转录因子POU2F2通过激活Sestrin2对缺血性脑卒中后癫痫铁死亡的保护作用及机制

目的 探讨敲减POU转录因子家族2级同源框2(POU2F2)对缺血性脑卒中后癫痫(PISE)的影响及机制。方法 利用生物信息学方法预测并分析POU2F2和Sestrin2(Sesn2)启动子结合位点;雄性Wistar大鼠随机分为Sham组、PISE组、PISE+LV-shNC组和PISE+LV-shPOU2F2组,四血管闭塞(4-VO)法建立PISE模型;健康大鼠大脑皮层中分离原代神经元,无镁处理法构建体外细胞PISE模型,随机分为对照组、PISE组、PISE+shNC组、PISE+shPOU2F2组和PISE+shPOU2F2+Sesn2组。qRT-PCR检测POU2F2和Sesn2 mRNA表达;Western blot检测POU2F2、Sesn2和GPX4蛋白表达;试剂盒检测活性氧(ROS)、脂质ROS、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀(ChIP)检测POU2F2对Sesn2启动子转录活性的影响。结果 JASPAR转录因子预测结果显示Sesn2启动子区与转录因子POU2F2存在结合位点。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组比较,PISE组大鼠和原代皮层神经元POU2F2和Sesn2 mRNA和蛋白均表达增多(P<0.05);与PISE+shNC组比较,PISE+shPOU2F2组大鼠和神经元POU2F2和Sesn2 mRNA和蛋白均表达降低(P<0.05)。与对照组比较,PISE组大鼠脑组织ROS产生、原代皮层神经元脂质ROS积累、LDH活性和MDA含量显著增加,GSH含量和GPX4蛋白表达明显降低(P<0.05);与PISE+shNC组比较,沉默POU2F2可进一步增加大鼠脑组织ROS产生和原代皮层神经元脂质ROS积累、LDH活性和MDA含量,降低GSH含量和GPX4蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因技术和ChIP实验证实POU2F2可调控Sesn2启动子的活性。过表达Sesn2后,PISE+shPOU2F2+Sesn2组较PISE+shPOU2F2组神经元脂质ROS积累、LDH活性和MDA含量降低,GSH活性增加(P<0.05)。结论 PISE可诱导POU2F2和Sesn2的代偿性增加,抑制POU2F2可通过降低Sesn2表达促进铁死亡而加剧PISE,这为PISE的治疗机制提供了新的视角。

POU2F2在肾透明细胞癌中的表达及其对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨转录因子POU2F2在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)及人肾癌细胞系(786-O和ACHN)中的表达及其对肾癌细胞体外增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测POU2F2 mRNA在ccRCC组织及相应癌旁正常组织以及人肾癌细胞系786-O和ACHN中的表达情况;采用免疫组织化学方法检测POU2F2蛋白在ccRCC及相应癌旁正常组织中的表达;细胞功能试验检测敲低POU2F2对肾癌细胞体外生物学特征的影响;qRT-PCR和蛋白质免疫印迹实验(Western blot)检测敲低POU2F2对上皮间充质转化(EMT)相关肿瘤标记物mRNA及蛋白表达的影响。结果POU2F2 mRNA在ccRCC组织中表达明显高于癌旁正常组织,与患者性别、WHO/ISUP核分级、TNM分期相关。POU2F2蛋白在ccRCC中阳性表达率明显高于癌旁正常组织,并与肿瘤病理分级、TNM分期相关。与对照组相比,sh-POU2F2-1013质粒转染786-O细胞后POU2F2 mRNA相对表达量明显减低(P<0.05);且细胞增殖能力显著减弱、克隆形成率显著减少、迁移能力下降、侵袭能力下降(P<0.05)。敲低POU2F2可下调肾癌786-O细胞中EMT标志物中MMP2、MMP9、Twist mRNA和蛋白表达水平,同时上调E-ca表达水平。结论POU2F2 mRNA在ccRCC组织及肾癌细胞中明显上调,敲低POU2F2能抑制肾癌细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力等恶性表型,减缓或抑制肾癌的发生发展。

长链非编码RNA AW112010通过miR-204/POU2F2轴改善衰老小鼠脂肪细胞的胰岛素抵抗

目的探讨长链非编码RNA AW112010(lncRNA AW112010)是否可能通过miR-204/POU类同源盒2(POU2F2)信号通路改善衰老脂肪细胞的胰岛素抵抗。方法体内实验:将C57BL/6小鼠按体重分成年轻对照组(4月龄)、衰老模型组(18月龄);实时荧光定量PCR及Western印迹法检测附睾脂肪组织中lncRNA AW112010、miR-204-5p、POU2F2、衰老相关指标(p16、p21)及胰岛素信号通路基因[胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)]的表达量。体外实验:用阿霉素诱导3T3-L1衰老脂肪细胞模型,β-gal染色观察细胞衰老,成功构建miR-204抑制剂及miR-204模拟物的小干扰RNA,转染3T3-L1脂肪细胞。结果实时荧光PCR与Western印迹结果表明,与年轻小鼠比较,衰老小鼠附睾脂肪组织中AW112010的表达水平增高,而miR-204-5p的表达水平降低;衰老小鼠附睾脂肪组织中POU2F2、p16、p21的表达水平增高,而INSR、IRS1、PI3K、GLUT4 mRNA及蛋白的表达水平降低。β-gal染色结果表明,阿霉素诱导的3T3-L1衰老脂肪细胞数量明显增多,且与对照组相比,阿霉素诱导的衰老脂肪细胞中AW112010、POU2F2、p16、p21的表达量增高,而miR-204-5p、INSR、IRS1、PI3K、GLUT4的表达量降低,培养基中葡萄糖的剩余量增多。与对照组相比,miR-204过表达后,衰老指标p16、p21及靶基因POU2F2的表达量降低;INSR、GLUT4的表达量增高。结论衰老小鼠脂肪细胞中上调的lncRNA AW112010可能通过靶向miR-204-5p/POU2F2/IRS1导致胰岛素抵抗。

