PPAR配体作用机制及新配体筛选研究进展

目的 介绍过氧化酶体增殖剂激活受体 (PPAR)的配体作用机制及其新配体的筛选。方法 Medline检索最近 5年关于PPAR与配体结合机制及新配体的研究的文献。结果与结论 PPAR各亚型配体结合区的结构差异以及与不同协同因子的相互作用可能是造成PPAR各亚型与配体特异性的主要原因 ,而已建立的一系列实验方法为筛选或合成新的PPAR高效配体提供了可能。

PPARγ配体对1型糖尿病大鼠的治疗作用探讨

目的探讨PPARγ配体罗格列酮对STZ诱导的1型糖尿病大鼠胰腺β细胞的保护作用及其机制。方法实验用STZ诱导1型糖尿病大鼠动物模型,以罗格列酮5mg.kg-1.d-1连续给药30d。记录体质量和禁食血糖的变化。治疗第31天(停药后第1天)及治疗第61天取材观察胰腺形态学变化,应用免疫组织化学染色显示胰岛β细胞和nNOS的表达情况。结果与未治疗糖尿病动物相比,罗格列酮治疗组大鼠的糖尿病体征显著减轻,胰腺未见明显的病理改变,胰岛内胰岛素阳性细胞数量增多、接近正常水平,与此同时,胰腺内一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活性降低,而nNOS表达增强。结论罗格列酮对STZ诱导的1型糖尿病大鼠胰岛有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制巨噬细胞内iNOS的活性,减轻胰岛的炎症反应,避免β细胞损害,促进胰岛功能的恢复。

PPARγ配体抑制气道肌纤维母细胞分化的作用机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)配体对气道肌纤维母细胞分化和转化生长因子β(1TGF-β1)/Smad3信号传导途径的影响。方法小鼠气道纤维母细胞原代培养,并于特定时间加入TGF-β(15mg/L)或PPARγ配体-罗格列酮(10mmol/L)或PPARγ抑制剂(10mmol/L)处理后,用Westernblot检测肌纤维母细胞的标志物-α平滑肌肌动蛋白原(αSMA)以及结缔组织基质-纤维结合蛋白和I型胶原蛋白的表达情况;并采用Westernblot、DNA凝胶电泳迁移率检测和免疫细胞化学检测对Smad3蛋白的磷酸化、与DNA结合能力和细胞核转位的影响。结果罗格列酮能抑制TGF-β1诱导的αSMA的产生,并降低纤维结合蛋白和I型胶原蛋白的表达;同时抑制Smad3的磷酸化、与DNA的结合能力和细胞核转位。PPARγ配体的抑制剂能够完全消除PPARγ配体对TGF-β1的抑制作用。结论 PPARγ配体能够通过阻断TGF-β1/Smad3信号传导通路,抑制TGF-β1诱导产生的肌纤维母细胞分化和纤维化的细胞效应。

PPAR_γ配体对人血单核细胞MMPs和TIMPs表达及活性的影响

目的探讨过氧化物酶体增生物激活受体-γ（PPARγ）配体15d-PGJ2对人血单核细胞基质金属蛋白酶及其内源性抑制物（MMPs和TIMPs）表达及活性的影响。方法 应用RT-PCR和Western blotting测定MMPs、TIMPs的基因和蛋白表达,Zymography测定MMPs活性。结果PPARγ配体15d-PGJ2可明显抑制人血单核细胞MMP-9的表达及其活性,但不影响MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表达。结论 PPARγ配对15d-PGJ2可抑制人血单核细胞MMP—9的表达及其活性,对减少动脉粥样硬化斑块局部细胞外基质降解、增强斑块稳定性可能起到有益作用。

