基于PPAR-γ/NF-κB信号通路探讨肺心汤对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠模型的作用及机制

目的基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/核因子κB(PPAR-γ/NF-κB)信号通路探讨肺心汤(黄芪、桃仁、红花、葶苈子、赤芍等)对野百合碱诱导肺动脉高压(PAH)大鼠模型的作用及机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组(0.025 g·kg^(-1))及肺心汤低、中、高剂量组(11.7、23.4、46.8 g·kg^(-1))。采用单次腹腔注射野百合碱溶液(60 mg·kg^(-1))构建PAH大鼠模型。造模1 h后开始灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测各组大鼠的血流动力学及超声心动图指标:右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(m PAP)、右心肥厚指数(RVHI)、肺动脉加速时间(PAAT)、肺动脉射血时间(PET)、三尖瓣环缩期位移(TAPSE)、右心室舒张末期内径(RVIDd)和右心室前壁厚度(RVAWT);采用HE染色法观察肺小动脉病理改变;免疫荧光法检测大鼠肺动脉中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;ELISA法检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化和Western Blot法检测PPAR-γ/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd及RVAWT显著升高(P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著降低(P<0.01);肺小动脉血管壁明显增厚,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著升高(P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著升高(P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性表达率显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著升高(P<0.01);肺组织中PPAR-γ、IκB-α蛋白表达显著下调(P<0.01);p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd和RVAWT均显著降低(P<0.05,P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著升高(P<0.05,P<0.01);血管壁厚度明显降低,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性率表达显著升高(P<0.05,P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中PPAR-γ蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著降低(P<0.01);肺心汤高剂量组大鼠肺组织中IκB-α蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论肺心汤能改善野百合碱诱导的PAH大鼠肺动脉压力升高、右心功能障碍和肺血管重塑,其机制可能与调控PPAR-γ/NF-κB信号通路抑制炎症反应有关。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨双术抗纤方改善四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用及机制

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨双术抗纤方(黄芪、麸炒白术、柴胡、醋莪术、丹参、荔枝核)改善四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的作用及机制。方法采用皮下注射3.0 m L·kg^(-1)质量分数为40%的CCl4复制肝纤维化大鼠模型,每周注射2次,共注射8周。将SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、模型组(7只)、阳性对照组(7只,灌胃43.19 mg·kg^(-1)水飞蓟宾)、中药低剂量组(6只,灌胃4.3 g·kg^(-1)双术抗纤方颗粒)、中药中剂量组(6只,灌胃8.6 g·kg^(-1)双术抗纤方颗粒)、中药高剂量组(7只,灌胃17.2 g·kg^(-1)双术抗纤方颗粒);每日1次,连续灌胃给药4周,除空白对照组外,余各组在给药同时继续皮下注射CCl4。采用HE、Masson染色法观察肝脏组织病理变化;ELISA法检测血清Ⅳ型胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平;Western Blot法检测肝脏组织Wnt1、β-catenin、PPAR-γ蛋白表达水平;q PCR法检测肝脏组织Wnt1、β-catenin、PPAR-γm RNA表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠肝脏出现肝细胞部分坏死,正常的肝小叶结构被破坏,肝细胞索排列紊乱,中央静脉或汇管区增大,炎症细胞大量浸润,形成桥接坏死;肝脏中央静脉或汇管区胶原纤维增生明显,形成纤维间隔,纤维化评分明显升高(P<0.05);血清ColⅣ、PCⅢ、HA、LN水平明显升高(P<0.05);肝脏组织Wnt1、β-catenin蛋白及m RNA表达水平明显升高(P<0.05),PPAR-γ蛋白及m RNA表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组以及中药中、高剂量组大鼠肝细胞脂肪变性情况有所改善,坏死、炎性细胞浸润减少;肝脏纤维化程度有所改善,肝脏胶原纤维减少,纤维化评分明显降低(P<0.05);血清ColⅣ、PCⅢ、HA、LN水平明显降低(P<0.05);肝脏组织Wnt1、β-catenin蛋白及m RNA表达水平明显降低(P<0.05),PPAR-γ蛋白及m RNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论双术抗纤方有抗CCl4诱导大鼠肝纤维化的作用,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及上调PPAR-γ表达有关。