POU6F2-AS2靶向miR-125b调控口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的机制

目的探讨长链非编码基因(LncRNA)-POU6F2-AS2对微小RNA(miR)-125b的调控作用及对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、侵袭和转移的影响。方法取正常口腔上皮细胞HOK和OSCC细胞系(CAL-27、TSCCa、Tca8113),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT)-PCR检测各组细胞LncRNA-POU6F2-AS2、miR-125b表达水平。取CAL-27细胞,分为空白对照组、LncRNA-POU6F2-AS2干扰载体(Si-POU6F2-AS2)组、LncRNA干扰阴性对照(Si-NC)组、miR-125b激动剂(miR-125b-mimic)组、miR-125b激动剂阴性对照(miR-125b-NC)组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Transwell小室法检测细胞迁移侵袭能力;RT-qPCR检测各组细胞LncRNA-POU6F2-AS2、miR-125b表达水平;Western印迹检测各组细增殖标记蛋白(Ki67)、侵袭迁移相关蛋白E-钙黏蛋白(cadherin)及Yes相关蛋白(YAP)、miR-125b下游调控因子-抗氧化蛋白质(PRXL2)、类胡萝卜素2相关因子(NRF)2、钙信号转导因子(TACSTD)2蛋白相对表达水平。共转染Si-POU6F2-AS2与miR-125b抑制剂(miR-125b-inhibitor)及其阴性对照试剂,并分为Si-NC+miR-125b-NC组、Si-NC+miR-125b-inhibitor组、Si-POU6F2-AS2+miR-125b-NC组、Si-POU6F2-AS2+miR-125b-inhibitor组及未转染(空白对照)组,检测各组细胞Ki67、E-cadherin、YAP蛋白相对表达水平。结果与HOK细胞系相比,OSCC细胞CAL-27、TSCCa、Tca8113中LncRNA-POU6F2-AS2表达明显升高,miR-125b表达明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,Si-POU6F2-AS2组及miR-125b-mimic组细胞增殖活性、侵袭迁移能力、LncRNA-POU6F2-AS2表达、Ki67、YAP、PRXL2、NRF2、TACSTD2蛋白表达明显降低,miR-125b表达、E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,Si-NC+miR-125b-inhibitor组细胞Ki67、YAP蛋白表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);Si-POU6F2-AS2+miR-125b-NC组细胞Ki67、YAP蛋白表达明显降低,E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。与Si-POU6F2-AS2+miR-125b-NC组相比,Si-POU6F2-AS2+miR-125b-inhibitor组细胞Ki67、YAP蛋白表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。结论敲低Lnc RNA-POU6F2-AS2可能通过上调miR-125b表达抑制OSCC细胞的恶性生物学行为。

长链非编码RNA POU6F2-AS2在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA POU6F2-AS2在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集2017年5月至2018年5月期间川北医学院附属医院普外科收治的73例行胃癌根治手术患者的胃癌组织及其配对的距离癌组织5 cm处的癌旁胃黏膜组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测胃癌组织及其相对应的癌旁组织中POU6F2-AS2表达水平,采用χ2检验分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系,通过Kaplan Meier Plotter数据库数据分析POU6F2-AS2的表达与胃癌患者总体生存率的关系。结果胃癌组织中POU6F2-AS2相对表达量明显高于其对应的癌旁组织(P<0.050)。根据胃癌组织与其对应的癌旁组织中POU6F2-AS2表达水平将POU6F2-AS2在癌组织中高于其癌旁组织的病例归为高表达(43例),反之归为低表达组(30例)。分析POU6F2-AS2表达高低与胃癌患者临床病理特征的关系发现,POU6F2-AS2高表达与肿瘤浸润深度(P=0.022)和TNM分期(P=0.032)有关,而与胃癌患者的性别、年龄、是否吸烟、是否饮酒、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、远处转移、脉管浸润、神经浸润、肝脏转移、有无腹水及脂肪结节是否转移均无关(P>0.050)。通过Kaplan Meier Plotter数据库数据分析631例胃癌患者POU6F2-AS2表达水平与患者总体生存率的关系发现,POU6F2-AS2高表达组相对于其低表达组预后更差(P=0.001)。结论 POU6F2-AS2高表达与肿瘤浸润深度和TNM分期有关,其可能参与了调控胃癌的发生及发展,有希望作为潜在的胃癌基因诊断和治疗的重要靶点以及评估胃癌患者预后的生物标志物。