人疱疹病毒7型pp85重组表达及抗体制备

目的制备人疱疹病毒7型(HHV-7)pp85蛋白及其抗体。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法自HHV-7型YY5分离株中扩增出pp85基因,经测序后构建原核表达质粒PGEX-6p-1+pp85b。重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta,诱导蛋白表达。应用酶切鉴定、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。表达的蛋白经亲和层析纯化后,免疫动物制备多克隆抗体,并通过免疫荧光法鉴定抗体的特异性。结果成功地获得了高纯度的pp85融合蛋白,纯度可达90%以上;免疫动物后制备的多克隆抗体效价可达1∶102400,该抗体能特异识别HHV-7抗原,而不与HHV-6反应。结论获得高纯度的HHV-7pp85融合蛋白及其高效价的抗体,将进一步应用于临床检验。

澳洲坚果MiSTPP3和MiSTPP7基因克隆与表达分析

以澳洲坚果品种‘O.C.’为试材,利用RT-PCR技术克隆获得2个丝氨酸/苏氨酸磷酸酶基因,分别命名为MiSTPP3和MiSTPP7,其编码序列长度分别为2095 bp和1700 bp。序列分析和系统进化分析表明,MiSTPP3含有MPP;P5;结构域,属于PP5亚家族;MiSTPP7含有MPP;P7结构域,属于PP7亚家族。蛋白理化性质和亚细胞定位分析表明,MiSTPP3是一个稳定的亲水性蛋白,可能定位于质膜;MiSTPP7是一个不稳定的亲水性蛋白,可能定位于线粒体基质。生物信息学分析表明,MiSTPP3和MiSTPP7都是非分泌跨膜蛋白,其二级和三级结构的主要元件都是α螺旋、无规则卷曲和延伸链。RT-qPCR分析表明,MiSTPP3和MiSTPP7在澳洲坚果根、茎、叶、花和小果中都有不同的表达量;MiSTPP3受低温胁迫下调表达,而MiSTPP7上调表达,且二者都受干旱胁迫上调表达。因此,推测MiSTPP3和MiSTPP7可能参与澳洲坚果的生长发育及逆境胁迫反应。

蛋白磷酸酶5在结肠癌中的表达及临床意义

目的探究蛋白磷酸酶5(PP5)在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达差异情况并分析PP5表达与临床病理特征的关系,讨论PP5表达在结肠癌中临床意义。方法应用免疫组织化学技术对105例结肠癌患者癌组织及20例癌旁正常组织进行半定量分析。结果结肠癌组织中PP5的表达与正常组织相比明显上调(P<0.01)。在结肠癌患者组织中PP5的高表达与肿瘤浸润程度更深(P=0.025),淋巴结有转移(P=0.010),TNM分期晚(P=0.017),肿瘤更大(P=0.026),分化程度更差(P=0.034)呈正相关。多因素生存分析表明PP5的高表达是结肠癌患者术后生存时间短的独立的预后因素。结论在结肠癌中PP5的高表达有可能是预后不良的一个独立预后因素。

风暴之后——“英国遗产”应对气候变化的历史环境保护策略分析

"英国遗产"是英格兰文化遗产的核心管理机构,近10多年来,英国遗产颁布了一系列回应气候变化的历史环境保护建议,成为2010年3月23日新颁布的"规划政策声明5:历史环境规划"(PPS5)之基础。它重申需保护历史环境,不断降低传统建筑能源消耗;历史环境是不可再生的稀缺资源,使用任何再生能源技术,均应保证对历史环境干扰降低至最少。从1997年英国遗产应对气候变化的首个研究成果"风暴之后"入手,通过分析英国独特的地理环境和文化遗产地位,梳理处于全球气候变化背景下的英国历史环境保护新趋势。

