抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达及机制

背景:既往研究表明抵抗素可刺激软骨细胞产生大量趋化因子,在炎症性关节病变中具重要作用,但具体作用机制未明。目的:进一步探讨抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达上调的机制。方法:培养人源性软骨细胞,T/C-28a2细胞及ATDC5细胞,采用q PCR检测抵抗素刺激趋化因子基因的作用,C/EBPβ表达,核因子κB亚型及软骨特异性mi RNAs。给予核因子κB抑制剂(IKK-NBD)和C/EBPβ抑制剂(SB303580),对C/EBPβ及核因子κB的共同调节作用进行检测。在给予抵抗素刺激或无抵抗素刺激时分别进行亚细胞结构定位检测。结果与结论:1抵抗素可非依赖性上调趋化因子基因表达。2软骨细胞对抵抗素刺激应答具有非严格细胞特异性,通过C/EBPβ抑制剂、核因子κB及一些软骨细胞特异性mi RNAs,可对趋化因子基因表达进行联合调控。3一过性核因子κB活性增高可增强C/EBPβ活性,且两个转录因子对趋化因子基因CCL3及CCL4的作用均为非依赖性。

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)及其相关因子在T细胞分化及功能中的作用

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)是CD4谱系分化中的关键转录因子,并抑制CD8谱系生成。ThPOK蛋白表达促进CD4谱系分化,维持CD4谱系稳定性,并抑制CD8谱系分化。首先在胸腺内,ThPOK基因表达受T细胞受体(TCR)信号、基因增强子、基因沉默子等调节,且ThPOK表达受GATA结合蛋白3(GATA3)、Runt相关转录因子3(Runx3)、白血病/淋巴瘤相关因子(LRF)、胸腺细胞选择相关性高迁移率族盒基因(TOX)、Myc关联的锌指蛋白相关因子(MAZR)、E1A结合蛋白p300(P300)等转录因子影响,进而影响CD4、CD8谱系分化。而在外周T细胞中,ThPOK影响CD_4^+T细胞亚群、CD_8^+T细胞分化及功能。在此基础上,正逐步展开针对外周疾病中ThPOK作用的研究。

三叶香茶菜含药血清对肝细胞TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究三叶香茶菜含药血清对大鼠原代肝细胞的Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路的影响。方法将脂多糖(LPS)诱导的肝细胞分为A~G组7个组,采用MTT比色法检测肝细胞增殖,生化法检测肝细胞中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量;ELISA法测定肝细胞白介素-1β(IL-1β)、IL-18、caspase-1。通过RT-PCR、Western blotting或免疫荧光法检测检测肝细胞TLR4、p-IκB-α、NF-κB、IκB-α、NLRP3、GSDMD、ASC的mRNA和蛋白表达。结果三叶香茶菜含药血清对肝细胞的增殖具有抑制作用,并能有效减少肝细胞中ALT、AST、caspase-1、IL-1β、IL-18的分泌;此外,还能明显降低TLR4、NF-κB p65、NLRP3、ASC以及GSDMD等炎症相关蛋白表达,同时上调IκB-α的表达。结论三叶香茶菜通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3活化,有效阻止肝细胞的过度活化,减少肝细胞炎性因子的释放,从而改善肝细胞炎症损伤状况。

ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨积雪草酸对急性肺损伤大鼠氧化应激和NLRP3炎症小体的影响

目的 观察积雪草酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白的影响,并探讨其相关分子机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草酸低剂量组、积雪草酸高剂量组和地塞米松组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠均采用LPS气管滴注法建立急性肺损伤模型。模型建立成功后第2天,积雪草酸低、高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和75 mg/kg积雪草酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,对照组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。HE染色观察大鼠肺组织病理形态,称重法计算肺组织湿/干重比值,TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡情况,试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,积雪草酸低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤显著改善,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著降低(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05),且积雪草酸高剂量组和地塞米松组大鼠上述指标变化均显著优于积雪草酸低剂量组(P均<0.05)。结论 积雪草酸可通过抑制氧化应激和NLRP3炎症小体激活减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

