猪瘟PPA-ELISA的免疫监测

应用纯化猪瘟病毒抗原(SFV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立PPA-ELISA,并通过对12份设定阴性血清和38头仔猪注苗前后不同时期164份系列血清的检测结果表明,免疫母猪所产未注苗仔猪在30日龄时母源抗体水平个体差异很大。光密度值(OD)为0.28～1.77((?)=0.98),有1/6的仔猪血清抗体水平在保护临界点以下;免疫母猪与其所生未注苗仔猪血清中抗体水平并不呈正相关;仔猪于30日龄时注苗,60日龄时ELISA抗体水平急剧上升,90日龄时达峰值,维持至120日龄,之后逐渐下降,到150日龄时降至注苗前水平。另外,对1头份、2头份、4头份等不同免疫剂量进行了比较,三者的免疫效果无显著差异。

检测猪轮状病毒的一种新方法——夹心PPA-ELISA

本研究将酶标记葡萄球菌A蛋白(PPA)这一通用试剂引入间接夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),建立于夹心PPA—ELISA,用于检测猪轮状病毒时显示出优越性,比夹心ELISA敏感,背景染色极低,健猪粪便的背景光密度与PBS相同。

用PPA-ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ。用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼脂扩散试验（１０．６７％）。经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点。此外，对４种封闭液的封板结果表明：１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ、０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ、０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。

猪流行性腹泻抗体PPA-ELISA检测方法的建立及其应用

应用纯化猪流行性腹泻病毒抗原(PEDV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立的A-ELISA,通过对免疫猪血清PEDV抗体的动态测定及临床自然感染猪血清抗体水平的检测表明,该法敏感、特异、简便、快速,尤适于基层猪场大批血清样品抗体水平的普查与检测.

Dot-PPA-ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体方法的研究

以沙门氏菌的改良H E 抗原为膜载抗原 ,建立了检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot_PPA_ELISA方法。研究选取了特异性良好的抗原 ,确定了Dot_PPA_ELISA的最佳工作条件 ,初步确定了感染仔猪副伤寒的Dot_PPA_ELISA抗体阳性标准为 1∶32。本研究制备的诊断膜片特异性强、敏感性高 ,能够检测到 1∶2 0 4 8稀释的动物试验阳性血清 ;该方法操作简便快捷、结果客观、易于判定、各种试剂材料均可做到标准化 ,适合规模化养猪场仔猪副伤寒的抗体监测以及流行病学调查之用。

PPA-ELISA检测猪瘟抗体方法在江苏省的应用

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度传染性疾病,死亡率很高,迄今尚无有效的治疗方法。自1980年以来全省改革了防疫制度,全面推行了常年防疫,使猪瘟逐步得到了控制。为了进一步控制和消灭猪瘟,我省25个市、县1985年与农业部签定了《猪瘟、鸡新城疫免疫程序新技术推广》项目,按项目要求,在三年内要控制和消灭猪瘟和鸡新城疫。经过三年努力。

用PPA-ELISA等5种方法检测布病抗体敏感性

以布病S_2苗免疫猪,7,21和35天采血,血清457份。以4种常规方法检测,RBPT和SAT两法的检出率高于其他方法。血清置-80℃冰箱冻存2个月后,取84份,用PPA-ELISA及4种常规方法检测,SAT的阳性率为90.5％,高于其他方法,差异显著(P<0.05)。PPA-ELISA和RBPT分别居第2位(87.2％)和第3位(85.7％)。PAT和CFT阳性率最低。检出抗体滴度比较,SAT高于PPA-ELISA,而后者又高于PAT。SAT、PPA-ELISA和RBPT三者之间符合率均较高(88％)。PPA,ELISA检测猪布病免疫抗体的敏感性低于SAT而高于其他方法。本文还探讨了5种方法的优缺点。

ETEC菌毛蛋白K99抗体PPA-ELISA检测方法的建立及初步应用

以纯化的大肠埃希菌K99菌毛蛋白为包被抗原,建立检测大肠埃希氏菌K99 Ig G抗体的间接ELISA方法。确定间接ELISA的最适反应条件,即抗原包被的ELISA板4℃过夜,最适抗原包被浓度为4.94μg·m L-1,兔抗体稀释倍数为1:50,猪抗体稀释倍数为1:200,确定最佳封闭液为100 g·L-1脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5 h,血清反应时间为1 h,二抗最适浓度梯度为1:2000,反应时间为37℃0.5 h,底物室温反应时间为37℃10 min,阴阳性临界值兔血清为0.25、猪血清为0.35。试验证实该间接PPA-ELISA方法的特异性强、敏感性高、重复性好,可以为疫苗效力检验和流行病学调查提供参考方法。

PPA-ELISA检测人和猪血清乙型脑炎抗体

酶标-A蛋白(如HRP-A蛋白)ELISA(简称PPA-ELISA),适用于检测人和多种动物相应标本内的病毒抗原或特异性IgG抗体。本文采用PPA-ELISA检测人和猪血清乙型脑炎(乙脑)IgG抗体,并与常规ELISA和血抑(HI)法进行比较,现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 病毒及制备抗原乙脑病毒(高顺株)由卫生部药品生物制品检定所提供。

