人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果 我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3～ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论 自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。

急性脱髓鞘脑病患者人巨细胞病毒pp65抗原血症检测的临床意义

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)在急性脱髓鞘脑病(ADBD)中的病原学作用,并评估HCMV-pp65抗原血症在ADBD活动性HCMV感染早期诊断、抗病毒治疗及疗效判断中的价值。方法采用HCMV单克隆抗体免疫荧光法,对64例ADBD患者的外周血进行HCMV-pp65抗原检测,同时采用金标免疫斑点法检测血清HCMV-IgM,并对检测结果以及抗病毒药物应用与疗效进行分析。结果64例ADBD中HCMV-pp65阳性17例(26.6%),HCMV-IgM阳性8例(12.5%);HCMV-pp65阳性者,应用膦甲酸钠治疗9例,痊愈6例(66.7%),好转3例(33.3%);应用无环鸟苷治疗8例,痊愈2例(25.0%),好转4例(50.0%),无效2例(25.0%)。结论HCMV与ADBD的发生密切相关,HCMV-pp65抗原检测是一种敏感性、特异性强的方法,有助于HCMV感染疾病的早期诊断,指导抗病毒治疗及疗效的评价;膦甲酸钠对HCMV感染所致ADBD效果良好。

应用PP65抗原血症检测COPD患者的巨细胞病毒感染

目的探讨慢性阻塞病肺疾病 (COPD)患者中巨细胞病毒 (CMV)感染及其临床意义。方法采用免疫过氧化物酶法测定 70例COPD患者外周血白细胞HCMV PP6 5抗原 ,同时用ELISA方法检查血清HCMV IgG ,IgM。 结果COPD组CMV IgG阳性率和正常对照组相比无显著差异 ,COPD组CMV IgM阳性率为 15 .7% ,CMV PP6 5阳性率为 2 0 % ,均显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且随着COPD病情加重 ,CMV IgM及CMV PP6 5抗原血症阳性率亦逐步增加。结论 (1)在COPD患者中CMV PP6 5抗原血症是一个很好地反映CMV活化感染的指标。 (2 )在中、重度COPD患者中存在一定程度CMV活化感染 ,应引起重视。

PP65抗原血症检测法在发热患儿巨细胞病毒感染中的诊断价值

目的探讨低基质磷酸化蛋白（PP65）抗原血症检测法（AA法）对发热患儿巨细胞病毒（CMV）感染的诊断价值。方法对128例发热患儿（发热时间7～14d）采用间接免疫荧光染色法检测PP65抗原血症、酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗CMV抗体（CMV—IgM）、尿光镜找包涵体等三种方法平行检测128例血标本和尿标本。结果PP65抗原血症、CMV—IgM、尿找巨细胞包涵体的阳性检出率分别为17．2％、8．6％、6．3％。PP65抗原血症与CMV—IgM及尿找巨细胞包涵体的阳性符合率分别为50％（11／22）、36％（8／22）。19例患儿随着病情好转，PP65抗原血症水平从阳性转为阴性，另3例临床痊愈时复查PP65仍为阳性，其中2例2周后复查PP65转为阴性，1例3周后复查转为阴性。结论PP65抗原血症检测法对CMV活动性感染具有早期诊断的意义，可以检测病情变化、指导早期干预治疗。

pp65抗原血症检测法诊断婴儿巨细胞病毒感染的研究

目的 探讨pp6 5抗原血症检测方法 (AA)对新生儿和小婴儿巨细胞病毒 (CMV)感染的诊断价值。方法 对 2 1例有典型CMV感染症状患儿及 42例无典型症状的患儿 ,进行外周血AA、尿PCR及血清ELISA法IgM检测 ,比较 3种方法的检测结果 ,结合抗原血症的量化结果及对部分患儿的短期随访 ,分析AA的临床应用价值。结果 (1) 6 3例中CMV症状性感染 15例 ,亚临床型感染 8例。症状性感染组AA、PCR、ELISA阳性检出率分别为 93% (14/ 15 )、10 0 % (15 / 15 )和 80 % (12 / 15 ) ;亚临床型感染组阳性检出率分别为 5 0 % (4/ 8) ,75 % (6 / 8)和 38% (3/ 8)。AA相对于PCR的敏感性为 86 %(18/ 2 1) ,特异性为 10 0 %。 (2 )症状性感染通常伴高水平抗原血症 [(4～ 2 0 6 )个 / 1 5× 10 5多形核白细胞 (PMNL) ],亚临床型感染通常抗原血症水平较低 [(0～ 3)个 / (1 5× 10 5)PMNL],症状性感染组抗原血症水平明显高于亚临床型感染组 (P <0 0 1)。 (3)症状性感染组中 4例婴儿肝炎患儿恢复期AA转为阴性或低水平。结论 pp6 5抗原血症检测方法是一种敏感、特异的检测方法 ,量化结果有助于诊断活动感染及监测病情。

