鲤PPARγ基因序列特征及其与脂肪沉积的相关性

为探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor,PPARγ)对鲤(Cyprinus carpio)脂肪沉积的调控机制,采用RACE和实时荧光定量PCR技术克隆体质量(215.20±8.21)g鲤的PPARγ基因,分析其组织表达特征。结果显示,PPARγ基因c DNA全长为3 077 bp,包括233 bp的5′非编码区、1 311bp的3′非编码区和编码510个氨基酸的开放阅读框。鲤PPARγ包括4个功能结构域,即A/B区,DNA结合区(DNA binding domain,DBD区),铰链区和配体结合区(ligand binding domain,LBD区)。鲤PPARγ与鲫(Carassius auratus)、斑马鱼(Danio rerio)的氨基酸序列相似性最高,分别为98.63%和87.28%。PPARγ基因在各组织均有表达,肝脏中相对表达量最高,脑次之,脾和心脏中最少。腹腔脂肪中PPARγ基因表达量多脂鲤显著高于少脂鲤(P<0.05),背部肌肉中PPARγ基因表达量多脂鲤极显著高于少脂鲤(P<0.01)。推测PPARγ具有促进脂肪沉积的作用,PPARγ基因可以作为鲤脂肪沉积候选基因用于分子选择。本研究为进一步解析鲤PPARγ基因调控脂肪沉积分子机制研究奠定了理论基础。

鸡PPARγ基因转录本5的两个上游开放阅读框功能分析

前期研究发现,鸡PPARγ基因转录本5(c PPARγ5)的5’非翻译区(5’untranslated region,5’UTR)存在两个上游开放阅读框(uORF1和uORF2)。为揭示这两个uORFs在鸡PPARγ基因表达转录后调控作用,试验使用报告基因、定点突变、q RT-PCR和Western blot等技术,分析两个uORFs对报告基因活性及PPARγmRNA和蛋白表达的影响。结果表明,与野生型相比,uORF1和uORF2分别突变和同时突变均显著促进报告基因活性及PPARγm RNA和蛋白表达(P<0.05)。mRNA稳定性分析发现,两个uORFs突变对报告基因mRNA稳定性无显著影响。启动子活性分析发现,c PPARγ的5’UTR区具有启动子活性。研究结果表明,cPPARγ5的两个u ORFs抑制其翻译。

鸡PPARγ基因的表达特性及其对脂肪细胞增殖分化的影响

为分析鸡PPARγ基因的组织表达特性及其在脂肪细胞增殖和分化过程中的功能,文章以东北农业大学高、低腹脂双向选择品系肉鸡为实验材料,利用Western blotting方法,检测PPARγ基因的组织表达特性及其在高、低脂系肉鸡腹部脂肪组织间的表达差异;采用RNAi技术,在鸡原代脂肪细胞中抑制PPARγ基因的表达后,通过MTT和油红O提取比色的方法,研究鸡PPARγ基因对脂肪细胞增殖和分化的调控作用;利用Real-timePCR和Western blotting技术,分析PPARγ基因表达下调后,其他脂肪细胞分化转录因子以及与脂肪细胞分化相关的重要基因的表达变化情况。结果表明,PPARγ基因在7周龄高脂系肉鸡腹部脂肪组织、肌胃、脾脏、肾脏组织中表达量较高,在心脏中表达量较低,在肝脏、胸肌、腿肌、十二指肠中未检测到表达信号;与高脂系相比,PPARγ基因在5和7周龄低脂系肉鸡腹部脂肪组织中的表达量较低(P<0.05);PPARγ基因的表达量下降后,鸡脂肪细胞的增殖能力增强,分化能力减弱;同时,C/EBPα、SREBP1、A-FABP、Perilipin1、LPL、IGFBP-2基因的表达量均下降(P<0.05)。由此可见,PPARγ基因的表达可能与肉鸡腹部脂肪的沉积有一定的关系,该基因可能是调控鸡脂肪细胞增殖与分化的关键因子。

朗德鹅填饲后不同组织PPARγ基因mRNA表达量差异的初步研究

本研究采用荧光定量PCR检测了填饲、未填饲朗德鹅肝脏、皮下脂肪、腹脂和肌肉组织PPARγ基因mR-NA的表达水平,并与谷丙转氨酶等6种血清生化指标进行了相关性分析。结果表明:在肝脏组织中,填饲组PPARγ基因mRNA的表达量极显著高于对照组中该基因的表达量(P<0.01);肝脏组织PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关(P<0.05),腹脂PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关(P<0.05),皮下脂肪PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈极显著正相关(P<0.01)。结果表明肝脏、皮下脂肪、腹脂组织PPARγ基因mRNA的表达水平与朗德鹅肥肝形成有一定的关系。