OCT4及其假基因POU5F1B在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义

目的分析八聚体结合转录因子4(OCT4)及其假基因POU结构域5类转录因子1B(POU5F1B)在子宫内膜腺癌中的表达情况,并探讨两者在子宫内膜腺癌中的临床意义。方法纳入60例子宫内膜腺癌患者,并收集其子宫内膜腺癌组织,同时纳入50例子宫内膜良性病变患者,并收集其增生期子宫内膜组织。采用实时荧光定量PCR检测组织中的OCT4 mRNA、POU5F1B mRNA的表达水平。用免疫组织化学法检测组织中OCT4蛋白的阳性表达情况。分析OCT4蛋白阳性表达率与子宫内膜腺癌患者临床病理参数的关系。结果子宫内膜腺癌组织中POU5F1B mRNA、OCT4 mRNA的表达水平均高于增生期子宫内膜组织(均P<0.05)。子宫内膜腺癌组织中的OCT4蛋白高表达率高于增生期子宫内膜组织(P<0.05)。临床分期为Ⅱ~Ⅳ期、肌层浸润深度>1/2、有淋巴结转移的子宫内膜腺癌患者的OCT4蛋白高表达率分别高于临床分期为Ⅰ期、肌层浸润深度≤1/2、无淋巴结转移的患者(均P<0.05)。结论OCT4及其假基因POU5F1B在子宫内膜腺癌中的表达上调,并且OCT4蛋白的表达情况与患者的临床分期、浸润深度、淋巴结转移有关。假基因POU5F1B可能通过调控OCT4来影响子宫内膜腺癌的发生和发展。

Runx3对银屑病患者Th1/Th2细胞平衡的影响及其作用机制

目的检测Runx3在银屑病患者和健康人外周血CD4^+T细胞中转录水平的表达,分析其对Th1/Th2细胞平衡的影响及在银屑病发病中可能的作用机制。方法选取40例银屑病患者(银屑病组)和35例健康人(健康对照组),应用密度梯度离心法分离其外周血CD4^+T细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Runx3转录水平的表达。将体外培养的银屑病患者的CD4^+T细胞随机分为空白对照组(未经任何处理组)、阴性对照组(对照siRNA转染组)和Runx3 siRNA组(Runx3 siRNA转染组)。采用Western blot检测沉默效果,流式细胞仪分析Th1、Th2细胞数目,酶联免疫吸附试验检测Th1和Th2细胞相关特异性分泌因子的表达水平,同时采用qRT-PCR和Western blot检测Runx3对Th1/Th2细胞转录因子表达的影响。结果银屑病组患者CD4^+T细胞Runx3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组(P<0.01)。与阴性对照组比较,Runx3 siRNA组银屑病患者CD4^+T细胞中Runx3蛋白表达水平下降(P<0.01),同时Th1细胞数目下降(P<0.05),而Th2细胞数目上调(P<0.05),且Th1/Th2细胞比值显著降低(P<0.05);白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平显著下降(P<0.01),IL-4、IL-10表达水平显著升高(P<0.05);Th1型特异性转录因子T-bet的表达显著降低(0.73±0.06 vs 0.96±0.17)(P<0.01),同时Th2型特异性转录因子GATA3的表达显著升高(1.27±0.11 vs 1.01±0.14)(P<0.05)。结论 Runx3在银屑病患者外周血CD4^+T细胞中表达上调,并且可能通过调控Th1/Th2细胞相关特异性转录因子的表达引发Th细胞失衡,从而参与银屑病的病理发病进程。

