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小菜蛾颗粒体病毒PP31蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 王思民 张鸿杰 黎路林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期129-133,共5页
杆状病毒PP31是一种磷酸化的DNA结合蛋白。pp31基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。用PCR方法从小菜蛾颗粒体病毒基因组扩增pp31基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导,在被转化菌株中... 杆状病毒PP31是一种磷酸化的DNA结合蛋白。pp31基因存在于所有已完成测序的鳞翅目昆虫杆状病毒。用PCR方法从小菜蛾颗粒体病毒基因组扩增pp31基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导,在被转化菌株中表达产生出携带6×His标签的PP31蛋白。用ProBondTM树脂纯化的His-PP31融合蛋白大小约29 kD左右。用该融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得PlxyGV PP31蛋白抗血清。Western blot分析显示,所获得的抗血清具有较强的特异性和高效价,可应用于PlxyGV PP31蛋白分析。 展开更多
关键词 小菜蛾颗粒体病毒 pp31 原核表达 多克隆抗体
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小菜蛾颗粒体病毒PP31与两种宿主蛋白发生相互作用 被引量:1
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作者 刘攀峰 王思民 +1 位作者 刘音 黎路林 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期15-22,共8页
在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存... 在病毒侵染和复制过程中,病毒与宿主之间存在广泛的蛋白质-蛋白质相互作用。本研究建立了一个小菜蛾幼虫cDNA文库,用于筛查与小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)蛋白相互作用的小菜蛾幼虫蛋白。pp31同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒。其编码产物是一种磷蛋白,与病毒基因表达调控相关。本研究通过酵母双杂交实验从小菜蛾幼虫cDNA文库中筛选出两个与PlxyGV PP31相互作用的蛋白质基因。序列分析结果显示这两个基因的预期编码产物分别是小菜蛾蛋白激酶C受体(RACK)和一种甲硫氨酰氨肽酶2(MetAP2)同源蛋白。原核表达和蛋白质纯化实验结果显示,rack与6-组氨酸编码序列的融合基因的表达产物是一个38kD多肽。在GST-pulldown实验中,RACK蛋白随同GST-PP31融合蛋白一起吸附于GST亲和树脂,进一步证实了小菜蛾RACK蛋白与PlxyGV PP31发生相互作用。 展开更多
关键词 小菜蛾颗粒体病毒 pp31 蛋白激酶C受体 甲硫氨酰氨肽酶2 病毒-宿主相互作用蛋白
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拟南芥蛋白磷酸酶PP2C31的盐胁迫响应功能研究 被引量:2
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作者 张弛 蔚静玲 +2 位作者 储谟立 张邦民 兰文智 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2018年第18期2070-2075,共6页
蛋白磷酸酶2C(protein phosphatase 2C,PP2Cs)家族是植物细胞去除磷酸化蛋白中磷酸基团的重要蛋白磷酸酶。拟南芥含有80多个编码PP2Cs的基因,然而大部分成员在植物抗逆反应中的功能仍有待研究。本文发现拟南芥PP2C31(At2g40860)基因的... 蛋白磷酸酶2C(protein phosphatase 2C,PP2Cs)家族是植物细胞去除磷酸化蛋白中磷酸基团的重要蛋白磷酸酶。拟南芥含有80多个编码PP2Cs的基因,然而大部分成员在植物抗逆反应中的功能仍有待研究。本文发现拟南芥PP2C31(At2g40860)基因的表达受高盐抑制,其T-DNA插入突变体(pp2c31-1突变体和pp2c31-2突变体)表现出对高盐胁迫的耐受性且Na+含量较低。实时定量PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)分析发现,PP2C31基因在植物体各组织均有表达;亚细胞定位结果显示PP2C31蛋白定位于细胞质和细胞核中。利用脱落酸合成抑制剂和外源脱落酸处理发现,突变体植株的高盐耐受性和PP2C31基因的表达均不受脱落酸的影响。研究结果表明:PP2C31蛋白是拟南芥响应高盐胁迫的一个非脱落酸依赖的负调控组分。 展开更多
关键词 植物学 蛋白磷酸酶 拟南芥 盐胁迫 PP2C31 脱落酸
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中国棉铃虫核多角体病毒基因组XbaI-I片段的序列分析 被引量:3
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作者 冯枞棣 陈新文 +1 位作者 Just M.Vlak 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期125-131,共7页
报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (HaSNPV)XbaI I片段的序列结构。该片段在基因组上定位于 18.4~2 2 .8m .u .,包括 8个完整的开放阅读框架和 p47的 5′端部分序列 :其中ubiquitin ,39K/pp31,lef - 11,p47,Ac34 ,Ac38和Lsel2 5homolo... 报道了棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (HaSNPV)XbaI I片段的序列结构。该片段在基因组上定位于 18.4~2 2 .8m .u .,包括 8个完整的开放阅读框架和 p47的 5′端部分序列 :其中ubiquitin ,39K/pp31,lef - 11,p47,Ac34 ,Ac38和Lsel2 5homologue 7个基因是杆状病毒的同源基因 ,另外两个orf5 0 7和orf10 80是HaSNPV的特有基因 ,且具有典型的早期表达基因启动子的特征 ,经软件分析发现这两个基因推导的产物具有典型的跨膜压结构。序列比较分析表明 ,ubiquitin基因与其它杆状病毒的同源基因有相同的保守区 。 展开更多