巨细胞病毒抗原血症检测在肾移植术后的应用

目的评估巨细胞病毒抗原血症检测方法对诊断肾移植患者巨细胞病毒感染的意义。方法收集2021年9月至2021年12月昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样,对其进行巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)pp65抗原血症检测与Ig G抗体、CMV DNA结果比较,评估CMV pp65抗原血症结果与肌酐、他克莫司(tacrolimus,Tac/FK506)药物浓度、淋巴细胞亚群的相关性。结果CMV pp65抗原血症结果与CMV DNA结果一致性为65.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CMV pp65抗原血症检测结果与CMV IgG抗体检测结果一致性为57.3%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与肌酐、FK506药物浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与淋巴细胞亚群比较中,仅与NK细胞绝对值差异有统计学意义(P<0.05)。结论CMV pp65抗原与CMV IgG抗体结果一致性为57.3%。CMV pp65抗原与CMV DNA结果一致性为65.5%,两种方法联合检测,对提高CMV感染临床诊断准确率具有一定意义。在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,血清肌酐水平、全血FK506药物浓度两组间差异无统计学意义,NK细胞绝对值差异具有统计学意义,NK细胞绝对值偏高的肾移植患者,发生CMV感染的概率偏低。

巨细胞病毒pp65抗原血症检测

目的 评估巨细胞病毒 (CMV) pp6 5白细胞抗原血症在骨髓移植或外周血干细胞移植后活动性CMV感染早期诊断和CMV病的预测、指导CMV亚临床期感染的抗病毒治疗及抗病毒疗效判断中的价值。方法 1999年 9月～ 2 0 0 0年 4月共收集 2 10份乙二胺四乙酸 (EDTA)抗凝血 ,骨髓移植或外周血干细胞移植患者 36例。移植前用ELISA法检测患者CMV特异性抗体IgG和IgM ,移植后 3周起采用CMVBrite试验盒每周检测 1次CMV pp6 5抗原血症 ,并计数抗原阳性细胞 ,直到移植后 10 0d或治疗后抗原阴转、死亡或出院。移植后患者第 1次检测到 pp6 5抗原阳性细胞即开始更昔洛韦抗病毒治疗。结果 36例骨髓移植或干细胞移植患者于移植前CMV特异性抗体IgG均阳性 ,IgM均阴性 ;移植后 16例出现CMVpp6 5抗原血症 ,其中 15例出现有症状的CMV感染或CMV病 ,14例接受更昔洛韦抗病毒治疗 ,12例治疗后抗原血症阴转、症状消失 ,死亡 2例 (病死率 14.2 % ) ,未经抗病毒治疗者 2例均死亡 (P <0 .0 1)。 16例 pp6 5抗原阳性患者中 ,仅 2例CMV特异性抗体IgM阳性。 10名健康对照组的CMV特异性抗体IgG均阳性 ,IgM均阴性 ,pp6 5抗原血症检测均阴性。结论 本研究结果提示 ,人CMV pp6 5白细胞抗原血症检测可作为骨髓移植后CMV病的预测指标 。

荧光定量PCR和外周血白细胞pp65抗原血症实验对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测

目的 探讨肾移植术后 3个月巨细胞病毒 (CMV)的感染状况 ,比较荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验两种方法对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测情况和使用价值。方法 分别用荧光定量PCR、外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验和ELISA法对我院 2 0 0 1年 1月～2 0 0 2年 12月 5 6例肾移植患肾移植术后 3个月的外周血进行巨细胞病毒的检测。结果 5 6例肾移植患者中CMVpp5 6抗原血症阳性 9例 ( 16 1% ) ,PCR阳性 11例 ( 19 6 % ) ,12例 ( 2 1 4 % )诊断为CMV感染 ,其中 7例为症状性感染 ,5例为无症状性感染。荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的一致性为 92 % ,阳性符合率 6 7% ,阴性符合率 92 %。CMVpp6 5抗原、CMVDNAPCR、CMV IgM的敏感性、特异性分别为 72 %、92 % ;10 0 %、92 % ;4 3%、88%。结论 荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的联合应用 ,对监测CMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观。

