人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果 我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3～ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论 自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。

荧光定量PCR和外周血白细胞pp65抗原血症实验对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测

目的 探讨肾移植术后 3个月巨细胞病毒 (CMV)的感染状况 ,比较荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验两种方法对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测情况和使用价值。方法 分别用荧光定量PCR、外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验和ELISA法对我院 2 0 0 1年 1月～2 0 0 2年 12月 5 6例肾移植患肾移植术后 3个月的外周血进行巨细胞病毒的检测。结果 5 6例肾移植患者中CMVpp5 6抗原血症阳性 9例 ( 16 1% ) ,PCR阳性 11例 ( 19 6 % ) ,12例 ( 2 1 4 % )诊断为CMV感染 ,其中 7例为症状性感染 ,5例为无症状性感染。荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的一致性为 92 % ,阳性符合率 6 7% ,阴性符合率 92 %。CMVpp6 5抗原、CMVDNAPCR、CMV IgM的敏感性、特异性分别为 72 %、92 % ;10 0 %、92 % ;4 3%、88%。结论 荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的联合应用 ,对监测CMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观。

急性脱髓鞘脑病患者人巨细胞病毒pp65抗原血症检测的临床意义

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)在急性脱髓鞘脑病(ADBD)中的病原学作用,并评估HCMV-pp65抗原血症在ADBD活动性HCMV感染早期诊断、抗病毒治疗及疗效判断中的价值。方法采用HCMV单克隆抗体免疫荧光法,对64例ADBD患者的外周血进行HCMV-pp65抗原检测,同时采用金标免疫斑点法检测血清HCMV-IgM,并对检测结果以及抗病毒药物应用与疗效进行分析。结果64例ADBD中HCMV-pp65阳性17例(26.6%),HCMV-IgM阳性8例(12.5%);HCMV-pp65阳性者,应用膦甲酸钠治疗9例,痊愈6例(66.7%),好转3例(33.3%);应用无环鸟苷治疗8例,痊愈2例(25.0%),好转4例(50.0%),无效2例(25.0%)。结论HCMV与ADBD的发生密切相关,HCMV-pp65抗原检测是一种敏感性、特异性强的方法,有助于HCMV感染疾病的早期诊断,指导抗病毒治疗及疗效的评价;膦甲酸钠对HCMV感染所致ADBD效果良好。

PP65抗原血症检测法在发热患儿巨细胞病毒感染中的诊断价值

目的探讨低基质磷酸化蛋白（PP65）抗原血症检测法（AA法）对发热患儿巨细胞病毒（CMV）感染的诊断价值。方法对128例发热患儿（发热时间7～14d）采用间接免疫荧光染色法检测PP65抗原血症、酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗CMV抗体（CMV—IgM）、尿光镜找包涵体等三种方法平行检测128例血标本和尿标本。结果PP65抗原血症、CMV—IgM、尿找巨细胞包涵体的阳性检出率分别为17．2％、8．6％、6．3％。PP65抗原血症与CMV—IgM及尿找巨细胞包涵体的阳性符合率分别为50％（11／22）、36％（8／22）。19例患儿随着病情好转，PP65抗原血症水平从阳性转为阴性，另3例临床痊愈时复查PP65仍为阳性，其中2例2周后复查PP65转为阴性，1例3周后复查转为阴性。结论PP65抗原血症检测法对CMV活动性感染具有早期诊断的意义，可以检测病情变化、指导早期干预治疗。

巨细胞病毒抗原血症检测在肾移植术后的应用

目的评估巨细胞病毒抗原血症检测方法对诊断肾移植患者巨细胞病毒感染的意义。方法收集2021年9月至2021年12月昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样,对其进行巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)pp65抗原血症检测与Ig G抗体、CMV DNA结果比较,评估CMV pp65抗原血症结果与肌酐、他克莫司(tacrolimus,Tac/FK506)药物浓度、淋巴细胞亚群的相关性。结果CMV pp65抗原血症结果与CMV DNA结果一致性为65.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CMV pp65抗原血症检测结果与CMV IgG抗体检测结果一致性为57.3%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与肌酐、FK506药物浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与淋巴细胞亚群比较中,仅与NK细胞绝对值差异有统计学意义(P<0.05)。结论CMV pp65抗原与CMV IgG抗体结果一致性为57.3%。CMV pp65抗原与CMV DNA结果一致性为65.5%,两种方法联合检测,对提高CMV感染临床诊断准确率具有一定意义。在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,血清肌酐水平、全血FK506药物浓度两组间差异无统计学意义,NK细胞绝对值差异具有统计学意义,NK细胞绝对值偏高的肾移植患者,发生CMV感染的概率偏低。

pp65抗原血症监测异基因造血干细胞移植受体CMV的感染

人巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染是异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）术后重要并发症和首位感染性死亡原因。若不加以预防或治疗，12％～20％的Allo-HSCT患者术后会发生严重的CMV感染，病死率〉85％。

