PPAR-γ在八眉猪不同组织中的表达差异

以八眉猪为试验材料,提取其内脏脂肪、皮下脂肪、肌肉、肾脏、肝脏、心脏、肺脏和脾脏总RNA和总蛋白质,设计合成PPAR-γ1和PPAR-γ2基因的引物,以猪β-actin基因为内参,用半定量(Semi-Quantitative,SQ)RT-PCR检测PPAR-γ1和PPAR-γ2 mRNA在以上各组织中的表达;用免疫印迹技术(Western Blot)检测以上各组织中PPAR-γ1和PPAR-γ2蛋白的表达。结果显示,PPAR-γ1 mRNA及蛋白在以上各组织均表达,在内脏脂肪和皮下脂肪组织中表达水平显著高于其他组织,在肺脏中表达水平最低;PPAR-γ2 mRNA和蛋白质高表达于内脏脂肪、皮下脂肪、脾脏和心脏,而在肺脏、肾脏、肝脏、肌肉中表达水平很低。结果提示,PPAR-γ在不同组织的表达差异,可能与其在不同组织中的功能有关。

腺病毒介导过氧化物酶体增殖物激活受体-γ1基因脑室内转染对大鼠缺血／再灌注脑的保护作用

目的研究通过脑室内途径腺病毒载体转染过氧化物酶体增殖物激活受体-γ1（peroxisome proliferater-activated receptor-γ1，PPAR-γ1）到脑的可行性，如果可行则进一步观察其对缺血，再灌注（ischemia／reperfusion，I/R）脑是否具有保护作用。方法选择90只成年雄性SD大鼠，按随机数字表法分成5组（每组18只）。第1组脑室内注入生理盐水0．1ml，第2组注入不含PPAR-γ1基因的空腺病毒载体0．1ml，第3组注入表达PPAR-γ1的腺病毒载体（adeno virusvector encodingPPAR-γ1，Adv-PPAR-γ1）0．1ml，第4组注入腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白（adv encoding enhanced green fluorescence protein，Adv-EGFP）0．1ml，第5组吡格列酮5mg／kg灌胃qd3d。3d后建立脑I／R模型。第1组为假手术组，不阻断大鼠大脑中动脉。第2、3、5组阻断大脑中动脉90min再灌注24h。采集脑组织标本，第4组免疫荧光显微镜下观察腺病毒表达情况；1、2、3、5组进行2，3，5三苯基氯化四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TrC）染色法测量脑梗死体积、伊文氏蓝法测定血脑屏障通透性、干媪重法测定脑含水量、光镜、电镜下进行病理形态学观察；脑组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性测定；用Western Blot方法检测缺血区脑组织白介素-1β（IL-1β）、细胞黏附分子-γ（inter-cellular adhesion mdecule-1，ICAM-1）、水通道蛋白-4（aquapofinprotein，AQP-4）、基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9，MMP-9）蛋白的表达。结果脑室内途径腺病毒载体转染Adv-EGFP，免疫荧光反应阳性。脑I／R后，脑梗死体积（42．3±2．6）％、血脑屏障通透性（0．0945±0．0095）、脑组织含水量（87．4±4．7）％、MPO活性明显增高（0．213±0．044），IL-1B（0．84±0．05）、ICAM-1（0．85±0．07）、AQP-4（0．8±0．06）和MMP-9（0．80±0．03）蛋白的表达增加。脑室内注射Adv-PPAR-γ1或吡格列酮灌胃均能降低脑梗死体积[（35．7±2．5）％、（32．2±5．9）％]、血脑屏障通透性（0．0774±0．0088、0．0737±0．0064）、脑组织含水量[（82．9±4．7）％、（84．5±5．5）％]、MPO活性（0．151±0．018、0．166±0．026），抑制IL-1β（0．71±0．04、0．75±0．05）、ICAM-1（0．69±0．03、0．79±0．07）、AQP-4（0．77±0．04、0．78±0．06）和MMP-9（0．76±0．06、0．77±0．05）的上调。结论通过脑室内注射腺病毒载体转染PPAR-γ1到脑的方法可行，且对I／R脑具有保护作用。