HCMV(PP65)抗原血症检测在HCMV感染疾病中的应用价值

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染相当普遍,在我国人群中感染率高达80%～100%.一旦发生HCMV感染常终身带毒,免疫功能正常时,感染常无症状,病毒潜伏持续存在,当机体抵抗力下降时,可引起病毒激活感染,导致严重损伤和疾病.HCMV感染对宿主有两方面的负反应,除病毒本身导致的细胞损伤和病毒诱导的免疫病理损伤外,还极易激发宿主受细菌、真菌、原虫以及其它病毒的感染,从而导致双重感染,对人类健康造成极大威胁.在感染早期给予特异性的抗病毒药物治疗可显著降低HCMV疾病出现的频率和严重性,因此早期、快速、精确地诊断HCMV激活感染十分重要.HCMVPP65抗原血症检测技术的建立和发展不仅使上述要求得以实现,而且对于监测HCMV病的发生发展及制定正确的治疗方案具有重要价值.

HCMV抗原(pp65)血症检测技术诊断活动性HCMV感染

人类巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）感染在人群中广泛存在，自从１９８８年ＨＣＭＶ抗原血症检测技术建立以来，该技术发展迅速，检测外周血ＰＭＮＬｓ中的ＨＣＭＶ晚期结构抗原ｐｐ６５是早期、快速、准确、定量诊断活动性ＨＣＭＶ感染的主要手段。本综述主要涉及ＨＣＭＶ抗原（ｐｐ６５）血症检测技术及其临床意义的研究近况。

HCMV（pp65）抗原血症-肝、肾移植术后巨细胞病毒感染监测的分析

目的通过5000次肝、肾移植术后病人外周血HCMV（pp65）抗原血症检测结果与用ELISA方法检测HCMV特异性IgM、IgG抗体的检测结果进行比较和观察，探讨各种检测方法在检测器官移植术后HCMV感染中的作用。方法应用间接免疫荧光方法，检测2002年1月至2004年11月在我院接受肝、肾移植手术后病人外周血白细胞内人巨细胞病毒（HCMV）的基质磷蛋白（pp65）共检测血标本5000次，阳性病人应用ELISA方法检测HCMV特异性IgM抗体。结果5000次HCMV（PP65）抗原血症检测中，阳性1053次，占21．06％；1053次HCMV（PP65）抗原血症阳性病人，ELISA方法检测HCMV特异性IgM抗体，103次出现阳性。1053次HCMV（PP65）抗原血症阳性病人中约85．23％出现HCMV感染的症状及HCMV病。结论HCMV（PP65）抗原血症检测与其它检测HCMV方法相比，可以早期、快速、准确的检测出肝、肾移植术后病人巨细胞病毒感染，为临床抗病毒治疗提供依据，使HCMV病的发生率明显降低。

外周血白细胞HCMV PP65抗原检测结果分析

目的分析外周血白细胞巨细胞病毒(HCMV)PP65抗原检测结果,总结儿科常见疾病的HCMV感染情况及HCMV感染所致临床疾病的分布情况。方法采用间接免疫荧光法检测了1016例儿童外周血白细胞HCMVPP65抗原,对检测结果及阳性病例进行分析。结果所有送检标本总阳性检出率为25.2%,以肝炎、婴儿肝炎综合征组患儿阳性检出率最高,分别为37.8%、32.4%。CMV感染可累及全身各个系统,引起疾病多样,但以婴儿肝炎综合征最多见(37.1%),其次为高胆红素血症(12.9%)、急性呼吸道感染(10.9%)、腹泻(9.4%)、发热待查(6.6%)、肝炎(5.5%)等。结论HCMV感染临床上常见,症状多样,临床医生对可疑病例应及早作相应的实验室检查,以助于早期临床诊断,并指导有效的治疗。

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的 比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法 收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果 pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论 pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。

