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PPARγ配体结合域的表达、纯化和鉴定 被引量:2
1
作者 王小行 周建 +2 位作者 向珑 郭砚 高小平 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期919-923,共5页
提取MCF 7乳腺癌细胞的总RNA ,通过RT PCR技术扩增出hPPARγ/LBDcDNA ,并克隆于载体pGEX 1γT上 ,测序表明该序列与已报道序列相同 ,将其转入BL2 1(DE3)大肠杆菌中 ,IPTG诱导表达GST hPPARγ/LBD ,在不同培养温度或IPTG诱导浓度下 ,GST ... 提取MCF 7乳腺癌细胞的总RNA ,通过RT PCR技术扩增出hPPARγ/LBDcDNA ,并克隆于载体pGEX 1γT上 ,测序表明该序列与已报道序列相同 ,将其转入BL2 1(DE3)大肠杆菌中 ,IPTG诱导表达GST hPPARγ/LBD ,在不同培养温度或IPTG诱导浓度下 ,GST hPPARγ/LBD以可溶或包涵体形式存在 ,表达产物经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化 ,可被抗hPPARγ多克隆抗体特异识别 。 展开更多
关键词 pparγ配体结合域 基因表达 纯化 鉴定 抗糖尿病药物 乳腺癌细胞 克隆
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析 被引量:4
2
作者 高闪电 常惠芸 +4 位作者 独军政 王景锋 周建华 赵建勇 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期975-978,共4页
目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒... 目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价,并以Western blot鉴定其特异性。结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42000的GST-β6LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性。结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体,为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β6亚基 配体结合 多克隆抗体
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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备 被引量:2
3
作者 独军政 常惠芸 +7 位作者 高闪电 王光华 王景锋 丛国正 邵军军 林彤 才学鹏 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期975-977,共3页
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,... 目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白。通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中。制备的兔多克隆抗体效价达1∶25600以上。以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性。结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒受体 αv配体结合 原核表达 多克隆抗体
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 赵建勇 独军政 +5 位作者 高闪电 林彤 邵军军 丛国正 伏小平 常惠芸 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1065-1069,共5页
以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELIS... 以纯化的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域重组蛋白为抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(McAb);采用有限稀释法和间接ELISA克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株,并用SDS-PAGE、间接ELISA以及间接免疫荧光法对制备的McAb的特异性进行鉴定。结果显示,成功获得5株能稳定传代并分泌抗β6亚基配体结合域的杂交瘤细胞株,分别命名为C4C7、E7C7、B8C9、C2D8和B7B6,其分泌的McAb为IgG2b(C2D8)和IgG2a(C4C7、E7C7、B8C9、B7B6)亚类。制备的口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域McAb可为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β6亚基 配体结合 单克隆抗体
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口蹄疫病毒受体羊源整联蛋白β6亚基配体结合域的原核表达、纯化及鉴定 被引量:1
5
作者 薛霜 独军政 +1 位作者 高闪电 常惠芸 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期55-58,共4页