PPARγ配体调控人胆囊上皮细胞炎性反应的实验初探

目的 :初步探讨PPARγ配体能否抑制人胆囊上皮细胞的炎症反应。方法 :行胆囊上皮细胞原代培养并鉴定 ,根据细胞生长曲线 ,在其生长高峰期 (第 5天 ) ,用 0、 10 μmol/L、 2 0 μmol/L、 30 μmol/L、 5 0 μmol/L、10 0 μmol/L的噻格列酮 (PPARγ配体之一 )处理细胞 2 4小时 ,再用人白细胞介素 (hIL) - 1β5ng/ml刺激 ,2小时后用放射免疫法测量细胞上清液中IL - 8的浓度。对 6个组别的IL - 8浓度采用双因素方差分析 ,两两比较采用最小显著差法 (LSD) ,检验水准α=0 0 5。结果与对照组相比 ,各实验组IL - 8的表达均被抑制 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1) ,实验组 5 (10 0 μmol/L)的抑制作用最明显。结论 :PPARγ配体可抑制炎性因子IL - 8在胆囊上皮细胞中的表达 。

PPARγ配体与血管内皮细胞

血管内皮细胞结构和功能的异常是糖尿病大血管动脉粥样硬化形成及微血管病变早期的关键因素.PPARγ配体除了能增强周围组织对胰岛素的敏感性、降低血糖外,还通过舒张血管、减轻炎症、抗氧化应激等作用与调节血管内皮细胞功能紧密相关.

PPARγ及其配体在恶性血液病中的研究进展

近年来随着对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)在基因和分子生物学水平上的研究深入,其作用机制及其配体的治疗作用逐渐被人们认识。PPARγ因有可能成为人类肿瘤治疗的新靶点而受到广泛关注。本文就PPARγ的结构及组织分布、功能、其配体与急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等恶性血液病关系的研究进展作一综述。

PPAR-γ配体罗格列酮对人黑素瘤细胞体外趋化功能的影响及相关机制

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)配体罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对人黑素瘤A375细胞株体外趋化功能的影响及机制。方法:体外培养人黑素瘤A375细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测RGZ对A375细胞的增殖抑制率;RT-PCR、Western-blot分别检测RGZ对A375细胞的趋化因子受体CXCR4 mRNA及CXCR4蛋白表达的影响;用Boyden小室研究RGZ对A375细胞体外趋化功能的影响。结果:MTT法检测结果显示在24 h干预点,浓度为10、25μmol/L时,RGZ的细胞毒性作用不明显(P>0.05);且RT-PCR、Western-Blot检测结果分别显示,RGZ能下调CXCR4mRNA及CXCR4蛋白的表达(P<0.01)。趋化实验显示,随着RGZ浓度的升高,穿过Boyden小室膜的A375细胞数显著减少(P<0.01)。结论:PPAR-γ配体RGZ能抑制人黑素瘤细胞的趋化功能,其机制可能与下调肿瘤细胞的CXCR4基因表达有关。

PPARγ及其配体与骨质疏松的研究进展

过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ除可以对代谢综合症进行全面干预外,尚可以抗肿瘤、抗心肌缺血再灌注损伤等。近年研究发现其对骨髓干细胞的分化方向起某些调控作用,促进成骨细胞的凋亡、影响破骨细胞活性,可能参与老年性骨质疏松、绝经后骨质疏松等的发生,但临床试验,动物及体外实验结论不一,关于PPARγ及其配体与骨质疏松症的关系有待进一步研究。

PPARγ配体结合域的表达、纯化和鉴定

提取MCF 7乳腺癌细胞的总RNA ,通过RT PCR技术扩增出hPPARγ/LBDcDNA ,并克隆于载体pGEX 1γT上 ,测序表明该序列与已报道序列相同 ,将其转入BL2 1(DE3)大肠杆菌中 ,IPTG诱导表达GST hPPARγ/LBD ,在不同培养温度或IPTG诱导浓度下 ,GST hPPARγ/LBD以可溶或包涵体形式存在 ,表达产物经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化 ,可被抗hPPARγ多克隆抗体特异识别 。

PPARγ配体罗格列酮和GW9662对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素mRNA表达的影响