PPARγ基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性研究

目的探讨PPARγ基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的关系。方法本研究共纳入227例动脉粥样硬化性脑梗死患者和404例健康对照人群。以rs1875796为遗传标记,应用多聚酶链-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测PPARγ基因rs1875796的个体基因型。结果女性动脉粥样硬化性脑梗死组rs1875796的C等位基因频率较对照组明显增高（χ2=9.113,P=0.003,OR=2.211,95%CI1.321～3.700）,女性动脉粥样硬化性脑梗死rs1875796位点的CC＋CT基因型频率较对照组明显增高（χ=8.032,P=0.005,OR=2.404,95%CI1.310～4.411）,经过多因素回归分析调整了传统危险因素的影响,两组间仍有显著性差异（P=0.006）。而男性动脉粥样硬化性脑梗死组与对照组rs1875796的等位基因、基因型频率差异无显著意义。结论PPARγ基因可能与女性动脉粥样硬化性脑梗死相关。

贵州地方黄牛不同组织中PPARγ基因表达水平研究

试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorsγ,PPARγ)基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物,提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA,设计PPARγ基因的实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达,但在脂肪组织中的表达量高于其他组织,且差异极显著(P<0.01),在脾脏和肺脏中也有较高表达,而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低;不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明,PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异,可能与其在不同组织中的功能有关,而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。

PPARγ基因多态性与2型糖尿病脂代谢的关系

目的探讨PPARγ基因多态性与2型糖尿病患者脂代谢异常的关系。方法本研究共纳入191例2型糖尿病患者。以rs1875796为遗传标记,应用多聚酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测PPARγ基因rs1875796的基因型。应用氧化酶法测定入组患者血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HLD-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。结果2型糖尿病患者PPARγ基因rs1875796的等位基因频率与TC、HDL-C和LDL-C水平无明显相关。但经性别分层后,女性2型糖尿病患者的TC、LDL-C水平与PPARγ基因rs1875796的等位基因频率呈显著性相关(分别为χ2=9.378,P=0.002和χ2=11.187,P=0.0008)。携带C等位基因个体的TC水平和LDL-C水平明显高于携带T等位基因的个体。结论女性2型糖尿病患者TC、LDL-C水平与PPARγ基因ts1875796多态性可能有关。

PPARγ基因转录与单核巨噬细胞来源的泡沫细胞形成

目的 :探讨PPARγ基因转录在动脉粥样病变局部的作用。方法 :观察动脉粥样硬化局部PPARγ基因表达与巨噬细胞来源的泡沫细胞、清道夫受体A(SRA)分布的关系 ;分析PPARγ配体对氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)介导的巨噬细胞SRA、PPARγmRNA表达、肿瘤坏死因子α(TNF α)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)释放的影响。结果 :PPARγ基因表达与巨噬细胞来源的泡沫细胞、清道夫受体A(SRA)的分布相似 ;PPARγ配体在增加巨噬细胞PPARγmRNA表达的同时 ,显著抑制了ox LDL介导的巨噬细胞SRAmRNA表达和TNF α、MMP 9的释放。结论

PPARγ基因Pro12Ala多态性与湖北汉族孕妇妊娠期糖尿病的相关性研究

目的研究PPARγ基因单核苷酸多态性(SNPs)与妊娠期糖尿病(GDM)的关联。方法测定72例湖北汉族GDM孕妇(GDM组)及78名正常健康孕妇(对照组)PPARγ基因Pro12Ala(rs1801282)SNP多态性,分析其与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。基因分型采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法。结果 GDM组PPARγ等位基因频率明显高于对照组(P<0.05);与对照组比较,GDM组患者2 h血糖、空腹总胆固醇、空腹三酰甘油值明显升高,差异具有显著性(P<0.05)。GDM组不同基因型人群,PPARγ两种基因型组间血糖和胰岛素水平差异无显著性(P>0.05)。结论 PPARγ基因多态性与湖北汉族孕妇妊娠期糖尿病无直接关系,但可能参与GDM的血糖水平和脂质代谢的调节。