假基因POU5F1B对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨POU结构域5类转录因子1B基因(POU5F1B)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其可能的机制。方法采用定时荧光定量PCR(QPCR)检测正常宫颈上皮End1/e6e7细胞株和宫颈癌细胞株(SiHa、HeLa和C33A)中POU5F1B的表达水平,选取POU5F1B表达量最高的细胞株分别转染POU5F1B特异性小干扰RNA(si-POU5F1B组)和阴性对照序列(si-NC组)。分别采用CCK-8实验、平板克隆形成实验和EdU实验观察细胞增殖情况,细胞划痕实验和侵袭实验观察两组细胞的迁移和侵袭情况,Western blotting实验检测OCT4蛋白的相对表达量,通过动物实验观察下调假基因POU5F1B对裸鼠体内移植瘤质量的影响。结果与End1/e6e7细胞株比较,假基因POU5F1B在宫颈癌SiHa、C33A、HeLa细胞株中的相对表达量分别为3.34±0.23、2.03±0.15和1.13±0.06,选取POU5F1B表达量最高的SiHa细胞进行后续实验。si-POU5F1B组假基因POU5F1B的相对表达量为0.2±0.012,明显低于si-NC组(P<0.01)。CCK-8实验显示,与si-NC组相比,si-POU5F1B组吸光值明显降低(P<0.05);平板克隆形成实验显示,si-POU5F1B组的克隆形成数为(173±15.27)个,低于si-NC组的(318±8.41)个(P<0.01)。EdU检测显示,si-POU5F1B组阳性细胞比例为(18±1.36)%,低于si-NC组的(34±2.63)%(P<0.01)。划痕实验显示,48 h后si-POU5F1B组的划痕愈合率为(45.60±2.27)%,低于si-NC组的(87.15±3.32)%(P<0.01);侵袭实验显示,si-POU5F1B组穿过侵袭下室的细胞数为(303±10.29)个,低于si-NC组的(933±11.88)个(P<0.01);Western blotting检测显示,下调POU5F1B表达后,其亲本基因OCT4的表达水平下降(P<0.05);在动物实验中,si-POU5F1B组裸鼠移植瘤质量为(203.50±54.83)mg,低于si-NC组的(578.06±84.66)mg(P<0.01)。结论下调假基因POU5F1B可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并抑制体内宫颈癌细胞生长,其机制可能与下调其功能基因OCT4的表达有关。

circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P<0.05)。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P<0.05)。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P<0.05)。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。

BMAL1减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组。采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P<0.05)。与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05)。结论BMAL1可减轻H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关。

POU4F3表达对118例肺腺癌患者预后评估及对肺腺癌细胞株迁移的影响

目的揭示POU结构域第4类转录因子3(POU4F3)在肺腺癌组织的表达及其与肺腺癌患者预后的关系,并探索POU4F3对肺腺癌细胞迁移的作用。方法免疫组织化学染色检测人肺腺癌及其癌旁组织(样本量均为118)中POU4F3的表达水平。利用Log-rank(Mantel-Cox)检验POU4F3表达水平与总生存期的关联性。以肺腺癌株为实验对象,构建稳定过表达(Lv-POU4F3)及其对照(Lv-control)或敲低POU4F3(shPOU4F3)及其对照(control shRNA)的慢病毒载体并分别转染至SPCA1和A549细胞系,Western blotting验证POU4F3过表达或敲低转染效率。运用划痕实验、Transwell迁移实验和鬼笔环肽荧光实验检测细胞迁移能力。结果免疫组化分析显示,118例肺腺癌组织中POU4F3的表达评分低于118例癌旁组织评分(1.5 vs 4.0),差异有统计学意义(P<0.001)。与POU4F3低表达肺腺癌患者相比,POU4F3高表达患者的总生存期延长(HR=2.04,95%CI:1.158~3.607,P=0.028)。细胞实验结果显示,有效构建了过表达或敲低POU4F3的稳定转染肺腺癌细胞株。过表达POU4F3后,划痕实验表明,Lv-POU4F3组细胞划痕愈合率低于Lv-control组,差异有统计学意义(F_(SPCA1处理)=69.86,P_(SPCA1)=0.001;F_(A549处理)=492.10,P_(A549)<0.001);Transwell迁移实验表明,SPCA1-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于SPCA1-Lv-control组(599.0±11.36 vs 806.3±18.72,t=16.40,P<0.001),A549-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于A549-Lv-control组(181.0±18.68 vs 314.7±23.46,t=7.72,P=0.002);鬼笔环肽荧光实验表明,过表达POU4F3后,SPCA1细胞微丝变细、伪足较少,Lv-POU4F3组的平均荧光强度低于Lv-control组(23.30±1.34 vs 33.45±1.85),差异有统计学意义(t=7.67,P=0.002)。敲低POU4F3后,划痕实验表明,shPOU4F3组细胞划痕愈合率高于control shRNA组,差异有统计学意义(F_(SPCA1处理)=114.60,P_(SPCA1)<0.001;F_(A549处理)=1 710.00,P_(A549)<0.001)。Transwell迁移实验表明,SPCA1-shPOU4F3组穿膜细胞数多于SPCA1-control shRNA组(970.00±14.53 vs 585.00±25.53,t=22.70,P<0.001),A549-shPOU4F3组穿膜细胞数多于A549-control shRNA组(528.00±29.14 vs 185.30±9.50,t=19.37,P<0.001);鬼笔环肽荧光实验表明,敲低POU4F3后,SPCA1细胞微丝变粗、伪足增多,shPOU4F3组的平均荧光强度高于control shRNA组(48.53±3.30 vs 31.07±2.32),差异有统计学意义(t=7.50,P=0.002)。结论 POU4F3在人肺腺癌患者癌组织中表达低于癌旁组织,POU4F3高表达者预后较佳,且POU4F3能够抑制肺腺癌细胞迁移。POU4F3可能是LUAD的抑癌基因并有望成为诊断和治疗LUAD的新靶标。