基于PPARγ/c-Ski信号通路探究黄芩苷对乙型病毒性肝炎大鼠肝功能损伤的机制

目的 基于PPAR-γ/cSki信号通路探究黄芩苷对乙型病毒性肝炎大鼠肝功能损伤的影响。方法 将大鼠随机分为sham组、HBV组、HQL组、HQM组、HQH组、PT组,每组10只。使用全自动生化检测仪检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)含量,肝脂质代谢指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)含量及肝纤维化指标透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)含量;ELISA检测血清中一氧化碳合酶iNOS、IL-6、IL-10、IL-4水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肝组织病理学变化;染色质免疫共沉淀法分析肝组织中病毒载量;蛋白质印迹检测肝组织中PPAR-γ和c-Ski蛋白表达。结果 和sham组相比,HBV组大鼠血清中ALT、AST、TC、TG、LDL、HA、LN、iNOS和IL-6含量均明显升高,HDL、IL-10和IL-4含量明显减少(P<0.05);和HBV组相比,HQL组、HQM组、HQH组和PT组大鼠血清中ALT、AST、TC、TG、LDL、HA、LN、iNOS和IL-6含量明显降低,HDL、IL-10和IL-4含量升高(P<0.05)。HBV组大鼠肝组织中HBV DNA及PPAR-γ、c-Ski蛋白表达高于sham组(P<0.05);和HBV组相比,HQL组、HQM组、HQH组和PT组大鼠肝组织中HBV DNA表达及PPAR-γ和c-Ski蛋白明显降低,且HQH组和PT组大鼠肝组织中的HBV DNA表达最低(P<0.05)。结论 黄芩苷能通过激活PPAR-γ/c-Ski信号抑制乙型病毒性肝炎大鼠的肝纤维化,对肝组织发挥保护作用。

竹节参总皂苷对DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠PPAR-γ信号通路及炎症因子的影响

目的:观察竹节参总皂苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的改善作用及对PPAR-γ信号通路和炎症因子的影响。方法:将小鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶(SASP)阳性对照组及竹节参总皂苷高、低剂量组。通过自由饮用4%DSS诱导建立小鼠UC模型,各组连续灌胃给予不同药物10 d,正常对照组和模型组给予等体积溶剂。记录疾病活动指数(DAI)。以HE染色、免疫组化、分光光度法和ELISA法分别检测结肠病理变化、PPAR-γ表达、结肠匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性和血清IL-1β、IL-10、IL-17、IFN-γ含量。结果:竹节参总皂苷能显著降低UC模型小鼠的DAI,减轻结肠黏膜损伤,降低结肠组织MPO活性和血清IL-1β、IL-17、IFN-γ含量,而升高结肠组织PPAR-γ的表达及血清IL-10的含量。结论:竹节参总皂苷可能通过上调PPAR-γ的表达,抑制促炎因子IL-1β、IL-17、IFN-γ的释放,提升IL-10水平而产生对实验性UC的保护作用。

温阳补心汤对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及MAPK/PPAR-γ信号通路的影响

目的观察温阳补心汤基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)信号通路对慢性心衰(CHF)大鼠心肌线粒体能量代谢的影响。方法在48只大鼠中随机抽取12只作为假手术组,其余运用腹主动脉缩窄法建立CHF模型,取造模成功36只大鼠,随机分为模型组、温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组。温阳补心汤组和琥珀酸美托洛尔组给予相应药物,假手术组、模型组给予等量的去离子水10 mL/(kg·d),各组均每日灌胃1次。给药后8周,观察CHF大鼠各项指标变化情况。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠外周血中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)的含量;采用彩色多普勒超声检测大鼠心室功能;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测大鼠心肌组织中p38MAPK、p-p38MAPK、PPAR-γ的蛋白表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠ATP含量显著下降,ADP、NT-proBNP含量显著升高(P <0.01);与模型组比较,温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组大鼠ATP表达升高,ADP、NT-proBNP表达下降(P <0.05)。与假手术组比较,模型组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平明显升高(P <0.05),PPAR-γ蛋白表达水平明显下降(P <0.05);与模型组比较,温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平下降(P <0.05),PPAR-γ蛋白表达水平升高(P <0.05)。琥珀酸美托洛尔组与温阳补心汤组的心室功能相关指标[左心室舒末内径(LVDD)、左心室缩末内径(LVDS)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)、左心室收缩末期后壁厚度(LVPWS)],与模型组比较差异具有统计学意义(P <0.05)。结论温阳补心汤能改善心衰,延缓病情进展,其机制可能与p38MAPK通路被抑制及PPAR-γ通路被激活,促进线粒体合成有关。