利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHT... 利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRO/β6LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达重组羊β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达并利用镍离子亲和树脂对其纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法分析鉴定表达产物。成功构建了pPRO/β6LBD原核表达载体,实现了羊FMDV受体整联蛋白亚基β6LBD在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为33 kDa,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。用本试验室保存的抗FMDV受体猪源整联蛋白β6亚基LBD的单克隆抗体进行ELISA和Western blot检测,显示该单抗可与重组目的蛋白发生特异性反应,证明纯化后的蛋白与特异性抗体具有良好的特异性反应及抗原活性。为深入研究整联蛋白受体β6亚基在羊体内的分布及其在FMDV致病过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β6亚基 配体结合 原核表达
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猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基配体结合域的原核表达和多克隆抗体制备 被引量:1
6
作者 独军政 高闪电 +5 位作者 常惠芸 赵建勇 丛国正 邵军军 林彤 才学鹏 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第3期8-12,共5页
病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β... 病毒受体是决定病毒宿主特异性和组织嗜性的重要因素.利用原核细胞表达了猪口蹄疫病毒受体整合素β8亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后免疫兔,制备兔多克隆抗体.以含有猪β8亚基全长cD-NA的质粒为模板,经PCR扩增得到位于β8成熟肽氨基端的LBD基因片段,与带有GST标签的原核表达载体pGEX 4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β8LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达重组β8LBD融合蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,鉴定血清效价和特异性.结果显示,实现了重组猪β8LBD融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶12 800以上,该血清可与目的蛋白发生特异性反应.这将为进一步研究猪整合素β8亚基在宿主体内的分布及其在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒受体 β8亚基配体 结合 原核表达 多克隆抗体
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TLR9配体结合域的多参数综合分析
7
作者 李元朝 吕凤林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期292-295,共4页
目的通过生物信息学的多参数评估,综合分析人Toll样受体第9型(TLR9)的配体结合域.方法使用HNN二级结构分析、ClustalW序列比对以及Goldkey软件的亲水性、可及性和表面电荷极性分析等多种手段对TLR9配体结合域进行综合评估.结果第34~41... 目的通过生物信息学的多参数评估,综合分析人Toll样受体第9型(TLR9)的配体结合域.方法使用HNN二级结构分析、ClustalW序列比对以及Goldkey软件的亲水性、可及性和表面电荷极性分析等多种手段对TLR9配体结合域进行综合评估.结果第34~41、51~60、113~119、429~448和453~471位等5个区域满足各项指标,最可能是TLR9的配体结合域.结论本文的分析结果对人TLR9配体结合域的后继研究具有指导意义. 展开更多
关键词 TLR9 配体结合 多参数综合分析
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编码人肝脂解激活受体跨膜域和配体结合域的基因cDNA片段的克隆及表达
8
作者 刘皓 刘秉文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1534-1534,共1页
关键词 基因编码 人肝脂解激活受体 跨膜 配体结合 基因CDNA片段 基因克隆 基因表达
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利用酵母双杂交系统研究人血管内皮生长因子受体Flt-1的配体结合域 被引量:1
9
作者 马骊 张智清 +4 位作者 曾革非 周小明 陈爱君 姚立红 王小宁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期179-181,共3页
The vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor Flt-1 is charaterized by seven Ig-like loops within the extracellular domain. To identify which part is responsible for ligand binding, four cDNA clones coding fo... The vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor Flt-1 is charaterized by seven Ig-like loops within the extracellular domain. To identify which part is responsible for ligand binding, four cDNA clones coding for truncated Flt-1 mutants consisting of loop 1, 1-2, 2-3 and 1-3 were obtained by PCR from human cardiac cDNA library and inserted into the vectors of the yeast two-hybrid system, with VEGF cDNA on the partner plasmid. The paired plasmids were transformed into yeast strain SFY526, and tested by filter membrane method and β-galactosidase activity. The results showed that Flt-1(1-2)、Flt-1(2-3) and Flt-1(1-3) all were able to bind VEGF, of which Flt-1(1-3) showed the highest binding affinity, but no binding of VEGF was observed with Flt-1(2) and VEGF. 展开更多
关键词 酵母双杂交 血管内皮生长因子 FLT-1 配体结合
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人新型C5a受体C5L2结合域的信息学及其结合力的初步研究 被引量:1
10
作者 宋蓉 李元朝 +3 位作者 吕凤林 吴玉章 胡承香 陈月 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期467-470,共4页
目的通过生物信息学分析人C5L2受体的配体结构域,并进一步利用生物分子相互作用测定技术(biomo-lecular interaction analysis,BIA)研究其与配体C5a分子间的相互作用。方法以人C5L2蛋白的氨基酸序列为基础,利用网络分析软件以及Goldkey... 目的通过生物信息学分析人C5L2受体的配体结构域,并进一步利用生物分子相互作用测定技术(biomo-lecular interaction analysis,BIA)研究其与配体C5a分子间的相互作用。方法以人C5L2蛋白的氨基酸序列为基础,利用网络分析软件以及Goldkey计算机分析软件对人C5L2蛋白二级结构及亲水性、抗原性、可及性、柔韧性、表位等参数进行综合分析,确定可能与rhC5a结合的区域肽段序列,Fmoc方法固相多肽合成候选的结合位多肽,采用IAsysPlus生物传感器系统,以rhC5a为固定相,分别以这些候选结合位多肽为流动相,测定与rhC5a的结合力。结果合成多肽N2(第12~22位)、C3(第265~275位)可与C5a发生特异性结合,结合率分别为53%和23%。结论人C5L2分子第3~22、179~183、190~195、265~275位等区域满足各项指标,最可能是其配体C5a的结合域。 展开更多
关键词 CSA CSL2蛋白 配体结合 生物分子相互作用 生物传感器
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铜绿假单胞菌信号分子3-O-C_(12)-HSL与PPARγ-LBD的结合特性研究
11
作者 张云燕 马刘合一 +3 位作者 陈敏怡 李有强 刘润梅 罗冬元 《天津医药》 CAS 北大核心 2022年第7期673-677,共5页
目的制备纯化的人过氧化物酶体增殖物激活受体-配体结合域(PPARγ-LBD)肽段并观察铜绿假单胞菌信号分子N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C_(12)-HSL)与PPARγ-LBD的结合强度。方法采用分子对接的方式预测3-O-C_(12)-HSL与PPARγ... 目的制备纯化的人过氧化物酶体增殖物激活受体-配体结合域(PPARγ-LBD)肽段并观察铜绿假单胞菌信号分子N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C_(12)-HSL)与PPARγ-LBD的结合强度。方法采用分子对接的方式预测3-O-C_(12)-HSL与PPARγ的结合位点。合成PPARγ-LBD基因序列并插入pET28b质粒,鉴定后通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组肽段,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析。表面等离子体共振技术检测3-O-C_(12)-HSL与PPARγ-LBD的结合动力学参数。结果分子对接结果显示3-O-C_(12)-HSL与PPARγ-LBD区的Tyr473和Tyr327形成氢键,3-O-C_(12)-HSL末端柔性碳链与PPARγ-LBD区的Met329、Leu330等残基形成疏水结合。制备获得人PPARγ-LBD肽段,经SDS-PAGE及Western blot检测在25~35 ku有一条蛋白的印迹,与PPARγ-LBD分子质量一致。3-O-C_(12)-HSL与PPARγ结合的亲和力常数为1.65×10^(-4) mol/L,结合速率常数为1.06×10^(2)/ms,解离速率常数为1.75×10^(-2)/s。结论3-O-C_(12)-HSL与PPARγ-LBD功能区结合能力强于PPARγ特异性拮抗剂GW9662,为制备针对3-O-C_(12)-HSL的特异性靶向药物提供了实验依据。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 pparγ 分子对接模拟 表面等离子体共振技术 N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯 配体结合