HCMVpp65抗原和IgM抗体检测诊断儿童HCMV活动性感染的比较

目的:比较人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原(以下简称pp65)检测和血清HCMV-IgM抗体(以下简称IgM抗体)检测两种方法对儿童HCMV活动性感染的诊断实用意义。方法:采集临床疑似HCMV活动性感染儿童血标本(共251份),分离血浆和多形核白细胞,分别用于IgM抗体检测和pp65检测。同时进行荧光定量PCR检测HCMVDNA,与pp65抗原作平行比较。结果:pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为73.3%。与HCMVDNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为85.5%,85.2%和86.2%。而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关。结论:pp65抗原血症反映该病毒活动状况,可监测HCMV活动性感染。由于儿童患者还存在原发感染的可能性,所以,联合HCMV-IgM的监测来提高临床的诊断率。

外周血白细胞中人巨细胞病毒pp65抗原的定位及意义

目的明确人巨细胞病毒(HCMV)磷酸基质蛋白65(pp65)抗原在阳性细胞中的定位并初探其定位与病毒活动间的关系,为指导临床病毒抗原血症的监测提供依据。方法利用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料能与细胞双链DNA结合的特点,在激光共聚焦显微镜下对HCMV pp65单抗阳染细胞进行抗原定位;同时通过外周血白细胞与病毒共培养技术,检测分析其定位与病毒活动的关系。结果临床标本检测的HCM- Vpp65抗原阳染细胞的表现形式有3种,即细胞浆型、细胞核型和细胞浆核混合型,其中细胞核中的HCMV pp65抗原聚集于细胞核的内部,而非仅仅附着于核表面。进一步的白细胞与病毒共培养结果显示,只有野生型病毒株感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)与外周血白细胞共培养,才能检出HCMV pp65抗原阳性的白细胞,而且表现为仅初期(培养1 h内)可检出细胞浆阳染型,随着时间延长,约80%～90%的抗原阳染白细胞表现为细胞核型,偶见细胞浆核混合型。结论HCMV pp65抗原血症时阳染的外周血白细胞的表现形式有3种,即细胞核型、细胞浆型以及细胞浆核混合型,其中细胞核型属细胞核内部型,并非细胞核表面附着型。结合共培养结果认为,细胞核型阳染细胞的检出更能提示病毒的活动。

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒抗原血症检测指导巨细胞病毒感染的防治

人巨细胞病毒感染及巨细胞病毒疾病是异基因造血干细胞移植后的常见并发症 ,巨细胞病毒性间质性肺炎是移植后巨细胞病毒疾病的主要类型 ,如未能及时检出和救治则病死率极高。为探讨采用免疫组化法测定人巨细胞病毒的方法学 ,指导临床治疗 ,我们采用免疫组化法对 4 5例(慢性粒细胞白血病 2 3例 ,急性髓性白血病 7例 ,急性淋巴细胞白血病 6例 ,骨髓增生异常综合征4例 ,非何杰金氏淋巴瘤 3例 ,再生障碍性贫血 2例 )进行造血干细胞移植后巨细胞病毒抗原血症的检测 ,并与巨细胞病毒血清学检测进行了对比。 4 5例中 38例患者进行了异基因外周血干细胞移植 ,2例骨髓移植 ,5例外周血与骨髓共移植。移植前 ,对供 受者均进行巨细胞病毒抗体检查 ;移植后 ,受者采用本方法进行抗原检查。结果表明 ,有 2 5例患者发生巨细胞病毒相关性间质性肺炎 ,移植后随访时间为 6 - 2 8个月 (平均时间为 18个月 ) ,根据巨细胞病毒检测结果进行预防性治疗的患者预后较未进行预防性治疗的患者有明显差异。预防组巨细胞病毒相关的死亡率为 1 2 9,未预防组为 12 16。提示采用免疫组化法对异基因造血干细胞移植患者进行定期随访监测可更早期、快速的检出巨细胞病毒感染 ,对患者预后有重要意义。

班氏丝虫:应用腹腔指状丝虫抗原检测无症状微丝蚴血症者体内的微丝蚴

淋巴丝虫病流行于热带、亚热带非洲、南美洲、亚洲及大洋洲,在这些地区大约7.51亿人口受淋巴丝虫感染的威胁,7 800万人已感染,其中90％以上感染班氏丝虫。丝虫病控制计划的重要目标是清除体内微丝蚴,阻断传播,因此需要进行微丝蚴的检测。