脑损伤后大鼠NPAS4与JAK2/STAT3信号通路的关系

目的探讨神经元PAS结构域蛋白(NPAS)4与Janus激酶(JAK)2/信号传导与转录激活因子(STAT)3通路在大鼠颅脑损伤后的相关联系。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、TBI组、TBI+AG490组,建立损伤模型,利用免疫组化染色、Western印迹及实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3及NPAS4蛋白。结果损伤后NPAS4蛋白可见表达升高,并在12 h时达到最高,并持续至少7 d,与p-JAK2、p-STAT3蛋白时序性表达趋势一致,相邻两时间点比较差异显著(P<0.05);且TBI+AG490组p-JAK2、p-STAT3及NPAS4蛋白表达量较TBI组均显著下降(P<0.05)。结论NPAS4可在大鼠颅脑损伤后迅速升高并发挥神经保护作用,且其相关作用可能受到JAK2/STAT3通路的调节。

复方银花解毒颗粒对脂多糖致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究复方银花解毒颗粒(Compound Yinhua Jiedu Granule)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法将120只幼龄大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、布洛芬颗粒组(0.8g/kg)及复方银花解毒颗粒低、中、高剂量(1.25、2.5、5 g/kg)组,ig给药1周,末次给药1 h后尾iv LPS(1 mg/kg)制备急性肺炎模型,6 h后采用麻醉后颈椎脱臼处死。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化;HE染色观察肺组织形态学变化;运用免疫组化染色法检测肺组织TLR4,入核NF-κB和NLRP3蛋白的表达,Westernblotting法检测肺组织中TLR4、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白α(nuclear factor-κB inhibitor proteinα,p-IκBα)和NLRP3蛋白的表达。结果复方银花解毒颗粒预处理对LPS诱导幼龄大鼠急性肺损伤具有较强的保护作用,可降低模型大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子IL-1β、IL-17、TNF-α的水平,减少肺组织中TLR4、NF-κB的激活和NLRP3蛋白的表达。结论复方银花解毒颗粒对LPS致幼龄大鼠急性肺炎模型具有抗炎作用,其机制可能与下调TLR4/NF-κB/NLRP3炎症信号通路有关。

骨关节炎相关信号通路的研究进展

骨关节炎是一种严重影响患者生活质量的关节退行性疾病,其病因及发病机制尚不完全清楚。目前,国内外大量研究已证实骨关节炎的病理变化过程与众多信号通路有密切联系,其中部分信号通路与介导骨关节炎软骨破坏及调控软骨细胞凋亡有关,如p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶、Toll样受体等信号通路等;还有部分信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡具有双重调节作用,如细胞外调节蛋白激酶、Notch、Wnt等信号通路。本文就骨关节炎相关信号通路的研究进展进行了综述。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨脉络舒通丸保护小鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制