关键词 中国 棉铃虫核多角体病毒 基因组XbaI-I片段 序列分析
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Phosphorus speciation and colloidal phosphorus responses to short-term cessation of fertilization in a lime concretion black soil
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作者 Shanshan BAI Jinfang TAN +3 位作者 Zeyuan ZHANG Mi WEI Huimin ZHANG Xiaoqian JIANG 《Pedosphere》 SCIE CAS CSCD 2023年第6期948-959,共12页
Long-term excessive application of mineral fertilizer has led to soil acidification and phosphorus(P) accumulation, increasing the risk of P loss and environmental pollution, and cessation of fertilization is widely c... Long-term excessive application of mineral fertilizer has led to soil acidification and phosphorus(P) accumulation, increasing the risk of P loss and environmental pollution, and cessation of fertilization is widely considered as a cost-effective management strategy to relieve this situation;however, how such cessation influences P speciation and concentrations in a bulk soil and colloidal fractions and whether decreasing P concentration might maintain soil fertility remain unclear. In this study, the effects of long-term fertilization(ca. 40 years) and short-term cessation of fertilization(ca. 16 months) on inorganic, organic,and colloidal P in lime concretion black soil were investigated using P sequential fractionation and31P nuclear magnetic resonance spectroscopy. After long-term fertilization, available P, dicalcium phosphate, iron-bound P, orthophosphate monoesters, and orthophosphate diesters increased significantly, but soil p H decreased by ca. 2.8 units, indicating that long-term fertilization caused soil acidification and P accumulation and changed P speciation markedly. In contrast, short-term fertilization cessation increased soil p H by ca. 0.8 units and slightly reduced available and inorganic P. Available P after fertilization cessation was 22.9–29.8 mg kg-1, which was still sufficient to satisfy crop growth requirements. Additionally, fertilization cessation increased the proportions of fine colloids(100–450 nm, including nontronite and some amorphous iron oxides) and drove a significant release of iron/aluminum oxide nanoparticles(1–100 nm) and associated P with orthophosphate and pyrophosphate species. In summary, short-term fertilization cessation effectively alleviated soil acidification and inorganic P accumulation, while concomitantly maintaining soil P fertility and improving the potential mobilization of P associated with microparticles. 展开更多
关键词 Fe/Al oxide nanoparticles fine colloids P accumulation 31pP nuclear magnetic resonance P sequential fractionation soil acidification
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