PPARγ基因多态性与湖北汉族人群妊娠糖尿病的相关性研究

目的研究PPARγ基因单核苷酸多态性(SNPs)与湖北汉族人群妊娠糖尿病(GDM)的关系。方法测定66例GDM孕妇(患者组)及69名正常健康孕妇(对照组)PPARγ基因Pro12Ala(rs1801282)SNP多态性,分析其与GDM的关系。基因分型采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)。结果患者组SNPs基因型及等位基因频率分布与对照组比较无显著性差异,患者组中rs1801282 AB+BB基因型总胆固醇(TC)、血糖和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著高于AA基因型(P均<0.01);rs12636454AA基因型三酰甘油水平高于AB+BB基因型,rs11128597AA基因型血糖水平高于AB+BB基因型(P均<0.01)。结论 PPARγ基因与湖北汉族人群GDM无直接相关,但可能参与GDM的血糖水平和脂质代谢的调节。

杂交肉牛背最长肌PPARγ基因与脂肪代谢的研究

为了阐明过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）对脂肪代谢的影响,试验选择红安格斯牛、西门塔尔牛、草原红牛和夏洛莱牛各6头,分为4组,在相同饲养条件下育肥180 d,屠宰,采样,采用实时荧光定量技术测定背最长肌PPARγ基因mRNA表达量,用索氏提取法测定背最长肌脂肪含量。结果表明：草原红牛肌内脂肪含量显著高于其他3个品种牛（P〈0.05）,顺序为草原红牛〉夏洛莱牛〉西门塔尔牛〉红安格斯牛;草原红牛PPARγ基因mRNA表达量显著高于其他3个品种肉牛（P〈0.05）,顺序为草原红牛〉夏洛莱牛〉西门塔尔牛〉红安格斯牛。说明PPARγ基因对脂肪合成代谢有正向调控作用。

C／EBPβ基因与PPARγ基因在胎猪脂肪组织和原代培养的脂肪细胞中的表达

研究采用实时定量RT-PCR方法对发育到30,60,90日龄的胎猪脂肪组织中C/EBPβ与PPARγ基因的表达情况进行检测,并且对2个基因在原代培养的脂肪细胞中的表达情况进行检测。结果显示:在30,60日龄胎猪的脂肪组织中并没有检测到C/EBPβ基因的表达,在90日龄胎猪的脂肪组织检测到其低水平表达;PPARγ基因在30日龄胎猪的脂肪组织中已经表达,并且在60,90日龄胎猪的脂肪组织中仍然持续表达。在原代培养的前脂肪细胞中,2个基因均表达;诱导后C/EBPβ基因的表达量在24小时达到高峰,48小时和72小时时表达量显著回落;诱导后PPARγ基因的表达量明显升高,24小时达到高峰,之后随着培养时间的延长表达量逐渐降低。

PPARγ基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性研究

目的探讨PPARγ基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗死的相关性。方法 100例经CT/磁共振成像(MRI)检查有低密度梗死区且血脂生化指标显示有异常的患者设为实验组, 100例体检或因周围神经病变等入院行头颅MRI未发现脑梗死病变的患者设为对照组。两组均选择两个单核苷酸多态性(SNP)位点rs1875796(Hha I位点, SNP1)和rs1699337(Hinf I位点, SNP2),以通过限制性酶片段多态性去检测SNP的基因型。观察两组甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(CHOL),分析基因多态性。结果实验组TG、CHOL、LDL-C分别为(2.88±1.02)、(4.76±1.06)、(2.64±0.85)mmol/L均高于对照组的(1.67±0.85)、(4.19±1.35)、(2.17±0.63)mmol/L,HDL-C(1.31±0.22)mmol/L低于对照组的(1.69±0.88)mmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。PPARγC161T:本实验聚合酶链式反应(PCR)扩增的目的基因片断长度为200 bp。当碱基C突变为T后,不能被限制性内切酶EcoR72I识别,故TT纯合型因酶切位点消失,酶切电泳后仅见200 bp 1条带;CC型为野生纯合型,是常见基因型,可被酶切为120 bp、80 bp 2条带;CT为突变杂合型,酶切后可见200 bp、120 bp、80 bp 3条带。PPARβ+294T/C:本实验PCR扩增的目的基因片段长度为269 bp。当碱基T突变为C后,可被限制性核酸内切酶BSLI识别并酶切,故可见突变纯合子CC型被切为167 bp和102 bp2个电泳条带;而TT野生纯合型无酶切位点,是常见基因型,酶切电泳后仅见269 bp 1条带;CT型为突变杂合型,电泳后产生269 bp、167 bp、102 bp 3个电泳条带。结论动脉粥样硬化性脑梗死的的大多数基本病变是由于动脉粥样硬化,在动脉粥样硬化的形成中PPARγ基因扮演着重要的角色,所以动脉粥样硬化性脑梗死的潜在候选基因很有可能就是PPARγ基因。