平肺复方对人肺腺癌A549细胞PPAR-γ信号通路的影响

目的研究平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖及过氧化物酶体增长因子活化受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)-γ信号通路的影响。方法运用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)比色法检测平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并添加PPAR-γ特异性阻断剂GW9662,观察PPAR-γ通路阻断后平肺复方对A549细胞生长的影响。结果平肺复方生药5 mg/ml和10 mg/ml在作用24小时、48小时和72小时表现出对A549细胞增殖的抑制作用(P<0.05);单纯加入GW9662对细胞的生长并未产生影响;加入GW9662的平肺复方仍可对细胞生长产生抑制作用(P<0.05),但这种抑制作用明显弱于平肺复方(P<0.05)。结论平肺复方的抗肿瘤作用机制可能部分涉及到PPAR-γ信号通路,但并不完全是通过这一条信号通路在发挥作用。

基于PPAR-γ/NF-κB信号通路探究芍甘附子汤对胶原诱导性关节炎大鼠的干预作用及作用机制

目的观察芍甘附子汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的干预作用并探讨其作用机制。方法Wistar大鼠随机选取12只为正常组,其余大鼠制备CIA大鼠模型。于首次免疫后第14日,依据分层分配原则将造模成功的大鼠分为模型组,芍甘附子汤低(1.05 g·kg^(-1))、中(2.1 g·kg^(-1))、高(4.2 g·kg^(-1))剂量组,雷公藤多苷片组(9 mg·kg^(-1)),每组15只。于首次免疫后第15日各组按相应剂量进行药物干预,正常组及模型组灌胃同等量生理盐水,连续4周。分别于首次免疫后第14、21、28、35、42日进行关节炎指数(AI)评分。于末次给药24 h后麻醉大鼠,收集血清,并取踝关节,采用HE染色和Micro-CT扫描观察其病理及影像学改变。检测血清PGE_(2)、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO含量,免疫组织化学法检测踝关节组织PPAR-γ、NF-κB p65、p-NF-κB p65、COX-2、iNOS蛋白表达。结果同正常组相比,模型组大鼠足跖出现明显肿胀,血清PGE_(2)、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO水平升高(P<0.01),踝关节滑膜增生,炎细胞浸润,骨质破坏,踝关节NF-κB p65、p-NF-κB p65、COX-2、iNOS蛋白表达上调,PPAR-γ蛋白表达显著降低。同模型组相比,芍甘附子汤可不同程度降低AI,降低血清PGE_(2)、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,改善踝关节病理损害,降低病理评分,下调踝关节NF-κB p65、p-NF-κB p65、COX-2、iNOS蛋白表达,上调PPAR-γ蛋白表达。结论芍甘附子汤对CIA大鼠关节肿胀及病理损害具有改善作用,作用机制可能与其调节PPAR-γ/NF-κB信号通路有关。

PPAR-γ/AP-1信号通路在相关疾病中作用的研究进展

PPAR-γ/AP-1信号通路是调控细胞增殖、分化和转移,参与炎症反应的重要信号转导途径。近年来,PPAR-γ通过直接抑制转录因子AP-1的激活或间接拮抗辅助调节因子在相关疾病中被广泛关注,本研究综述该信号通路在心血管系统、肾脏系统、免疫系统及其他系统关系的研究进展,旨在为其治疗提供新的靶点和策略。

异补骨脂素通过PPAR-γ-Axin2-Wnt信号通路调节对大鼠骨代谢的影响

目的:探讨异补骨脂素通过PPAR-γ-Axin2-Wnt信号通路调节对大鼠骨代谢的影响。方法:选择雌性大鼠40只,随机分为模型组和异补骨脂素组,各20只,实验12周后,对大鼠骨密度、骨组织形态进行观察,并检测各组大鼠血清骨代谢生化指标情况,采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测PPAR-γ、Axin2及β-catenin蛋白的表达情况。结果:12周后,模型组大鼠股骨、骨盆、脊柱及全身骨密度值均低于异补骨脂素组(P<0.05);异补骨脂素组大鼠血清钙、磷及抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase,TRACP)水平低于模型组,血清碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)水平高于模型组(P<0.05);骨组织形态计量学分析结果显示,模型组大鼠骨小梁稀疏、断裂明显,而异补骨脂素组大鼠骨小梁面积百分数和骨小梁数目明显增加,骨小梁分离度明显下降(P<0.05)。12周后,与模型组比较,异补骨脂素组PPAR-γ和Axin2蛋白水平下调,β-catenin蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:异补骨脂素可能通过抑制Axin2/PPAR-γ信号通路,激活Wnt信号通路,改善大鼠骨代谢。

