I2PP2A蛋白调控PP2A/Akt信号通路对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(protein phosphatase 2A inhibitor-2,I2PP2A)调控PP2A/Akt信号通路对人神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞转染I2PP2A-shRNA干扰质粒及对照质粒后分为siI2PP2A组及siC组。CCK-8、细胞克隆形成实验、细胞周期实验用于检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞内相关蛋白相对表达量;磷酸酶检测系统试剂盒测定PP2A活性;给予PP2A抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)处理细胞并检测增殖活性及PP2A/Akt信号通路变化。结果与siC组比较,siI2PP2A组48h及72h的吸光度(A)值下降(P<0.01),细胞克隆形成数目显著降低(P<0.01);siC组G_(0)/G_(1)期、S期、G_(2)/M期、细胞凋亡比例分别为43.29%±3.68%、31.76%±2.42%、24.96%±2.34%、1.89%±1.09%,siI2PP2A组为57.00%±3.90%、25.88%±2.06%、17.13%±2.07%、15.18%±5.60%,与siC组比较,siI2PP2A组G_(0)/G_(1)期细胞比例和凋亡细胞比例升高,S期和G_(2)/M期细胞比例下降(P<0.05)。同时,siI2PP2A组较siC组PP2A活性显著增加(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2、p-Akt蛋白相对表达量降低(P<0.05),Bax、cleaved-PARP蛋白相对表达水平升高(P<0.01)。进一步给予PP2A抑制剂OA后,可部分恢复siI2PP2A组CyclinD1、Bcl-2、p-Akt、Bax、cleaved-PARP蛋白水平(P<0.05)并逆转下调I2PP2A导致的增殖抑制(P<0.05)。结论下调I2PP2A介导的神经母细胞瘤细胞增殖抑制和凋亡增加可能与PP2A/Akt信号通路密切相关。

基于PP2A/AKT通路探讨扶正祛毒汤对急性髓系白血病-完全缓解患者CD34^(+)细胞源DC激发T细胞的影响

目的:探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病-完全缓解(AML-CR)的可能作用机制。方法:运用血清药理学、Ficoll密度梯度离心、免疫磁珠阳性选择、细胞培养、流式细胞分析、Western Blot和RT-qPCR等技术检测DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达,DC激发T细胞中CTLA-4、PP2A、AKT、p-AKT蛋白和mRNA的表达。结果:扶正祛毒汤含药血清能诱导AML-CR患者CD34^(+)细胞形成典型的DC形态,显著增加DC表面CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达(P<0.05),上调DC激发T细胞中PP2A蛋白及mRNA的表达(P<0.05),下调CTLA-4、AKT蛋白及mRNA的表达(P<0.05),下调p-AKT蛋白表达(P<0.05)。结论:扶正祛毒汤治疗AML-CR的作用机制可能与该方能够促使AML-CR患者CD34^(+)细胞源DC成熟,抑制CTLA-4与CD80、CD86的结合,有效激活T细胞,调控PP2A/AKT信号通路,进而杀伤白血病细胞有关。

蛋白磷酸酶2A对机体能量代谢影响的研究进展

蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是一种丝/苏氨酸磷酸酶,由A、B、C共3种亚基组成。研究显示,PP2A可通过催化蛋白质的去磷酸化反应,参与多种酶及转录因子的调控,在能量代谢、DNA损伤与修复、蛋白质翻译、细胞周期调控和信号转导等方面发挥重要作用。该文就PP2A的结构与调控、对能量代谢的影响以及在相关疾病发生中的作用进行综述。

缺氧/复氧引起H9C2细胞eNOS Ser633磷酸化水平降低的调控机制

目的:初步探讨缺氧/复氧(H/R)损伤过程心肌细胞株H9C2中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser633磷酸化水平的变化及其可能的调控机制。方法:采用缺氧4h培养后恢复常氧条件培养12、16或24h造成H9C2细胞H/R损伤。选取缺氧4h/复氧12h(H4/R12)进行后续实验。(1)H/R后用钙离子泵抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG),1.0×10^(-6) mol/L处理细胞1h;用PI3K/Akt抑制剂LY294002(5.0×10^(-5) mol/L)预处理1h,再进行H/R及TG处理1h。(2)用PP2A/PP1抑制剂冈田酸Okadaic acid(OA)低剂量(5×10^(-8) mol/L)、高剂量(1×10^(-6) mol/L)预处理细胞30 min,再进行H/R。用Western blot检测eNOS总蛋白及eNOS Ser633磷酸化水平,化学比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量。结果:(1)H/R损伤后心肌细胞eNOS Ser633磷酸化水平降低(P<0.05);TG明显上调eNOS Ser633磷酸化水平(P<0.05),LY294002预处理可抑制TG的上调作用(P<0.05);低剂量OA、高剂量OA预处理均可上调H/R损伤后eNOS Ser633磷酸化水平(P<0.05),且高、低剂量组间无明显差异。(2)H/R损伤后培养基中NO含量减少(P<0.05);TG、低剂量OA、高剂量OA处理均可增加H/R损伤后培养基中NO含量(P<0.05)。结论:H/R损伤可明显降低H9C2细胞中eNOS Ser633水平,这可能是由于H/R过程中既有PI3K/Akt通路被抑制,又有PP2A活性增强所致。

癌蛋白SET在胃癌中的表达及作用机制研究

目的:探讨癌蛋白SET(SE translocation)在胃癌中的作用机制及生物学功能。方法:用Western blot、免疫组化实时荧光定量PCR法检测SET及其下游相关蛋白在胃癌组织及细胞中的表达及活化;siRNA及shRNA在胃癌细胞中敲低SET表达,MTT法检测细胞增殖能力,裸鼠皮下荷瘤模型检测SET对肿瘤发生的影响;Transwell侵袭实验及划痕实验检测细胞转移能力;Western blot及蛋白酶活性实验检测SET下游因子表达及活化。结果:与癌旁组相比,SET表达量在胃癌组织中异常上调。敲低SET后发现细胞增殖、肿瘤生长、集落形成、转移能力降低。SET在胃癌发生和转移中的作用主要通过调节其下游蛋白磷酸酶2A(PP2A)发挥作用。结论:SET抑制PP2A在胃癌增殖和转移中具有重要作用。SET可以作为胃癌的诊断标志物及潜在药物治疗靶点。