTN蛋白组高(P<0.01);Notch1蛋白在注射POSTN蛋白组软骨细胞表达最多,在抗POSTN蛋白组最少。大鼠膝内侧胫骨平台软骨细胞2周增殖率3组间差异有统计学意义(F=26.72,P<0.01),关节腔注射POSTN蛋白组[(36±14)%]细胞增殖率较注射PBS组[(19±7)%]、注射抗POSTN蛋白组[(10±4)%]高(P=0.003,P<0.01),注射PBS组较注射抗POSTN蛋白组细胞增殖率高(P=0.031)。结论POSTN蛋白可以促进老年大鼠膝胫骨平台软骨细胞的增殖,而抗POSTN蛋白可以减缓软骨细胞的增殖;POSTN蛋白可能通过激活Notch信号通路来促进软骨细胞的增殖。

骨膜蛋白及其在骨关节炎方面的研究进展

骨膜蛋白是一个分子量约为90 k Da的细胞外基质蛋白,在参与细胞连接、纤维化、感应机械应力和调控骨代谢与肌腱重塑等方面起着重要作用。近年来研究发现,骨膜蛋白与骨关节炎(OA)的发生和发展可能密切相关,有望成为早期诊断和早期治疗OA的新的潜在靶点。本文将结合国内外对骨膜蛋白的最新研究成果,重点讨论骨膜蛋白的结构、功能以及在OA方面的研究进展。