目的:探讨脉络舒通丸对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:60只雄性ICR小鼠按体质量随机分为假手术对照组、模型对照组、尼莫地平0.024g/kg组和脉络舒通丸1.8、3.6、7.2 g/kg组,每组10只。各组灌胃给予相应药物或水预处理7 d,采用线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。再灌注24 h后评估各组小鼠神经功能评分、脑含水量及脑梗死体积占比;HE染色观察缺血核心区脑组织病理学改变;ELISA法检测脑组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6含量;免疫印迹法分析小鼠缺血脑组织与半暗带组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、cleaved IL-1β蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,模型对照组小鼠神经功能评分、脑含水量、脑梗死体积占比明显升高(P<0.05或P<0.01),HE染色显示脑组织产生损伤性病理改变,脑组织TNF-α、IL-1β及IL-6的含量均显著升高(P<0.01),缺血脑组织与半暗带组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、cleaved IL-1β蛋白表达均显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,脉络舒通丸3.6、7.2 g/kg组神经功能评分、脑含水量、脑梗死体积占比明显减少(P<0.05或P<0.01);脉络舒通丸各组小鼠脑组织病理学均有显著改善,脑组织TNF-α、IL-1β及IL-6的含量明显降低(P<0.05或P<0.01);脉络舒通丸7.2 g/kg组小鼠缺血脑组织与半暗带组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、cleaved IL-1β蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:脉络舒通丸可通过调控TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制神经炎症反应,从而达到对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法:本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^(-1))脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^(-1)LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^(-1)LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^(-1))、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^(-1))、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^(-1))联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测RAW264.7巨噬细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况;流式细胞术检测巨噬细胞ROS水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测M1型巨噬细胞相关细胞因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、M2型巨噬细胞相关细胞因子精氨酸酶1(Arg-1)、白细胞介素-10(IL-10)蛋白表达,TLR4/NF-κB/NLRP3通路的相关蛋白表达。结果:CCK-8结果显示,在10 mg·L^(-1)LPS的刺激下,RAW264.7巨噬细胞的细胞活力值最高(P<0.01)。与空白组比较,模型组IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.01);ROS表达量显著上升(P<0.01);M1型巨噬细胞iNOS、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.01),M2型巨噬细胞Arg-1、IL-10蛋白表达显著降低(P<0.01);TLR4、髓样分化因子88(Myd88)、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白(p-IκB)/核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)p65/NF-κB p65、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,补阳还五汤各给药组及抑制剂组均可明显降低IL-1β、IL-18、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01),抑制RWA264.7巨噬细胞炎症因子的表达;降低细胞ROS表达水平(P<0.01);下调M1型巨噬细胞iNOS、TNF-α蛋白(P<0.01),上调M2型巨噬细胞Arg-1、IL-10蛋白表达(P<0.05,P<0.01);降低TLR4、Myd88、p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤可改善巨噬细胞炎症反应,可能与降低巨噬细胞ROS水平,抑制RAW264.7巨噬细胞极化,下调TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达水平有关。