PPARγ基因研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体 （peroxisome proliferators- activatedreceptor, PPAR）是一类由配体激活的核转录因子,属于核内受体超家族成员.1990 年Issemann等[1]首先发现了这种能被一类脂肪酸样化合物过氧化物酶体增殖剂（peroxisome proliferators, PP） 激活, 而被命名为PP 激活受体（ peroxisome proliferator activated receptor, PPAR）.根据结构的不同,PPAR可分为α、β（或δ）和γ3种类型,其中PPARγ主要表达于脂肪组织及免疫系统,比其他两个亚型有更高的与脂肪特异过氧化物酶增殖子反应单元的亲和力,它在脂肪细胞分化、调节脂类代谢和胰岛素敏感性扮演着重要角色,受到越来越多的关注.

广灵驴PPARγ基因克隆与组织表达分析

以广灵驴作为试验材料,使用RT-PCR方法对广灵驴PPARγ基因CDS编码区进行克隆然后对序列进行分析,并利用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在广灵驴的心、肝、脾、肺、肾、背最长肌和皮下脂肪7种组织中的表达特征.结果表明,广灵驴PPARγ基因含有1个1425 bp的开放阅读框,可编码474个氨基酸残基,其核苷酸序列与马的同源性最高;PPARγ蛋白是一种酸性不稳定的亲水性蛋白,二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲4种形式组成,蛋白序列中具有3个结构域和48个磷酸化位点,无信号肽剪切位点以及跨膜区域,主要定位在细胞质和细胞核中;PPARγ基因在广灵驴的7种不同组织中均有表达但存在一定差异,在皮下脂肪中的表达水平最为丰富.本试验成功克隆了广灵驴PPARγ基因,并发现其在皮下脂肪中有较高的表达水平,说明PPARγ基因可能与广灵驴脂肪沉积有关.

水动力转染鸡PPARγ基因在小鼠肝脏中的表达

采用水动力转染技术将含有家鸡PPARγ基因的真核表达质粒、表达该基因siRNA的干扰质粒注射到小鼠体内,并利用RT-PCR方法检测PPARγ基因在小鼠脏器中的表达情况,以建立检测重组质粒瞬时表达和筛选siRNA序列的有效方法。结果表明:注射重组质粒pcDNA3/PPARγ后家鸡PPARγ基因在小鼠的肝脏中高效表达;同时注射重组质粒pcDNA3/PPARγ和表达该基因siRNA序列的干扰质粒pGenesil-1/PPARγshRNA1后,家鸡PPARγ基因在小鼠肝脏中的表达明显地受到抑制。与传统的真核细胞转染技术相比,水动力转染技术具有快速、简单、方便、高效、安全、成本低等优点,可作为外源重组DNA表达的检测和siRNA的筛选等一种有效的方法。

PPARγ基因多态性与2型糖尿病合并脑梗死的相关性研究

目的探讨PPARγ基因多态性与北方汉族人2型糖尿病合并脑梗死的关系。方法本研究共纳入791例受试对象,分成3组：健康对照组（NC）337例、单纯糖尿病组（T2DM）250例和糖尿病伴脑梗死组（T2DM＋CI）204例。以PPARγ基因rs1875796为遗传标记,应用多聚酶链-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测PPARγ基因rs1875796的基因型。结果女性T2DM＋CI组PPARγ基因rs1875796的C等位基因频率高于T2DM组、NC组（χ^2=6.672,P=0.010,OR=1.991,95%CI 1.176~3.358和χ^2=12.384,P〈0.0001,OR=2.499,95%CI 1.500~4.162）;女性T2DM＋CI组的CC＋CT基因型频率高于T2DM组、NC组（χ^2=4.656,P=0.031,OR=2.008,95%CI 1.006~3.782和χ^2=8.462,P=0.004,OR=2.486,95%CI 1.346~4.593）。经多因素回归分析调整了传统危险因素的影响后,女性T2DM＋CI组的CC＋CT基因型与T2DM组、NC组比较,差异仍有显著性（χ^2=5.770,P=0.016,OR=2.713,95%CI 1.206~6.126）。结论PPARγ基因可能与女性2型糖尿病患者罹患脑梗死的发生有关。