PPAR-γ偶联的信号通路可能参与大鼠肝再生

目的了解PPAR-γ偶联的信号通路在大鼠肝再生(LR)中作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述通路相关基因,用RatGenome 230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生中表达情况,用真手术与手术对照比较方法确定肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中64个基因与肝再生相关。肝再生启动、G0/G1过渡、细胞增殖、细胞分化和组织结构功能重建等4个阶段起始表达的基因数为28、4、34和2,基因总表达次数为72、41、247和90,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共分为11种表达方式,表明肝再生中这些基因表达变化多样和复杂。结论PPAR-γ偶联的信号通路在肝再生早期、前期和后期促进糖元合成;在整个肝再生中抑制炎症反应,促进细胞增殖和迁移。

骨质疏松相关信号通路研究进展

骨代谢过程包括骨形成及骨吸收,当两者间的平衡被打破后便会出现骨硬化或者骨量减少甚至骨质疏松,其具体的分子调节通路不明。现代研究表明,在骨代谢过程中至少存在RANKL/RANK/OPG信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、PTH信号通路、PPAR-γ信号通路等,各个通路间还存在交叉。通过分子信号通路,可有效促进骨代谢研究,并开发具有治疗骨质疏松的新药。

PPAR—α信号通路参与高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大

目的：研究过氧化物酶体增值物激活受体-α（Peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR-α）信号转导通路在高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大中的作用。方法：利用乳鼠心肌细胞培养，以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子（atrial natriuretic factor，ANF）mRNA表达为心肌肥大反应指标，观察PPAR-α激动剂非诺贝特及其相应阻断剂MK886对高糖高胰岛素致心肌肥大作用的影响。利用Realtime—PCR方法和westemblot方法分别检测PPAR—α及其下游因子环氧化酶-2（Cyclooxygenase2，Cox-2）mRNA及蛋白的表达。结果：在高糖高胰岛素模型组（25．5mmol／L葡萄糖与0．1gmol／L胰岛素），心肌细胞表面积、总蛋白含量和ANFmRNA表达明显增加（P〈0．01）；但PPAR-αmRNA和蛋白的表达明显降低（P〈0．05）；同时，Cox-2mRNA和蛋白的表达增加，明显高于对照组（P〈0．05）。然而PPAR-α的选择性激动剂非诺贝特（10^-6、3×10^-6和10^-5mol／L）呈浓度依赖性地抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大（P〈0．01）。非诺贝特3×10^-6mol／L明显上调高糖高胰岛素模型组PPAR-αmRNA和蛋白的表达（P〈0．05），并阻遏其下游损伤性炎性因子Cox-2mRNA和蛋白的表达（P〈0．05）。同时，MK886可完全阻断非诺贝特对高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大模型组的上述改善作用（P〈0．05）。结论：PPAR-α及其下游炎症因子Cox-2参与了高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。

吡格列酮对Aβ1-42引起的大鼠海马MAP激酶信号转导通路变化的影响

目的：研究PPAR-γ激动剂吡格列酮（pioglitazone，Pio）对淀粉样β蛋白（Amyloid-β protein，Aβ）1-42所致大鼠海马损伤的保护作用及其作用机制。方法：大鼠灌胃给予Pio（20、40、80mg·kg^-1-d^-1），正常对照组和Aβ1-42损伤组大鼠灌胃给予0．2％的二甲基亚砜（Dimethy1 Sulfoxide，DMSO），24h后，左侧脑室内单次注射Aβ1-42 5μL（2．0mmol／L）制备大鼠痴呆动物模型，

基于KLF16/PPAR-α信号通路探讨参苓白术散对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏脂质代谢的影响