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PPARs激动剂与胰岛素抵抗及治疗评价
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作者 姜涛 刘赫 《实用糖尿病杂志》 2006年第5期11-12,共2页
关键词 pparS 胰岛素抵抗 激动剂 过氧化物酶体增殖物 甲状腺激素受体 调节靶基因 激活受体 配体结合
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顺十八碳四烯酸荧光探针法研究PPARγ与配体的结合亲和性 被引量:1
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作者 高振霆 罗海彬 +4 位作者 陈莉莉 沈建华 陈凯先 蒋华良 沈旭 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 2004年第6期441-448,共8页
蛋白质与小分子结合的研究中, 处理单位点结合模型的经典方法在计算解离平衡常数(Kd, Ki)时有缺点; 文中推导的两个公式拟解决这个问题. 公式直接使用受体总浓度([R]t)、配体总浓度([L]t)和探针分子总浓度([P]t), 其适用性不受受体浓度... 蛋白质与小分子结合的研究中, 处理单位点结合模型的经典方法在计算解离平衡常数(Kd, Ki)时有缺点; 文中推导的两个公式拟解决这个问题. 公式直接使用受体总浓度([R]t)、配体总浓度([L]t)和探针分子总浓度([P]t), 其适用性不受受体浓度、受体被探针饱和的程度, 以及配体活性高低等因素的影响. 基于这两个公式使用非线性拟合方法, 可以从结合实验求得探针分子的Kd, 从竞争实验求得配体的 Ki. 以 CPA 为荧光探针, 运用推导的公式, 则测定了 PPARγ 和一些配体结合的 Ki, 并首次报道了 PPARγ -LY171883 的 Ki. 展开更多
关键词 顺十八碳四烯酸 荧光探针法 pparγ 配体 结合亲和性 竞争实验 IC50 解离平衡常数
原文传递
昆虫蜕皮激素受体及其类似物的杀虫机制研究进展 被引量:24
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作者 刘永杰 徐蓬军 +2 位作者 李艳伟 束怀瑞 黄大卫 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期67-73,共7页
昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的严格调控。蜕皮激素作用靶标由蜕皮激素受体(ecdysteroidreceptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracleprotein,USP)组成,蜕皮激素与EcR/USP作用启动蜕皮级联反应过程。昆虫EcR具有种类或类群的特异性... 昆虫的蜕皮、变态和繁殖受到蜕皮激素的严格调控。蜕皮激素作用靶标由蜕皮激素受体(ecdysteroidreceptor,EcR)和超气门蛋白(ultraspiracleprotein,USP)组成,蜕皮激素与EcR/USP作用启动蜕皮级联反应过程。昆虫EcR具有种类或类群的特异性,研究其结构、功能和调控机理在开发环境友好型新药剂和基因调控开关等方面具有重要指导作用。该文介绍了昆虫EcR的结构和功能特点,蜕皮激素及其类似物与EcR/USP的分子作用方式,以及基于EcR/USP的新杀虫剂创制和基因调控开关设计等方面的重要进展。 展开更多
关键词 蜕皮激素受体 超气门蛋白 配体结合 级联反应 活性筛选 基因开关
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黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 被引量:28
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作者 王海彬 王军舰 +6 位作者 黄辉 刘琳 刘少军 徐传毅 何伟 樊粤光 黄志伟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2113-2115,共3页
目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与... 目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与雌激素受体的关系;MTT法检测黄芪注射液对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,黄芪注射液不能提高细胞活性,但对雌激素受体具有激活作用。结论黄芪注射液可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统是研究中药作用机理的手段之一。 展开更多
关键词 黄芪注射液 基因报告系统 雌激素受体 HELA细胞 配体结合
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猪FMDV受体整联蛋白β1亚基LBD多克隆抗体的制备和初步应用 被引量:2
16
作者 高闪电 常惠芸 +3 位作者 独军政 王景锋 宋帅 谢庆阁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期999-1001,1005,共4页
目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建... 目的表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p-CHOK1细胞β1亚基的表达。方法利用PCR方法扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western blot方法分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p-CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr约为42000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β1亚基 配体结合 多克隆抗体