pp65抗原血症检测法诊断婴儿巨细胞病毒感染的研究

目的 探讨pp6 5抗原血症检测方法 (AA)对新生儿和小婴儿巨细胞病毒 (CMV)感染的诊断价值。方法 对 2 1例有典型CMV感染症状患儿及 42例无典型症状的患儿 ,进行外周血AA、尿PCR及血清ELISA法IgM检测 ,比较 3种方法的检测结果 ,结合抗原血症的量化结果及对部分患儿的短期随访 ,分析AA的临床应用价值。结果 (1) 6 3例中CMV症状性感染 15例 ,亚临床型感染 8例。症状性感染组AA、PCR、ELISA阳性检出率分别为 93% (14/ 15 )、10 0 % (15 / 15 )和 80 % (12 / 15 ) ;亚临床型感染组阳性检出率分别为 5 0 % (4/ 8) ,75 % (6 / 8)和 38% (3/ 8)。AA相对于PCR的敏感性为 86 %(18/ 2 1) ,特异性为 10 0 %。 (2 )症状性感染通常伴高水平抗原血症 [(4～ 2 0 6 )个 / 1 5× 10 5多形核白细胞 (PMNL) ],亚临床型感染通常抗原血症水平较低 [(0～ 3)个 / (1 5× 10 5)PMNL],症状性感染组抗原血症水平明显高于亚临床型感染组 (P <0 0 1)。 (3)症状性感染组中 4例婴儿肝炎患儿恢复期AA转为阴性或低水平。结论 pp6 5抗原血症检测方法是一种敏感、特异的检测方法 ,量化结果有助于诊断活动感染及监测病情。

巨细胞病毒pp65抗原血症检测

目的 评估巨细胞病毒 (CMV) pp6 5白细胞抗原血症在骨髓移植或外周血干细胞移植后活动性CMV感染早期诊断和CMV病的预测、指导CMV亚临床期感染的抗病毒治疗及抗病毒疗效判断中的价值。方法 1999年 9月～ 2 0 0 0年 4月共收集 2 10份乙二胺四乙酸 (EDTA)抗凝血 ,骨髓移植或外周血干细胞移植患者 36例。移植前用ELISA法检测患者CMV特异性抗体IgG和IgM ,移植后 3周起采用CMVBrite试验盒每周检测 1次CMV pp6 5抗原血症 ,并计数抗原阳性细胞 ,直到移植后 10 0d或治疗后抗原阴转、死亡或出院。移植后患者第 1次检测到 pp6 5抗原阳性细胞即开始更昔洛韦抗病毒治疗。结果 36例骨髓移植或干细胞移植患者于移植前CMV特异性抗体IgG均阳性 ,IgM均阴性 ;移植后 16例出现CMVpp6 5抗原血症 ,其中 15例出现有症状的CMV感染或CMV病 ,14例接受更昔洛韦抗病毒治疗 ,12例治疗后抗原血症阴转、症状消失 ,死亡 2例 (病死率 14.2 % ) ,未经抗病毒治疗者 2例均死亡 (P <0 .0 1)。 16例 pp6 5抗原阳性患者中 ,仅 2例CMV特异性抗体IgM阳性。 10名健康对照组的CMV特异性抗体IgG均阳性 ,IgM均阴性 ,pp6 5抗原血症检测均阴性。结论 本研究结果提示 ,人CMV pp6 5白细胞抗原血症检测可作为骨髓移植后CMV病的预测指标 。

孕妇人巨细胞病毒-PP65及IgM的检测分析

目的探讨妊娠妇女人巨细胞病毒的感染状况及监测效果。方法分别采用酶联免疫吸附试验和间接荧光免疫染色法检测2004年1月～2007年6月在深圳市福田区第二人民医院行产前检查的760例孕妇外周血人巨细胞病毒-PP65抗原血症和人巨细胞病毒-IgM。结果孕妇人巨细胞病毒感染阳性率为4．87％，其中人巨细胞病毒-IgM抗体阳性率为1．58％（6／380），外周血白细胞人巨细胞病毒-PP65抗原血症的检测结果阳性率为8．16％（31／380）。两种检测方法比较χ^2=18．99，P〈0.001，有非常显著性差异。结论同时应用人巨细胞病毒-IgM抗体和人巨细胞病毒、PP65抗原检测方法可对孕妇妊娠早期人巨细胞病毒活动性感染进行监测及治疗指导。

酶联免疫吸附试验检测人类巨细胞病毒抗体在肝移植患者术后诊断及监测中的应用

目的客观评价传统的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人巨细胞病毒（HCMV）抗体对肝移植患者术后诊断和监测HCMV感染的意义。方法对108例肝移植术后患者分别用ELISA检测HCMV特异性抗体IgM、用免疫组化法检测HCMV低基质磷酸化蛋白（pp65）抗原血症、用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HCMV DNA，将这3种方法的检测结果进行比较。结果108例患者中，IgM阳性者8例，pp65抗原阳性者10例，DNA阳性者12例。ELISA的敏感性较其他2种方法略低，但3种方法的特异性和阴性预测值之间差异无显著性。此外，ELISA检测HCMV IgM阳性者，其结果均在临床症状出现后6～14d检出，而pp65阳性者和HCMV DNA阳性者均在临床症状出现前被检出。结论应用ELISA检测HCMV抗体可以用于诊断监测HCMV感染情况，但有一定的局限性。