IFNL3／IFNIA多态性与HIV-1患者应用高效抗逆转录病毒治疗的相关性研究

目的分析干扰素λ3基因（IFNL3）/干扰素λ4基因（IFNL4）单核苷酸多态性（SNPs）对HIV-1感染患者应用高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的影响。方法收集2015年6月至12月浙江大学医学院附属第一医院应用HAART≥1年的63例HIV-1成年患者。采用定量聚合酶链反应（qPCR）定量检测患者血浆HIV-1 RNA、外周血单个核细胞（PBMC）的HIV-1 DNA水平和外周血SNPs。应用磁珠法检测血浆炎性细胞因子水平，并采用流式细胞仪检测外周血CD4^＋T和CD8^＋T淋巴细胞计数。根据抗病毒治疗应答情况将患者分为HIV-1 RNA低表达组（〈100拷贝/mL）和高表达组（≥100拷贝/mL）；根据淋巴细胞计数将患者分为CD4^＋T淋巴细胞低表达组（〈250个/μL）和高表达组（≥250个/μL）；根据外周血HIV-1 DNA水平将患者分为HIV-1 DNA低表达组（〈100拷贝/106个细胞）和高表达组（≥100个拷贝/106个细胞）。分析IFNL3/IFNL4的SNPs、炎性细胞因子在HIV-1 RNA、HIV-1 DNA和CD4^＋T淋巴细胞各亚组的分布和水平，以及SNPs与炎性细胞因子的关系。采用SPSS 18.0软件对数据进行分析。结果rs368234815、rs8099917和rs4803223在HIV-1 RNA低表达组和高表达组的分布差异具有统计学意义（χ^2=0.043、0.047和0.032，P值均〈0.05）。IL-10在HIV-1 RNA低表达组较高表达组下降（U=4.00，P〈0.05）；IL-13水平在HIV-1 RNA高表达组和HIV-1 DNA高表达组较相对应组下降（U=0.00和2.00，P〈0.05）; IL-21水平在HIV-1 RNA高表达组及CD4^＋T淋巴细胞低表达组较相对应组下降（U=3.00和2.00，P〈0.05）; IL-28A水平则在HIV-1 RNA高表达组、HIV-1 DNA高表达组和CD4^＋T淋巴细胞低表达组均下降（U=3.00、0.50和3.00，P〈0.05或〈0.01）。此外，rs368234815与IL-21相关（H=6.690，P〈0.05），IL-21在rs368234815ΔG/ΔG[131.88（2.66，174.00）]亚型的表达高于TT/TT[6.79（2.81, 26.48）] （P〈0.05）；rs4803223与IFN-γ相关（H=6.690，P〈0.05），IFN-γ在GG亚型[62.26 （19.45, 96.49）]中的表达要高于GA亚型[6.98 （2.19, 99.14）] （P〈0.05）。结论IFNL3/IFNL4的rs368234815, rs8099917和rs4803223可能与HIV-1患者应用HAART治疗效果、炎性因子表达相关，并可能影响HAART疗效。

NLRP3/GATA-4/VEGF信号通路在新生血管性年龄相关性黄斑变性中的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/转录因子GATA结合蛋白4(GATA-4)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)中的作用。方法利用TRANSFAC转录因子数据库搜索人源和鼠源VEGF启动子及其上游序列,分析可能影响VEGF转录活性的转录因子。将小鼠巨噬细胞RAW264.7分为对照组和脂多糖(LPS)刺激组,qRT-PCR检测LPS对NLRP3炎症小体活化、GATA-4和血管内皮生长因子A(VEGFA)mRNA表达的影响;应用特异性NLRP3小分子抑制剂MCC950预处理RAW264.7细胞(LPS+MCC950组),检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA基因表达水平的变化。结果人源和鼠源VEGF启动子上游均存在多个GATA转录因子结合位点。与对照组比较,LPS组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA mRNA表达增加(均P<0.05);与LPS刺激组比较,LPS+MCC950组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA mRNA水平均明显降低(均P<0.05)。结论NLRP3/GATA-4/VEGF信号通路可能在nAMD的病理过程中发挥重要调节作用。

FHL3研究进展

4个半LIM结构域蛋白3(four and a half LIM domain protein 3,FHL3)是LIM蛋白质超家族的一个成员,主要存在于骨骼肌中。它含有4个半LIM结构域,并通过这些LIM结构域与肌分化因子MyoD、肌动蛋白、转录因子MZF-1、细胞周期调节因子CDC25B等多种蛋白质发生相互作用,从而对成肌细胞分化、细胞骨架结构、骨骼肌形成以及某些基因的表达起到重要的调控作用。目前,FHL3的功能及其作用机制尚未阐明,深入开展FHL3的研究将可能为人类治疗某些疾病提供新思路。