耶氏酵母菌POX5基因的敲除

对于耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中编码与γ–癸内酯合成相关的乙酰辅酶A氧化酶基因(POX1-POX5)中的POX5基因用Cre/loxP同源重组系统进行敲除。设计含有60个核苷酸与POX5基因的ORF两侧序列同源的长引物,以pUG6为模板构建带有Cre/loxP系统的敲除组件,之后转化耶氏酵母YL(Yarrowia lipolytica),通过PCR确定阳性克隆子。将质粒pSH65转入阳性克隆子,半乳糖诱导表达Cre酶以切除KanMX基因并经过PCR确认。最后在YPD培养基中连续传代培养丢失pSH65质粒,成功获得POX5缺陷型菌株。