应用荧光定量PCR技术检测小儿尿液中人巨细胞病毒

目的:探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液中人巨细胞病毒(HCMV)对儿童HCMV活动性感染的检测价值。方法:对收集的175份临床标本分别用FQ-PCR方法及低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原血症检测方法进行平行检测比较。结果:71例临床患者尿液FQ-PCR检测阳性59例;血液pp65抗原检测阳性53例。尿液中HCMVD-NA检测结果与HCMVpp65抗原血症的一致性为84·2%。结论:FQ-PCR检测敏感性要高于pp65抗原血症检测,可以有效提示体内病毒的活跃程度,具有良好的应用价值。

异基因骨髓移植中巨细胞病毒的临床检测

在异基因骨髓移植中 ,巨细胞病毒 (CMV)感染常可引起致命危险及移植失败 ,因而探索早期准确检测CMV感染的有效实验手段至关重要。本文介绍了传统的CMV的培养法及近年来发展起来的抗原检测方法和分子生物学方法。

HCMV-PP65和HCMV-DNA与孕妇HCMV感染的相关性研究

目的探讨妊娠妇女HCMV的感染状况。方法采用间接免疫荧光染色法检测孕妇外周血白细胞HCMV-pp65及FQ-PCR检测其孕妇血浆HCMV-DNA,以此来作为判断妊娠妇女HCMV感染的观察指标。结果100例妊娠妇女HCMV-PP65抗原血症阳性为8例,阳性率为8%,HCMV-DNA的阳性为9例,阳性率为9%。两者均阳性为6例。两种检测方法一致率为95%。一致性较好,两者之间的阳性检出率无显著性差异(χ2=0.064P>0.05)。结论应用HCMV-pp65抗原检测及HCMV-DNA的检测可以对孕妇孕娠早期HCMV活动性感染进行监测及指导治疗,对预防及降低胎儿宫内感染和优生优育都有着极其重要的意义。

新生儿人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展

新生儿巨细胞病毒性疾病是一种新生儿常见疾病,因其发病隐匿,故临床上以实验室检测为诊断疾病的关键。本文综述了实验室常用的检测方法,比较了各种检测方法的利弊及临床的应用状况和前景,为医生合理地诊断新生儿巨细胞病毒性疾病提供参考。

2010年“检验医学新技术”(国家级)继续教育试题答案

一、填空题 1．美国； 2．双重扩增免疫测定，沙眼衣原体单克隆抗体及酶免信号放大系统； 3．HCMVpp65抗原血症；

早期监测人巨细胞病毒激活感染的两种检测方法的比较

目的 探讨人巨细胞病毒 (HCMV)的低基质磷酸化蛋白 (pp6 5 )抗原血症检测与荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)方法 ,对不同人群中HCMV活动性感染的检测价值。方法 用 2种方法对从不同人群 (共 10 6例 )中收集的 2 0 4份血标本进行平行检测比较。结果 HCMVpp6 5抗原血症与血浆中HCMVDNA检测结果的一致性为 84 .8% ,相关性很高 (r=0 .86 1) ;与外周血多形核细胞 (PMNLs)中HCMVDNA检测结果的一致性为 79.8%。6例骨髓移植患者有 5例均在术后 30～ 5 0d间出现HCMVDNA拷贝数增加 ,同一时间PMNLs中HCMVDNA的拷贝数高于血浆 (81 7% )。免疫状况不同群体间HCMV激活程度不同 ,但无论有无免疫能力 ,有症状HCMV感染者HCMVDNA拷贝数平均值(7.71× 10 3 /ml)与HCMVpp6 5抗原阳染细胞数平均值 (10 4个 / 2× 10 5)均大于无症状HCMV感染者(1 5 3× 10 2 /ml;2 7个 / 2× 10 5)。结论 FQ PCR方法对监测低水平HCMV复制更为敏感 ,但HCMVpp6 5抗原血症检测对HCMV病的预测以及对抗HCMV药 (更昔洛韦 )的敏感性均高于DNA检测。两种方法的联合应用对监测HCMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观。

FQ-PCR与IFA检测HCMV感染效果比较

目的比较检测孕妇HCMV-DNA与HCMV-pp65对诊断HCMV感染的效果。方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测孕妇血浆HCMV-DNA及采用间接免疫荧光染色法(IFA)检测其外周血白细胞HCMV-pp65抗原,比较两者的诊断效果。结果 100例孕妇HCMV-DNA的阳性为9例,阳性率为9%,HCMV-pp65阳性为8例,阳性率为8%,两者均阳性为6例。两检测方法一致率为95%,两者之间的阳性检出率无显著性差异(χ2=0.064,P>0.05)。结论应用HCMV-DNA及HCMV-pp65抗原检测的两种联合监测,能更有效地提高孕妇早期HCMV活动性感染的诊断水平,对预防及降低胎儿宫内感染有着较好的临床价值。