目的基于KLF16/PPAR-α信号通路探讨参苓白术散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组及参苓白术散低、中、高剂量组(2.685、5.369、10.738 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组7只。除正常组给予标准饲料外,其余各组小鼠均给予高脂饲料连续喂养12周,复制MAFLD模型。造模结束后开始灌胃给药,每日1次,连续5周。测定小鼠体质量及肝脏系数;采用HE及油红O染色观察小鼠肝脏组织病理变化;检测血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)及总胆固醇(TC)水平;RT-qPCR法检测肝组织中PPAR-α、KLF16、FAS、SREBP-1c mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠的体质量、肝质量及肝脏系数明显升高(P<0.05,P<0.01);血清TG、TC、ALT、AST水平显著升高(P<0.001);肝细胞胞质可见大量空泡,出现大量红染的脂滴,NAS病理评分及油红O染色IOD值显著升高(P<0.05,P<0.001);肝组织中PPAR-α、KLF16 mRNA表达显著下调(P<0.01,P<0.001),FAS、SREBP-1c mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,参苓白术散高剂量组小鼠的体质量、肝质量、肝脏系数明显降低(P<0.05);参苓白术散低、中、高剂量组小鼠的血清TG、TC、ALT水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);参苓白术散中、高剂量组小鼠的血清AST水平显著降低(P<0.01,P<0.001);各给药组小鼠肝组织病理变化有明显改善,肝细胞胞质内橘红色脂滴显著减少,参苓白术散高剂量组的NAS病理评分及油红O染色IOD值显著降低(P<0.05,P<0.01);参苓白术散低、中、高剂量组小鼠肝组织中PPAR-α、KLF16 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001),FAS、SREBP-1c mRNA表达显著下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论参苓白术散对MAFLD小鼠的肝脏脂质代谢有明显改善作用,其机制可能与转录调控核受体KLF16/PPAR-α信号通路有关。

HO-1/CO/PPAR-γ信号通路在小鼠动静脉内瘘内膜增生过程中的变化

目的观察HO-1/CO/PPAR-γ信号通路在小鼠动静脉内瘘内膜增生病理损害中的变化规律。方法选取雄性野生型小鼠随机分为模型组及对照组,每组18只。应用显微外科技术建立小鼠颈动静脉内瘘模型(模型组),对照组仅做手术切口缝合。术后21天使用过量戊巴比妥钠处死小鼠,获取血液及病理标本。应用全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、脂蛋白α、总胆红素水平;HE染色检测血管壁变化;应用分子染色方法对标记的活性氧(reactive oxygen species,ROS)进行检测;应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定目标基因血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)、过氧化物酶增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators-activated receptors-γ,PPAR-γ)及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的mRNA水平;应用Western blot法测定目标基因HO-1、PPAR-γ及MMP-9的蛋白表达;应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定HO-1/CO/PPAR-γ信号通路下游因子转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-8表达水平。结果模型组小鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和总胆红素较对照组明显降低,差异具有统计学意义[mmol/L:(3.45±0.32)比(4.03±0.16),(1.62±0.42)比(2.06±0.35),(3.87±0.30)比(5.11±0.26),(0.45±0.04)比(0.65±0.09),(11.28±1.73)比(13.47±0.87),t值分别为-6.88、-3.41、-13.25、-8.62和-4.80,P值均<0.05]。HE染色提示,模型组小鼠静脉壁内膜厚度较对照组明显增厚,血管壁中活性氧ROS水平较对照组明显升高,差异具有统计学意义[EU/mg:(99.11±6.34)比(89.71±8.41),t=3.79,P<0.05]。与对照组相比,模型组小鼠HO-1/CO/PPAR-γ信号通路目标基因及蛋白HO-1、PPAR-γ、MMP-9 mRNA表达明显升高,差异具有统计学意义[目标基因:(1.02±0.69)比(7.17±2.16),(0.96±0.04)比(6.75±0.24),(0.61±0.35)比(1.02±0.03),t值分别为11.51、100.96和4.95,P值均<0.05;目标蛋白:(0.07±0.02)比(0.41±0.01),(0.27±0.04)比(0.35±0.05),(0.12±0.02)比(0.45±0.08),t值分别为81.43、5.19和17.39,P值均<0.05]。与对照组相比,模型组小鼠HO-1/CO/PPAR-γ信号通路下游炎性因子TGF-β、IL-1β、IL-8分泌明显升高,差异有统计学意义[pg/mL:(3.52±2.92)比(27.46±2.70),(16.78±0.60)比(38.54±2.53),(35.20±1.95)比(101.71±7.75),t值分别为25.53、35.55和35.31,P值均<0.05]。结论HO-1/CO/PPAR信号通路参与了小鼠动静脉内瘘血管内膜增生发生发展过程,并通过提高目标基因、目标蛋白的表达水平,增强相关炎性因子的释放等途径保护内膜功能,减轻血管的损伤。