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甾体激素受体功能特异性的结构基础 被引量:4
17
作者 张磬 叶玉珍 丁达夫 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期685-694,共10页
甾体激素受体家族包括雌激素受体、雄激素受体等五个亚家族 ,在机体组织细胞的生长分化、发育生殖、内环境稳定等几乎所有生理过程中都起着重要的作用。研究甾体激素受体亚家族的特异性可以加深对该家族功能的理解 ,并且具有潜在的临床... 甾体激素受体家族包括雌激素受体、雄激素受体等五个亚家族 ,在机体组织细胞的生长分化、发育生殖、内环境稳定等几乎所有生理过程中都起着重要的作用。研究甾体激素受体亚家族的特异性可以加深对该家族功能的理解 ,并且具有潜在的临床应用价值。采用进化踪迹方法对该家族的配体结合域 (LBD)进行分析 ,探讨了决定亚家族功能特异性的结构基础。结果表明 ,甾体激素受体的各亚家族可能同相应的内源性配体存在着共进化关系 ;配体结合处的踪迹残基决定了受体-配体间的氢键作用和疏水相互作用模式并导致了亚家族的配体结合特异性。上述结论可用于甾体激素受体的配体结合特异性的改造以及新型组织选择性配体 (如选择性雌激素受体调节剂 ,SERM) 展开更多
关键词 甾体激素受体 配体结合 加权进化踪迹分析 踪迹残基 特异性
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利用细胞杂交技术检测强骨胶囊对雌激素受体的影响 被引量:2
18
作者 王海彬 王军舰 +4 位作者 徐传毅 刘少军 何伟 樊粤光 黄辉 《上海中医药大学学报》 CAS 2006年第3期43-45,共3页
目的:探讨强骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:将含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD和pFR-Luci报告基因及内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,检测强骨胶囊与雌激素受体的关系;MTT法检测强骨胶囊对细胞活力的影响。结果:... 目的:探讨强骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:将含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD和pFR-Luci报告基因及内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,检测强骨胶囊与雌激素受体的关系;MTT法检测强骨胶囊对细胞活力的影响。结果:低剂量(12.5ng/ml)的强骨胶囊对两种ER均无明显效果,但是高剂量(125ng/ml和1.25μg/ml)可以显著地激活ERs,并可以显著提高细胞活性。结论:强骨胶囊治疗骨质疏松的疗效可能与激活ERs的作用有关。 展开更多
关键词 强骨胶囊 质粒共转染 雌激素受体 HELA细胞 配体结合
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注意新型非甾体抗雄激素药物阿帕他胺引起的皮肤不良事件 被引量:1
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作者 陈玲玲 《中华临床免疫和变态反应杂志》 CAS 2022年第5期558-559,共2页
阿帕他胺(apalutamide)是一种新型口服非甾体抗雄激素药物,可直接与雄激素受体(androgen receptor,AR)的配体结合域结合抑制雄激素与AR的结合、AR核易位和AR介导的转录,进而诱导肿瘤细胞死亡[1]。
关键词 雄激素受体 配体结合 非甾体抗雄激素 不良事件 肿瘤细胞死亡 核易位
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棉花类固醇5α-还原酶基因单核苷酸位点的变异效应
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作者 郭宝生 师恭曜 +4 位作者 王凯辉 刘素恩 赵存鹏 耿军义 华金平 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期404-410,共7页
为了明确棉花种质资源中类固醇5α-还原酶(Steroid 5 alpha-reductase,DET2)基因单核苷酸多态性,了解核苷酸位点变异对其编码蛋白配体结合域的影响并开发功能分子标记,本研究采用同源基因特异扩增、测序的方法,筛查不同棉花材料的DET2... 为了明确棉花种质资源中类固醇5α-还原酶(Steroid 5 alpha-reductase,DET2)基因单核苷酸多态性,了解核苷酸位点变异对其编码蛋白配体结合域的影响并开发功能分子标记,本研究采用同源基因特异扩增、测序的方法,筛查不同棉花材料的DET2基因编码区突变,分析DET2基因编码蛋白质的三级结构及配体结合位点及其与纤维品质和育性的相关性。结果表明,包含陆地棉、海岛棉、雷蒙德氏棉在内的13份棉属材料DET2基因序列一致性为98.7%,编码区25个碱基易突变位点中有8个位点涉及编码氨基酸变化;该基因编码的蛋白二级、三级结构基本相似,但是配体结合位点差异较大;编码蛋白配体结合域共有8种类型,与品种间SNP组合类型完全相符。DET2基因与棉花纤维品质形成相关,但与育性无关。 展开更多
关键词 棉花 类固醇5α-还原酶基因 单核苷酸变异 配体结合
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