二苯乙烯苷对冈田酸诱导的NG108-15细胞tau蛋白磷酸化的干预作用

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对冈田酸诱导的NG108-15细胞增殖及磷酸激酶PP2A、PP2B、PP5和tau蛋白磷酸化的影响,探讨其抗老年痴呆的作用机制。方法采用MTT法观察TSG作用于冈田酸诱导的NG108-15细胞24h的增殖情况。取对数生长期的NG108-15细胞,将其分为正常组,模型组,以及TSG低、中、高剂量(50nmol·L^(-1)、100nmol·L^(-1)、200nmol·L^(-1))组。利用AO/EB双荧光染色法检测TSG对细胞凋亡的影响;蛋白质免疫印迹法(Western Immunoblotting)检测PP2A、PP2B、PP5、tau和P-tau的表达。qRT-PCR法检测PP2A、PP2BmRNA的变化。免疫荧光(immunofluorescence)检测PP2A、PP2B和tau蛋白表达和分布。结果 TSG能够增强冈田酸诱导的NG108-15细胞的增殖能力,呈一定的剂量依赖;与模型组比较,TSG能抑制冈田酸对NG108-15细胞的衰老。TSG能提高PP2A、PP2B、PP5蛋白和降低P-tau蛋白的表达;此外,还能提高PP2A、PP2BmRNA的转录水平。结论二苯乙烯苷能提高NG108-15细胞的抗衰老能力,降低tau蛋白的异常磷酸化,其机制可能是与参与下调tau蛋白磷酸化的磷酸酶有关。

阿尔茨海默病小胶质细胞CX3CR1产物增加并受去甲肾上腺素的调节

去甲肾上腺素能神经元的丧失及其引起的脑去甲肾上腺素(NA)水平的降低与阿尔茨海默病(AD)的进展有关。这似乎主要是由于NA减少小胶质细胞活化的能力。我们以前观察到NA诱导神经元产生趋化因子Fractalkine/CX3CL1。小胶质细胞CX3CR1(CX3CL1的唯一受体)的激活会减少小胶质细胞的活化,已知这在很大程度上引起AD特征性的神经元损伤。因此,操控小胶质细胞中CX3CR1的产物可能转化为对CX3CL1抗炎作用的增强或抑制。为了确定小胶质细胞CX3CR1产物在AD中是否发生改变,以及NA是否可以控制这种改变,我们在5xFAD小鼠和人类AD脑样本中分析了CX3CR1的表达和合成。此外,我们分别在小胶质细胞培养物和小鼠中分析了NA及NA再摄取抑制剂瑞波西汀的作用。我们的结果表明,CX3CR1在AD大脑皮质中的产量增加,而给予瑞波西汀进一步增加了它的含量,并增强了小胶质对淀粉样β斑的反应性。然而,直接向原代大鼠小胶质细胞或人类HMC3细胞给予NA会抑制CX3CR1的产生,这表明小胶质细胞对NA的反应可能会在不存在产生CX3CL1的神经元或其他非小胶质外在因素的作用下发生改变。

蜗牛加速 6款游戏同期发布

苏州蜗牛一直在自主研发网络游戏方面有着自己与众不同的见解，就像该公司创始人石海浅黄色的长发，独特、张扬而有个性。

地克珠利对柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5表达的影响

建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染鸡动物模型,收集获得E. tenella第2代裂殖子,通过PCR扩增E. tenella第2代裂殖子丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5(serine/threonine protein phosphatase type 5,Et PP5)基因编码序列,构建pET-28a-Et PP5表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化表达蛋白并免疫BABL/c小鼠制备Et PP5抗血清。采用免疫荧光和Western-blot技术检测第2代裂殖子Et PP5蛋白的表达。结果显示,30℃时,用1 mmol/L的IPTG诱导pET-28a-Et PP5表达的融合蛋白大多以包涵体形式存在。Et PP5主要分布在E. tenella第2代裂殖子的细胞质中,细胞核也有少量分布。经地克珠利处理后,E. tenella第2代裂殖子Et PP5蛋白表达降低了47.65%(P<0.01)。提示,地克珠利可能通过作用Et PP5发挥抗球虫作用,这为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供了理论依据。