PPARγ基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果鉴定

目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰的真核表达载体,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,并鉴定其干扰效果。方法选择设计2条针对小鼠PPARγ基因的干扰靶序列,构建真核表达载体PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,以PCR鉴定并进行序列分析。证实质粒构建成功后,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(eGFP)的表达,计算转染效率;采用实时定量PCR法和Western印迹检测载体对PPARγ基因的表达干扰效果;采用油红染色观察PPARγ在脂肪细胞分化过程中对脂滴形成的作用。结果成功构建PPARγ干扰质粒PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,PCR和DNA测序证实序列与设计完全一致;荧光显微镜下观察到3T3-L1细胞绿色荧光蛋白的表达,证实重组质粒成功转入细胞,转染效率(92.67±1.53)%;实时荧光定量PCR和Western Blot印记试验均显示PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2转染的3T3-L1细胞PPARγ基因分别被特异性抑制;靶点1干扰效率[(78.2±2.1)%]高于靶点2[(55.8±4.3)%],差异有统计学意义(P<0.05),靶点1初步鉴定为有效靶点。油红染色显示PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2转染均可抑制3T3-L1脂肪细胞分化和脂滴聚集。结论成功构建了靶向干扰PPARγ基因的shRNA真核表达质粒PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,并筛选出有效抑制靶基因的表达质粒,初步验证PPARγ基因对脂肪细胞分化的作用,为进一步研究提供了有效的分子生物学工具。

广西巴马小型猪PPARγ基因克隆及组织表达差异分析

【目的】克隆广西巴马小型猪过氧化物酶增殖物激活受体γ基因(PPARγ),并确定其在不同组织中的表达情况,为后续研究该基因在猪支原体肺炎(MPS)中的作用机制打下基础。【方法】利用RT-PCR克隆广西巴马小型猪PPARγ基因,并进行BLAST比对分析及其推导蛋白的生物信息学分析;以实时荧光定量PCR检测PPARγ基因在18月龄广西巴马小型猪心脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、肌肉和脂肪中的表达情况。【结果】广西巴马小型猪PPARγ基因开放阅读框序列1515 bp,编码504个氨基酸。广西巴马小型猪PPARγ基因推导氨基酸序列与Gen Bank已发表的猪PPARγ基因(FJ436399.1)推导氨基酸序列同源性最高,达100.0%;而与牛(NM_181024.2)、人类(NM_005037.5)、猕猴(NM_001032860.1)、鼠(NM_001308354.1)和鸿雁(KJ019822.1)的同源性分别为92.9%、91.8%、91.5%、90.5%和83.5%,表明PPARγ基因高度保守。PPARγ蛋白分子量为57380.91 Da,理论等电点(p I)为6.88,不稳定系数49.26,脂肪指数为88.21,亲水性平均水平为-0.293,为亲水性蛋白,其二级结构主要是α-螺旋,占总数的39.09%。PPARγ基因在广西巴马小型猪大肠组织中的表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01),而在肾脏、心脏和肌肉组织中的表达量极低。【结论】PPARγ基因在18月龄广西巴马小型猪的各组织中均有表达,但不同组织中的表达水平存在明显差异,可能与其在不同组织中的功能差异有关。

PPARγ基因多态性与维吾尔族高血压的关联性研究

目的:探讨PPARγ基因rs1801282、rs3856806及rs4684847多态性与维吾尔族高血压的关系。方法:应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测145例高血压患者和165例对照者PPARγ基因rs1801282、rs3856806及rs4684847基因型。结果 :(1)高血压组rs1801282基因CC基因型和C等位基因频率分别为75.9%和87.2%,均高于对照组的63.6%、79.7%(P<0.05);(2)对其进行风险分析后,携带rs1801282基因GG基因型和CG基因型的个体患高血压的风险分别是携带CC基因型的0.273及0.594倍,携带C等位基因的个体患高血压的风险是携带G等位基因的1.742倍;(3)多因素logistic回归分析显示,rs1801282基因多态性、超重及肥胖是高血压发生的危险因素。(4)高血压组rs3856806及rs4684847基因型和等位基因频率与对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。(5)rs1801282 CC基因型携带者SBP高于CG/GG基因型携带者,但TC较CG/GG基因型携带者低(P<0.05)。结论:维吾尔族人群携带PPARγ基因rs1801282位点的CC基因型和C等位基因的个体患高血压的风险升高。rs3856806及rs4684847多态性与维吾尔族人群高血压无关。