不同产地乌药质量评价及其改善IBS-D大鼠肠道低度炎症的机制研究

目的基于高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对10批次不同产地乌药进行质量评价,并进一步探究乌药对腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠肠道低度炎症的作用机制。方法采用HPLC对10个不同批次乌药进行质量评价。选取雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、IBS-D模型组、乌药低剂量组、乌药中剂量组、乌药高剂量组、阳性药物组。除对照组外,其余大鼠均接受“番泻叶灌胃联合束缚应激”刺激,构建IBS-D大鼠模型。乌药低、中、高剂量组大鼠分别灌胃乌药水提物(0.94、1.88、3.76 g·kg-1),阳性药物组大鼠予以匹维溴铵片水溶液(1.5 g·kg-1);而对照组和IBS-D模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,共计2周;采用HE染色、PAS染色观察大鼠结肠变化;运用免疫组织化学法和Western blot技术检测大鼠结肠组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecular-1,VCAM-1)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶(proto-oncogene tyrosine-protein kinase Src,SRC)、Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)蛋白的相对表达水平。结果相似度评价、聚类结果和主成分分析结果显示,除浙江乌药(S6)外,其余批次乌药质量从整体上而言稳定可靠。HE染色和PAS染色结果显示,与对照组相比,IBS-D模型组大鼠结肠隐窝深度明显变浅、隐窝处杯状细胞数量明显减少;与IBS-D模型组相比,中、高剂量的乌药水提物能明显改善IBS-D大鼠结肠组织隐窝深度变浅及杯状细胞减少的状态;免疫组织化学和Western blot结果显示,3个剂量组的乌药水提物均可显著增强IBS-D大鼠结肠中PPAR-γ、YAP和SRC蛋白的相对表达量(P<0.05),同时能显著降低VCAM-1蛋白的相对表达量(P<0.05)。结论不同批次的乌药化学成分和含量差异不大,乌药能显著改善IBS-D大鼠低度炎症,其作用机制可能与调控PPAR-γ/VCAM-1有关。

复方丹参片对颈动脉粥样硬化兔PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路的影响

目的探讨复方丹参片对颈动脉粥样硬化兔PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路的影响。方法高脂饲料加空气干燥法建立兔颈动脉粥样硬化模型,并用100 mg·kg^(-1)和300 mg·kg^(-1)剂量的复方丹参片进行治疗后,经耳缘静脉抽血后空气栓塞处死兔,迅速剥离颈动脉,并检测各组动物血脂含量、颈动脉病理学变化及兔颈动脉中PPAR-γ、LXR-α及ABCA1的表达。结果复方丹参片能显著降低兔血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白(P<0.01);并能抑制内膜增生,减少脂质沉积,增加PPAR-γ、LXR-α及ABCA1 mRNA及蛋白质的表达(P<0.01)。结论复方丹参片可能通过激活PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路而发挥抗动脉粥样硬化作用。

基于PPAR-γ和TLR-4/NF-κB信号通路研究狗肝菜多糖对非酒精性脂肪性肝大鼠的保护作用机制

目的:研究狗肝菜多糖对非酒精性脂肪性肝(NAFLD)大鼠的保护作用,并探索其作用机制。方法:46只SD大鼠分为正常组(13只)和高脂饲料组(33只),8 w后每组各随机抽取3只,病理检查确定NAFLD模型成功后,再将高脂饲料组分为模型组和狗肝菜多糖100、200 mg/kg组,每组10只。从第9周起,各组灌胃给予相应药物或生理盐水6 w,采用生化法检测血清中ALT和AST的活性以及肝组织中MDA、SOD和GSH-Px含量;酶联免疫吸附法检测肝组织中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、Toll样受体4(TLR-4)和磷酸化NF-κB p65蛋白表达情况。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清中ALT和AST活性以及肝组织中MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β含量均显著升高;肝组织中SOD和GSH-Px活性均显著降低;肝组织中PPAR-γ表达下调,TLR-4和磷酸化NF-κB p65蛋白表达均显著上调。与模型组比较,狗肝菜多糖各剂量组大鼠血清中ALT和AST活性以及肝组织MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β含量均明显降低,肝组织SOD和GSH-Px活性均明显增强;肝组织PPAR-γ表达上调,TLR-4和磷酸化NF-κB p65蛋白表达量均下调。结论:狗肝菜多糖对NAFLD大鼠有一定的保护作用,其机制可能与调节PPAR-γ和TLR-4/NF-κB信号通路有关。