目的观察PPARγ配体罗格列酮和GW9662对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素(visfatin)mRNA表达的影响,观察GW9662能否拮抗罗格列酮对visfatin的作用,以探讨PPARγ与visfatin的关系。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导其分化成熟,分别以不同浓度的罗格列酮和GW9662干预,在不同的时间段提取细胞总RNA,用RT-PCR技术检测visfatin mRNA的表达水平,以确定二者单独作用时的最佳剂量及时间。再将分化成熟的3T3-L1脂肪细胞随机分为4组:对照组:不加任何干预剂;罗格列酮组:单独加入罗格列酮;GW9662组:单独加入GW9662;罗格列酮+GW9662组:同时加入罗格列酮和GW9662共同作用;以上各组药物均使用最佳剂量,作用最佳时间后观察visfatin mRNA的表达。结果罗格列酮或GW9662单独干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,visfatin mRNA的表达水平均低于空白对照组,且当罗格列酮浓度达10μmol/L或以上、GW9662浓度达5μmol/L或以上时,其表达差异有统计学意义。用罗格列酮+GW9662共同干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,visfatin mRNA的表达水平虽比罗格列酮单独干预时有所下降,但差异无统计学意义。结论罗格列酮或GW9662均能下调成熟3T3-L1脂肪细胞visfatin mRNA的表达水平,且二者共同作用时,GW9662不能拮抗罗格列酮对visfatin表达的抑制作用。罗格列酮可能是通过非PPARγ途径或者部分通过非PPARγ途径影响visfatin的表达。

PPARγ与肺部疾病

PPAR是核受体超家族成员之一,可分为PPARα、PPARγ、PPARδ三种亚型。随着对胰岛素增敏剂尤其是噻唑烷二酮类(TZDs)药物作用机制的深入研究,人们发现PPAR就是这类药物的主要作用靶点。进一步探讨PPAR与肺部疾病的关系,可能为TZDs类药物治疗肺部炎症及肿瘤提供新的理论基础。

过氧化物酶体增殖物活化受体与免疫调节

过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARs)属于核受体超家族。新近发现PPARs在免疫细胞上广泛表达,PPARs活化后可以负性调节炎症反应基因的转录,PPAR激动剂抑制促炎症因子表达。利用更特异的PPAR配体和基因敲除技术,研究PPARs在调节炎症及免疫反应方面的重要作用,PPAR配体可能成为治疗慢性炎症性疾病的新药物。

罗格列酮对血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏TGF-β_1和α-SMA表达的影响

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体罗格列酮对日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)含量的影响。方法将30只日本血吸虫病肝纤维化小鼠均分3组:对照组,吡喹酮治疗组和罗格列酮治疗组。对照组不作任何治疗。吡喹酮治疗组用吡喹酮500 mg/(kg.d)灌胃治疗2 d,罗格列酮治疗组在吡喹酮治疗2 d后再用罗格列酮4 mg/(Kg.d)灌胃治疗6周。应用HE染色,免疫组化法及多媒体病理图文定量分析,观察罗格列酮治疗血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏的病理改变及TGF-β1和α-SMA表达的变化。结果罗格列酮能显著抑制血吸虫病小鼠肝脏纤维组织的增生,降低肝脏TGF-β1及α-SMA的表达。结论PPARγ配体罗格列酮有明显的抗日本血吸虫病肝纤维化作用,其抗纤维化机制与其抑制肝星状细胞(HSC)活化、抑制其表达α-SMA及分泌TGF-β1密切相关。

罗格列酮抗日本血吸虫病小鼠肝纤维化的实验研究

目的研究PPARγ配体罗格列酮抗日本血吸虫病肝纤维化作用。方法应用HE染色、免疫组化法及多媒体病理图文定量分析,观察罗格列酮治疗血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏的病理改变及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。结果罗格列酮治疗组小鼠肝脏纤维组织的增生明显减少,Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量明显低于对照组及吡喹酮治疗组。结论PPARγ配体罗格列酮有抗日本血吸虫病肝纤维化作用,能明显减少肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。

PPARγ配体和相关血管病变的防治

炎性反应是动脉粥样的重要发病机制之一,PPARγ配体可能能够对涉及动脉粥样硬化的多种炎性细胞和炎性介质具有调节作用,因此PPAγ配体可能缓解动脉粥样硬化的发生。另外PPARγ配体可能通过对球囊扩张术后血管平滑肌细胞增殖和迁移的抑制机制和对血管形成的调节机制而缓解动脉粥样硬化的发生及缓解动脉粥样硬化介入治疗术后的血管再狭窄问题。