用牛SL和SD抗原的PPA-ELISA检测人班氏丝虫病抗体的研究

牛唇乳突腹腔丝虫(Setaria labiatopapilosa,称S.L.)和牛指状腹腔线虫(setarta digi-tata,称S.D.)各自被制备的抗原,经酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA),对福建丝虫病流行区已知不同感染度微丝蚴的46例班氏丝虫病人血清检测结果:S.L.抗原的阳性检出率为95％(23/24和44/46),S.D.抗原阳性检出率为88％(21/24),而且S.L.抗原的光密度值(OD值)较普遍高于S.D.抗原。对照组健康人血清和囊虫病人血清各8例均无交叉反应,其OD值均在阴性幅度内。

Dot-PPA-ELISA对猪丹毒的免疫监测及抗体保护效价的测定

用猪瘟、猪肺疫、猪丹毒三联疫苗和猪丹毒 1a、2型氢氧化铝吸附甲醛灭活疫苗分别免疫断奶仔猪 ,采用Dot PPA ELISA监测免疫猪血清抗体变化。结果 ,弱毒疫苗免疫后第 7d猪丹毒血清抗体效价开始升高 ,第 2～ 3周达最高值 ;灭活疫苗免疫后第 3～ 4周抗体效价达最高值 ,且灭活疫苗免疫猪的抗体水平明显高于三联疫苗免疫猪。免疫 6周后 ,用C4 30 0 4 (1a型 )、C4 3179(1b型 )和C4 3 12 (2型 ) 3株不同血清型的猪丹毒混合强毒同时对不同抗体效价的免疫猪和对照猪进行了皮肤内接种攻毒 ,并根据其皮肤和体温反应确定 1∶32为猪能抵抗混合强毒攻击的抗体保护效价。经对 4 4头 5 0～ 6 0日龄未免疫的断奶仔猪血清检测 ,其抗体效价在 1∶32以下的猪占88.36 % ,2 78头免疫猪血清的抗体效价在 1∶32或以上的猪占 92 .81%。表明Dot PPA ELISA适用于猪群猪丹毒的免疫监测和免疫力测定。

应用PPA-ELISA检测雉鸡血清中抗结核抗体的研究

用建立的检测雉鸡血清中抗结核抗体的 PPA-ELISA法与平板凝集法同时检测216份雉鸡血清,阳性率分别为54.2%(117份)和43.1%(93份).证明 PPA-ELISA法对于雉鸡结核病诊断具有较高的敏感性和特异性.

用PPA-ELISA间接法检测兔病毒性出血症(RHDV)肝脏抗原及血清抗体的研究

在应用PPA—ELISA间接法检测兔病毒性出血症血清抗体的基础上,将标准阳性血清用肝脏抗原进行吸收,以标准阳性血清OD值的变化来判定有无肝脏抗原。本试验共检测血清171份,肝脏57份。试验结果表明,本方法简便、特异性强、灵敏度高、结果便于判定。

猪附红细胞体PPA-ELISA检测方法的建立

用物理方法纯化猪附红细胞体抗原,用纯化抗原免疫兔制备超免疫血清,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗,建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA ELISA)检测方法。结果显示,用PPA ELISA方法检测猪血液中的附红细胞体,具有很高的敏感性和特异性,重复性良好,完全适用于猪附红细胞体病的实验室诊断。

Dot-PPA-ELISA联合检测猪PRV.Brucella和Chlamydia抗体方法的建立和应用研究

首次将Dot-PPA -ELISA用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体 ,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究 ,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联合诊断膜片 (简称膜片 )具有良好特异性、灵敏性和稳定性。诊断膜片在 4℃保存 8个月、室温 (15～ 2 5℃ )保存 2个月、37℃保存 1个月灵敏性 ,特异性不变。 1∶6 4、1∶12 8、1∶6 4为联合检测猪伪狂犬病、衣原体病和布氏杆菌病抗体的阳性标准。结果表明 ,Dot -PPA -ELISA联合检测法操作方便、快速 ,结果客观 ,易于判读 ,诊断膜片便于寄送、保存 ,性能稳定、可靠 ,并能同时检测多种疫病等优点 ,适宜应用于猪衣原体病。

PPA-ELISA法检测猪细小病毒抗体的探索

建立了PPA-ELISA法测定母猪血清中抗猪细小病毒抗体的方法。经与血凝抑制试验比较,酶联A蛋白ELISA法比血凝抑制试验灵敏度高(X^2=26.13、P<0.01),两者相关性良好(r=0.6283.P<0.001),为猪细小病毒的流行病学调查提供了简便实用的方法。

应用FA及PPA-ELISA技术对猪瘟的检测

用免疫荧光抗体诊断技术及单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术对疑为猪瘟病毒感染猪进行了检测 ,重点阐述了 2种方法的技术原理和操作过程。通过用免疫荧光抗体诊断技术检测了 5份病料 ,其中有 2份为阳性 ,阳性率为 40 % ;用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术检测了猪瘟血清抗体 ,在 40头母猪血清样品中 ,猪瘟弱毒抗体效价 OD值较高 ,有 1 0 0 %的保护率 ,但是发现母猪群中有 1 0 %隐性猪瘟感染 ,其强毒抗体效价 OD值大于 0 .5,体内带有猪瘟病毒。结果及过程表明此两种诊断方法检测快速、鉴别准确。

ETEC K88菌毛蛋白抗体PPA-ELISA检测方法的建立

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原,建立了检测大肠埃希菌K88IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件,即最佳抗原包被浓度为1μg/mL,兔抗体稀释倍数为1∶10,猪抗体稀释倍数为1∶100,确定最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5h,血清反应时间0.5h,二抗反应时间1h,底物室温反应时间为15min,阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.45。证实该间接PPA-ELISA方法特异性强、重复性好、敏感度高,可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。