藏药绿萝花提取物对2型糖尿病肝损伤大鼠的影响及机制

目的研究藏药绿萝花提取物(D101大孔树脂60%乙醇洗脱部位,D60)对2型糖尿病肝损伤大鼠的影响及机制。方法采用高糖高脂饲料持续喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg·kg^(-1))一次性腹腔注射法建立2型糖尿病肝损伤大鼠模型。将40只雄性SD大鼠随机分为模型组、D60低剂量组(0.07 g·kg^(-1))、D60中剂量组(0.14 g·kg^(-1))和D60高剂量组(0.28 g·kg^(-1)),每组10只;灌胃给药,每天1次,连续干预42 d;另选取10只SD大鼠作为正常组。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)值、体质量及肝质量指数;采用苏木精-伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化;检测各组大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)的水平;采用Western Blot法检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、核转录因子κB(NF-κB)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠的FBG值显著升高(P<0.01),体质量显著降低(P<0.01),肝质量指数显著升高(P<0.01);大鼠可见肝小叶结构破坏,出现细胞空泡、肝索排列紊乱、炎性细胞浸润等病理学改变;大鼠血清中TC、TG、ALT、AST、TBIL、TBA水平均显著升高(P<0.01);大鼠肝组织中PPAR-γ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下调(P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,D60各剂量组大鼠的FBG值均显著降低(P<0.01),体质量均显著升高(P<0.01),D60中、高剂量组大鼠的肝质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);D60各剂量组大鼠的肝小叶结构较完整,肝索排列趋于整齐,炎性细胞浸润有不同程度减轻;大鼠血清中的TC、TG、ALT、AST、TBIL、TBA水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);D60各剂量组大鼠肝组织中p-AMPK/AMPK蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达显著下调(P<0.01),D60中、高剂量组大鼠肝组织中PPAR-γ蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论藏药绿萝花提取物可降低2型糖尿病肝损伤大鼠的血糖水平并改善肝损伤,其机制可能与调控AMPK/PPAR-γ/NF-κB信号通路有关。

罗格列酮抑制PDGF诱导的胆管成纤维细胞增殖的分子机制

目的探讨罗格列酮是否通过活化过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators activated receptor-γ,PPAR-γ),抑制血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)刺激的胆管成纤维细胞增殖,并揭示其发挥作用的分子信号机制。方法以PDGF-AA刺激原代分离并培养的大鼠胆管成纤维细胞增殖,罗格列酮干预并检测PPAR-γ活性。于PDGF-AA刺激细胞前2 h予以LY294002、GW9662抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶-B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase-B,PI3K/AKT)、PPAR-γ信号通路活性。采用Brdu-掺入法检测胆管成纤维细胞增殖;免疫印迹法检测S-期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,skp2)及磷酸化-AKT(p-AKT)的表达;PPAR-γ活性ELISA试剂盒检测PPAR-γ活性。结果PDGF-AA呈剂量依赖性刺激大鼠胆管原代成纤维细胞增殖;罗格列酮显著激活PPAR-γ并抑制PDGF诱导的细胞增殖;采用PPAR-γ抑制剂GW9662预刺激细胞,可逆转罗格列酮对细胞增殖的抑制作用。罗格列酮激活的PPAR-γ通过抑制PDGF刺激的AKT磷酸化、skp2表达而抑制细胞增殖,通过抑制PPAR-γ活性(GW9662刺激细胞)可显著逆转罗格列酮的上述作用。结论罗格列酮通过激活PPAR-γ,抑制PDGF诱导的AKT磷酸化及skp2表达,从而抑制胆管成纤维细胞增殖。